FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / The Lippia alba (Mill.) N. E. Brown species inhabits almost all regions of Brazil, which is plenty used in popular medicine. Studies show that between the Brazilian Northeast three chemotypes of L. alba, the chemotype II (OELaII), produces in its leaves, essential oil with the largest and broadest antimicrobial potential. The objective of this study was to evaluate the interference of the OELaII in the Oxacillin activity and its mechanism of action against Staphylococcus aureus. The antimicrobial activity was performed by determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) by broth microdilution methods of culture and spreading on the surface of agar Plate-Count, respectively. The evaluation of the OELaII interference on antimicrobial oxacillin activity and other antibiotics was performed by using methodology changed disk diffusion. The checkerboard method, calculation of Fractional Inhibitory Concentration Indices and graphing Isobologramas was used to assess the interference OELaII the antimicrobial activity oxacillin. The study of the OELaII mechanism of action on strains of S. aureus was performed by evaluating the OE antimicrobial activity in the phases of exponential growth and stationary as well as by the action of chloramphenicol on the exponential growth. The effect of OELaII, oxacillin and OELaII-OXA exposure time, on strains of S. aureus was observed by tracing curves time of death, was considered synergistic association was found that a reduction in the number of viable cells after 24-48 hours when compared to each compound alone. The results revealed that the MIC and MBC OELaII to the strains of S. aureus oxacillin resistant (ORSA) are equal or very close to those observed for susceptible strains (UR) ranging from 0.312 to 1.25 mg / ml and 1.25 to 5.0 mg / mL for the first, and 0.312 -0.625 mg / mL and 0.625 to 2.5 mg / mL for the second. Oxacillin to the values obtained were 6.25 to 200 mg / ml and 25 and 400 mg / mL and 0.390 to 3.12 for ORSA mg / mL and 0.781 to 6.25 mg / mL for the UR. The study of the evaluation of synergism using the Kirby-Bauer method and checkerboad showed that the interference exerted by the essential oil on the antimicrobial action vary with the type of antibiotic and the type of strain tested. Isobologram charts obtained by checkerboard method suggests a synergism between good and OELaII Oxacillin for all the microorganisms tested. The study of the mechanism of action on inhibition OELaII /death ORSA strains, it was found that the OELaII reduced the number of viable cells in any growth stage. The same was not observed when cell division was halted by the presence of chloramphenicol, suggesting that OE acts mainly in the exponential growth phase (intense cell division). The death curve by microbial activity and OELaII Oxacillin showed a synergistic effect for the association OELaII-OXA, with a logarithmic decrease significantly when compared to treatment done alone. Given this biological potential, this study suggests that the Lippia alba can be used as a pharmaceutical ingredient in preparations of association with antimicrobial drugs in order to diminish the toxicity and increase its spectrum. However, there is the importance of studies on the elucidation of the different molecular targets through knowledge of its mechanism of action and toxicity testing in vitro, thus providing the safety and therapeutic efficacy of this important plant species users. / A espÃcie Lippia alba (Mill.) N. E. Brown habita praticamente todas as regiÃes do Brasil, onde à muito empregada na medicina popular. Estudos mostram que, entre os trÃs quimiotipos de L. alba do Nordeste Brasileiro, o quimiotipo II (OELaII), produz, em suas folhas, o Ãleo essencial com o maior e mais amplo potencial antimicrobiano. O objetivo deste estudo foi avaliar a interferÃncia do OELaII na atividade de Oxacilina e o seu mecanismo de aÃÃo frente a cepas de Staphylococcus aureus. A avaliaÃÃo da atividade antimicrobiana foi realizada pela determinaÃÃo da ConcentraÃÃo InibitÃria MÃnima (CIM) e ConcentraÃÃo Bactericida MÃnima (CBM), pelos mÃtodos de microdiluiÃÃo em caldo de cultura e espalhamento na superfÃcie do Ãgar Plate-Count, respectivamente. A avaliaÃÃo da interferÃncia do OELaII na atividade antimicrobiana da Oxacilina e outros antibiÃticos de uso foi realizada pela metodologia de disco-difusÃo modificado. O mÃtodo de Checkerboard, cÃlculo dos Indices da ConcentraÃÃo InibitÃria Fracionada e construÃÃo de grÃficos Isobologramas foi utilizado na avaliaÃÃo da interferÃncia do OELaII na atividade antimicrobiana da Oxacilina. O estudo do mecanismo de aÃÃo do OELaII sobre cepas de S. aureus foi realizado pela avaliaÃÃo da atividade antimicrobiana do OE nas fases de crescimento exponencial e estacionÃrio, bem como pela aÃÃo do cloranfenicol sobre o crescimento exponencial. O efeito do tempo de exposiÃÃo ao OELaII, Oxacilina e OELaII-OXA sobre cepas de S. aureus foi verificado pelo traÃado das curvas de tempo de morte, sendo considerado sinergismo as associaÃÃes em que foi verificado uma reduÃÃo do nÃmero de cÃlulas viÃveis, apÃs 24-48 horas quando comparado a cada composto isoladamente. Os resultados obtidos revelaram que a CIM e CBM do OELaII para cepas de S. aureus oxacilina-resistente (ORSA) sÃo iguais ou muito prÃximas Ãquelas constatadas para as cepas sensÃveis (OSSA), variando de 0,312-1,25 mg/mL e 1,25-5,0 mg/mL para a primeira; e 0,312-0,625 mg/mL e 0,625-2,5 mg/mL para a segunda. Para a Oxacilina os valores encontrados foram de 6,25-200 mg/mL e 25 e 400 mg/mL para as ORSA e 0,390-3,12 mg/mL e 0,781-6,25 mg/mL para as OSSA. O estudo da avaliaÃÃo do sinergismo, pelo mÃtodo de Kirby-Bauer e por checkerboad, mostrou que a interferÃncia exercida pelo Ãleo essencial sobre a aÃÃo dos antimicrobianos varia de acordo com o tipo de antibiÃtico e o tipo de cepa testada. Os grÃficos de isobolograma obtidos pelo mÃtodo de checkerboard sugerem um bom sinergismo entre o OELaII e a Oxacilina para todos os micro-organismos testados. Pelo estudo do mecanismo de aÃÃo do OELaII na inibiÃÃo/morte de cepas ORSA, verificou-se que o OELaII reduziu o nÃmero de cÃlulas viÃveis em qualquer estÃgio de crescimento. O mesmo nÃo foi verificado quando a divisÃo celular foi interrompida pela presenÃa de cloranfenicol, sugerindo que o OE age, principalmente, na fase exponencial de crescimento (intensa divisÃo celular). A curva de morte microbiana pela atividade do OELaII e Oxacilina, mostrou um efeito sinÃrgico para a associaÃÃo OELaII-OXA, com uma reduÃÃo logarÃtima significativa, quando comparado ao tratamento feito isoladamente. Diante desse importante potencial biolÃgico, este estudo sugere que a Lippia alba possa ser utilizado como insumo farmacÃutico em preparaÃÃes de associaÃÃo com medicamentos antimicrobianos visando a diminuir a toxicidade e aumentar o seu espectro de aÃÃo. Todavia, surge a importÃncia de estudos sobre a elucidaÃÃo dos diferentes alvos moleculares atravÃs do conhecimento do seu mecanismo de aÃÃo, bem como testes de toxicidade in vitro, oferecendo assim, seguranÃa e eficÃcia terapÃutica aos usuÃrios dessa importantes espÃcie vegetal
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:4865 |
| Date | 19 January 2012 |
| Creators | Larissa Queiroz Rocha |
| Contributors | Nadia Accioly Pinto Nogueira, Maria Goretti Rodrigues de Queiroz, Thalles Barbosa Grangeiro |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em CiÃncias FarmacÃuticas, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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