CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O uso consequente e contÃnuo dos antimicrobianos levaram ao surgimento de patÃgenos potencialmente letais. O grupo de micro-organismos ESKAPE (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa e Enterobacter sp.) se destaca perante os demais, onde as infecÃÃes por Staphylococcus aureus se sobressaem como a principal causa de infecÃÃes sistÃmicas, sendo o Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (SARM) um dos principais responsÃveis por estas infecÃÃes no Brasil. Dessa forma, a emergÃncia de cepas com sensibilidade reduzida acompanhada de uma terapia antimicrobiana limitada faz com que seja necessÃria uma busca por novas opÃÃes terapÃuticas. No presente trabalho, foram analisadas leveduras isoladas da regiÃo nordeste do Brasil, mais especificamente no estado do CearÃ, com o objetivo de buscar metabÃlitos antimicrobianos com atividade anti-SARM, bem como a descriÃÃo de um eventual mecanismo de aÃÃo. Foram isoladas 13 leveduras as quais foram acondicionadas em condiÃÃes de cultivo distintas, a fim de otimizar o crescimento dos isolados de leveduras. Em seguida os extratos acetoetÃlicos obtidos a partir das leveduras, foram exploradas afim de verificar se produziam metabÃlitos secundÃrios com propriedades antimicrobianas. 59% (11) dos extratos obtidos foram ativos contra bactÃrias Gram positivas e 32% (7) contra bactÃrias Gram positivas e Gram negativas. Os extratos mais ativos apresentaram atividade contra SARM e tiveram CIM que variaram de 34-192 Âg/mL. A anÃlise por citometria de fluxo revelou que esses extratos foram capazes de causar danos a membrana plasmÃtica e promover fragmentaÃÃo do DNA bacteriano, levando a cÃlula à morte celular por apoptose. Nos ensaios citotÃxicos, utilizando o teste do MTT com cÃlulas de leucÃcitos humanos, os extratos mostraram baixa citotoxicidade. As anÃlises quÃmicas revelaram estruturalmente diversos metabÃlitos secundÃrios, incluindo os compostos hexahidro-3-(fenilmetil)-pirrolo[1,2-a] pirazina-1,4-dione e o Ãcido lÃurico, jà descritos na literatura por suas propriedades contra Staphylococcus aureus sensÃveis à meticilina (MSSA) e SARM, bem como outros metabÃlitos conhecidos foram identificados nos extratos restantes, sugerindo que estas leveduras podem produzir molÃculas promissoras. Dentro deste contexto, a atividade antimicrobiana e o baixo potencial citotÃxico demonstrado por esses extratos revelaram uma classe de compostos quÃmicos promissores para desenvolvimento de novos antibioticos. No entanto, mais estudos farmacolÃgicos serÃo feitos para confirmar estes dados. / The consequent and continuous use of antimicrobials led to the emergence of potentially lethal pathogens. ESKAPE (Enterococcus faecium, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumanii, Pseudomonas aeruginosa e Enterobacter sp.) microorganisms group stands towards others, in which Staphylococcus aureus infections stand out as the leading cause of systemic infections, with SARM being a major responsible for these infections in Brazil. Thus, the emergence of strains with reduced sensitivity accompanied by a limited antimicrobial therapy makes the search for new therapeutic options necessary. In this study, isolate yeasts from the northeaster region of Brazil, more specifically in Cearà state, were analysed in order to find antimicrobial metabolites with anti-SARM activity, as well as to find a description of a possible mechanism of action. In this paper, 13 yeasts were isolated and conditioned in different growing conditions, in order to optimize the growth of the isolates. In addition, it was explored whether extracts from yeast produced new secondary metabolites with antimicrobial properties. 59% (11) of the obtained extracts were active against Gram positive bacteria and 32% (7) were active against Gram positive and Gram negative bacteria. These more active extracts showed activity against SARM and had MIC ranging between 34-192 Âg/mL. Analysis by flow cytometer showed that these extracts were capable of causing damage to the plasma membrane and of promoting bacterial DNA fragmentation, leading the cell to cell death by apoptosis. In cytotoxic tests using the MTT test with human leukocyte cells, the secondary metabolites showed low cytotoxicity. Chemical analysis revealed structurally different secondary metabolites, including the compounds pyrrolo [1,2-a] pyrazine-1,4-dione, Hexahydro-3- (phenyl methyl) Laurie acid and, as described in the literature for their properties against MSSA and SARM as well as other known metabolites were identified in the remaining extracts, suggesting that these strains can produce new molecules. Within this context, the antimicrobial activity and the low cytotoxic potential demonstrated by these extracts reveal a class of promising chemical compounds to the development of new antibiotics. However, more pharmacological studies will be done to confirm these data.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:9875 |
| Date | 03 July 2015 |
| Creators | JoÃo Batista de Andrade Neto |
| Contributors | HÃlio Vitoriano Nobre JÃnior, Teresa Maria de Jesus Ponte Carvalho, Hemerson Iury Ferreira MagalhÃes, Bruno CoÃlho Cavalcanti |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Microbiologia MÃdica, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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