Šiame darbe buvo palygintas skirtingo dydžio fluoresceino izo- tio- cianin- (FITC) dekstranų molekulių pernašos efektyvumas naudojant elektroporaciją (vienas 800 V/cm arba 1500 V/cm amplitudės stačiakampis impulsas, impulso trukmė 100 μs ir 0.5 ms) ir sonoporaciją (3 MHz, 100% veikimo ciklas, 500 kPa neigiamu akustiniu slėgis, poveikio trukmė 1-10s. Darbo tikslas – nustatyti optimalias mažų molekulių pernašos į ląsteles elektroporacijos ir sonoporacijos sąlygas, siekiant tolimesniuose tyrimuose apjungti šias dvi pagal metodiką kardinaliai besiskiriančias permeabilizacijos kryptis taip, kad būtų pasiektas sinerginis arba suminis permeabilizacijos efektas.
Eksperimentai atlikti naudojant Kiniško žiurkėno kiaušidžių (CHO) ląstelės. Naudojant fluorescencinės mikroskopijos metodiką, pernašos efektyvumas įvertintas pagal fluoresceinu nudažytų ląstelių skaičiaus procentinę išraišką. Į ląsteles įvestos 4, 10, ir 70 kDa (atitinkamai 1.4, 2.3 ir 6 nm hidrodinaminio spindulio) FITC dekstranų molekulės, pagal kurių patekimą į ląstelių vidų buvo interpretuojamas susidariusių porų dydis. Sonoporuotų ląstelių skaičius mažėjo didėjant įvedamų fluorescuojančių molekulių matmenims. Didžiausias sonoporuotų ląstelių pralaidumas nustatytas iki 2.3 nm hidrodinaminio spindulio (4 ir 10 kDa FITC dekstranų) molekulėms, jos į ląsteles galėjo difunduoti praėjus 5 min po sonoporacijos. Naudojant elektroporaciją, ar sonoporaciją magnetiniame lauke, visų dydžių FITC dekstranų pernaša į ląsteles buvo... [toliau žr. visą tekstą] / The aim of the study was to evaluate efficiency of intracellular transfer of FITC dextrans using sonoporation and electroporation in dependence of FITC dextran hydrodynamic radius. The results have shown that in comparison to electroporation (one square-wave pulse, of 1500 V/cm pulse strength, 100 - 500 µs pulse duration), sonoporation (3 MHz, 100% DC, at 500 kPa peak negative pressure) was more efficient for transfer of all sizes FITC dextrans. The results also demonstrated that after cell sonoporation large pores, allowing to pass 70 kDa FITC dextran, completely resealed short after sonoporation (< 1 s). The pores allowing to pass 10 and 4 kDa FITC dextrans completely resealed during 5 and 10 min. respectively. In addition, we applied static magnetic field to examine the US iduced delivery of FITC dextrans into cells, however observed no significant effect.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LABT_ETD/oai:elaba.lt:LT-eLABa-0001:E.02~2013~D_20130617_114258-06470 |
| Date | 17 June 2013 |
| Creators | Bucka, Audrius |
| Contributors | Tamošiūnas, Mindaugas, Rodaitė, Raminta, Šatkauskas, Saulius, Vytautas Magnus University |
| Publisher | Lithuanian Academic Libraries Network (LABT), Vytautas Magnus University |
| Source Sets | Lithuanian ETD submission system |
| Language | Lithuanian |
| Detected Language | Unknown |
| Type | Master thesis |
| Format | application/pdf |
| Source | http://vddb.laba.lt/obj/LT-eLABa-0001:E.02~2013~D_20130617_114258-06470 |
| Rights | Unrestricted |
Page generated in 0.0023 seconds