L'objectif de ce projet a été la production des anticorps monoclonaux dirigés contre le cytomegalovirus (CMV) pour fin d'utilisation potentielle en diagnostic et/ou l'utilisation comme outil pour etudier les aspects fondamentaux du CMV. Des anticorps monoclonaux ont été obtenus par fusion de lymphocytes de souris (immunisées par quatre injections intrapéritonéales de 500 mg à intervale de deux semaines) et des cellules de mylome de souris (NSO) maintenues en culture exponentielle. Le dépistage des clones sécréteurs a été effectué par ELISA et immunofluorescence (IF). Les hybridomes intéressants ont été clonés par dilution limite puis congelés dans l'azote liquide et injectés par voie intrapéritonéale chez des souris (BALB/c), traitées avec une injection intrapéritonéale de 0.7 ml de pristane (2,4,10,14-Tetramethylpentadecane) dix jours auparavant, pour la production de liquide ascitique. Parmi les clones sélectionnés, un seul s'est révélé d'un grand intérêt. Le clone CLB-1 s'est révélé d'une grande reactivité et d'une grande spécificité contre le CMV. Le liquide ascitique produit par les cellules monoclonales CLB-1 a été testé et les aspects suivants des réactions entre le CLB-1 et le CMV ont été vérifiés: (a) Reactivité et spécificité de l'anticorps contre le CMV. Pour étudier ce phénomène, l'anticorps monoclonal (CLB-1) a été testé par IF (en dilution de 1:100) contre des cellules fibroblastiques infectées par le CMV (AD169) ou par l'Herpès simplex type-1 ou type-2. Les résultats ont montré une réaction positive avec les cellules infectées par le CMV (AD169) et négative avec les cellules non-infectées ou infectées par l'Herpès sipmlex type-1 ou type-2. (b) La capacité de cet anticorps (CLB-1) pour la detection des isolées cliniques de CMV a été vérifié. L'anticorps monoclonal a détecté toutes les isolées cliniques trouvés positives au CMV. (c) Pour étudier la cinétique de la synthèse de la protéine contre lequel l'anticorps monoclonal est dirigé, le CLB-1 a été testé en IF avec des cellules fibroblastiques infectées avec le CMV à des temps différents après l'infection. Les résultats ont montré une réaction positive entre 72 et 96 heures après 11 infection prouvant ainsi que la protéine contre laquelle CLB-1 est dirigé est une protéine tardive. (d) La capacité neutralisante de 11 anticorps a été vérifiée et il a été prouvé que ce derniér neutralise le virus à une dilution de 1:100 comparativement au sérum humain ayant une capacité neutralisante à une dilution de 1:5. (e) Finalement le test d'immunodiffusion double sur gel d1 agarose a montré que 1'anticorps monoclonal CLB-1 est de type IgGl. Plusieurs essais ont été effectués afin de déterminer le poids moléculaire de la (les) protéine(s) contre laquelle 11 anticorps CLB-1 est dirigé. Par immunoblotting, il nous a été impossible d1 identifier cette (ces) protéine (s). La raison probable est la destruction ou la modification de 11 épitope dans le processus de préparation de 11 antigene. Il a été mentionné que la majorité des anticorps monoclonaux ne précipitent pas les antigene contre lesquels ils sont dirigés (Carter and Ter Meulen, In advances in virus research. 1984, 29: 95-130). En conclusion nous avons produit un anticorps monoclonal contre le CMV, cet anticorps peut nous aider pour les diagnostic et probablement pour le traitement de 1'infection virale de CMV. / Fusions of spleen cells obtained from mice immunized with human cytomegalovirus (CMV) and a mouse myeloma cell line were performed. One monoclonal antibody, CLB-1 was obtained from the four fusions performed. The following aspects of the reaction of the monocolona1 antibody CLB-1, with CMV were investigated: (a) The reactivity and specificity of CLB-1 with CMV; (b) the ability of the CLB-1 monoclonal antibody to detect clinical isolates of CMV; (c ) the kinetics of synthesis of the protein against which the CLB-1 monoclonal antibody reacts ; (d) the ability of the CLB-1 to neutralize CMV; and (e) some characteristics of this monoclonal antibody. The data obtained showed that the CLB-1 monoclonal antibody detected cells infected with CMV A D16 9 , the strain which was used as the immunizing antigen. The CLB-1 antibody showed a high degree cf specificity for the CMV as it did not react with the herpes simplex type-1, herpes simplex type-2 infected cells nor with uninfected human fibroblasts. From the kinetic experiments, the data obtained showed that this monoclonal antibody was directed against a late protein(s) that appeared between 72h and 96h post-infection. The CLB-1 antibody neutralized the virus completely at a dilution of 1:100 of an acitis fluid preparation. Using the double immunodiffusion method, the CLB-1 antibody was found to belong to the IgGl sub-class of immunoglobulins / Montréal Trigonix inc. 2018
| Identifer | oai:union.ndltd.org:LAVAL/oai:corpus.ulaval.ca:20.500.11794/33557 |
| Date | 12 February 2019 |
| Creators | Al-Halabi, Mohamed Fawaz |
| Contributors | Letarte, Robert, Patel, Pravin |
| Source Sets | Université Laval |
| Language | English |
| Detected Language | French |
| Type | mémoire de maîtrise, COAR1_1::Texte::Thèse::Mémoire de maîtrise |
| Format | xii, 80 f., application/pdf |
| Rights | http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 |
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