Memoria para optar al título profesional de: Ingeniero Agrónomo / Botrytis cinerea Pers., hongo fitopatógeno de más de doscientas especies vegetales, es el
causante de la “Pudrición Gris” que es la enfermedad más importante que afecta a la uva de
mesa en Chile. El control de esta enfermedad, se basa principalmente en el uso de
fungicidas botryticidas. Sin embargo, año a año, se incrementan las poblaciones resistentes
a estos productos logrando infectar las estructuras florales, para luego permanecer en estado
latente hasta la madurez de la baya, desarrollando, finalmente, pudriciones durante el
periodo de pre y poscosecha.
Con objeto de llevar a cabo estudios epidemiológicos en uva de mesa, se marcaron nueve
aislados de Botrytis cinerea (Wild-type-WT), de los cuales tres eran resistentes a
fenhexamid (HydR3+, CE
50
9,64 µg/ml) y dos sensibles (HydS, CE
50
0,09 µg/ml), siendo
uno de estos últimos del tipo multidroga MDR1; y otros dos eran resistentes a iprodione
(Ip+, CE
50
5,48 µg/ml) y dos sensibles a esta molécula (Ip-, CE
50
0,71 µg/ml). Mediante la
estandarización del protocolo para la transformación genética con la bacteria Rhizobium
radiobacter (=Agrobacterium tumefaciens) cepa GV3101 con el vector pCAMgfp se logró
la transformación de todos los aislados analizados. Los aislados transformados (mutantes)
expresaron el gen de la proteína fluorescente verde (Green Fluorescent Protein, GFP-sgfp)
y el de resistencia a higromicina (hph) incluso tras pruebas de estabilidad mitótica. Una vez
transformados se evaluó el comportamiento morfofisiológico de los aislados mutantes. Para
ello, se analizaron los aspectos de conidiogénesis, desarrollo miceliar, formación de
esclerocios, nivel de agresividad/virulencia, expresión de la fluorescencia y mantención de
las características de resistencia y/o sensibilidad a las moléculas fungicidas evaluadas. El
análisis microscópico de la fluorescencia reveló la expresión constitutiva de la proteína y
mediante PCR, con partidores específicos, se determinó la presencia del gen sgfp en todos
los aislados analizados. Se mantuvo la correspondencia genotípica en todos los aislados y
hubo escasas variaciones en los aspectos morfológicos y fenotípicos de los mutantes
respecto sus WT. Finalmente, ocho aislados mantuvieron las mismas características
morfofisiológicas que sus WT por lo que podrían ser empleados en estudios de interacción
hongo-hospedero así como epidemiológicos, fundamentalmente en relación al estado de
latencia. / Botrytis cinerea Pers., plant pathogen fungus over two hundred plant species, is the causal
agent of the "gray mold", which is the most important disease that affects the table grapes
in Chile. The control of this disease on grapevine, is mainly based on the use of fungicides
botryticidas. Nevertheless, year after year, the resistant populations increase to this
products, this will achieve the infection of floral structures, in order to remain in latent
status until grape berry ripening, finally developing rots during pre and postharvest.
To accomplish epidemiological studies in grapevines, were marked nine isolates of Botrytis
cinerea (Wild type-WT), three of them were fenhexamid resistant (HydR3+, EC
50
9,64
µg/ml), two sensitive (HydS, EC
50
0,09 µg/ml), being one of those who was multidrug type
MDR1; others two were resistant to iprodione (Ip+, EC
50
5,48 µg/ml) and two sensitive (Ip-
EC
50
0,71 µg/ml). By standardizing of the protocol for genetic transformation with the
bacterium Rhizobium radiobacter (=Agrobacterium tumefaciens) strain GV3101 with
vector pCAMgfp the transformation of all isolates tested were achieved. The transformed
isolates (mutants) expressed the gene for green fluorescent protein (Green Fluorescent
Protein, GFP-sgfp) and hygromycin resistance (hph) even after mitotic stability test. Once
transformed the morphophysiological behavior of mutant isolates were evaluated. For this,
the aspects of conidiogenesis, mycelial growth, the formation of sclerotia, aggressiveness
level/virulence, expression and maintenance characteristics of the fluorescence, of
resistance and/or sensitivity to molecules fungicides tested were evaluated. Microscopic
analysis of fluorescence revealed the constitutive expression of the protein and by PCR
with specific primers, the presence of the sgfp gene in all isolates tested were determined.
Genotypic correspondence in all isolates were maintained and there were few variations in
morphological and phenotypic aspects of the mutants compared with their WT. Finally,
eight isolates maintained the same morphophysiological characteristics, that their WT,
consequently they could be used in studies of fungus-host interaction as well as
epidemiological, mainly in relation to latency.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UCHILE/oai:repositorio.uchile.cl:2250/148219 |
| Date | January 2013 |
| Creators | Navarrete Jeldres, Humberto Simón |
| Contributors | Auger Saavedra, Jaime, Esterio Grez, Marcela, Montealegre A., Jaime, Salazar Guerrero, Osvaldo |
| Publisher | Universidad de Chile |
| Source Sets | Universidad de Chile |
| Language | Spanish |
| Detected Language | English |
| Type | Tesis |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Chile, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/cl/ |
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