Tesis entregada a la Universidad de Chile en cumplimiento parcial de los requisitos para optar al grado de Doctor en Ciencias, mención Microbiología. / El virus de la inmunodeficiencia humana de tipo 1 (VIH-1) es un gran
problema de salud a nivel mundial. Durante años se ha estudiado su ciclo
replicativo con el objeto de generar estrategias que permitan inhibir su
multiplicación. Se ha descrito que el virus genera tres clases de transcritos,
de 2-, 4- y 9-kb, los cuales son producidos mediante corte y empalme
alternativo. El transcrito de 9-kb, o ARN mensajero completo (ARNmc), es
traducido por la maquinaria celular para producir las poliproteínas
estructurales Gag y Gag-Pol. El ARNmc ha sido foco de especial interés
debido a los mecanismos no convencionales que utiliza para asegurar su
expresión, entre los cuales destacan su exportación nuclear y traducción.
Mientras la exportación nuclear está regulada por la proteína viral Rev y la
carioferina celular CRM1, se ha descrito que el ARNmc puede ser traducido
por mecanismos que son dependientes e independientes de la estructura
cap presente en el extremo 5´. Este proyecto se enfocó en estudiar el rol de
dos componentes del complejo nuclear de unión a cap (CBP80 y CTIF) en la
síntesis de la proteína estructural Gag a partir del ARNmc de VIH-1. En este
trabajo, mostramos que CBP80 estimula la síntesis de Gag mediante la
estimulación de la acumulación del ARNmc en el citoplasma y un aumento
de la eficiencia de la traducción, esto en un mecanismo que es dependiente
de Rev. También observamos que el factor CTIF, a diferencia de CBP80, inhibe la síntesis de Gag, principalmente impidiendo la traducción del
ARNmc. Nuestros resultados señalan que CTIF, a través de su dominio Nterminal,
impide la asociación entre CBP80 y Rev, que sería relevante para
la traducción del ARNmc e induce la acumulación de esta proteína viral en el
citoplasma celular. Finalmente, observamos que el efecto inhibitorio
producido por CTIF es conservado en VIH-2, pero no en el virus de la
leucemia murina (MLV). / Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) is a major health problem
worldwide. The replication cycle of the virus has been studied for several
years with the aim of generate strategies to interfere with its multiplication. It
has been described that the virus produces three different classes of
transcripts of 2-, 4-, and 9-kb in size, which are generated by alternative
splicing. The 9-kb transcript or full-length unspliced mRNA (usmRNA) is
translated to generate the structural polyproteins Gag and Gag-Pol. The
usmRNA has been a focus of special interest from many years due to its
ability to exploit non-conventional mechanisms of nuclear export and
translation to ensure its expression. As such, while nuclear export is
regulated by the viral protein Rev and the cellular karyopherin CRM1, it has
also been described that the usmRNA is translated by cap-dependent and
cap-independent mechanisms. The goal of this project was to study the role
of two components of the nuclear cap-binding complex (CBP80 and CTIF) on
the synthesis of the structural protein Gag from the usmRNA of HIV-1. In this
work, we show that CBP80 stimulates the synthesis of Gag by stimulating the
accumulation of the usmRNA in the cytoplasm as well as by an increasing
the efficiency of translation, all this in a Rev-dependent mechanism. We also
observed that the CBC co-factor CTIF, unlike CBP80, inhibits the synthesis
of Gag, mainly preventing the translation of the usmRNA. Our results indicate that CTIF, through its N-terminal domain, prevents the association between
CBP80 and Rev, which would be relevant for the translation of the usmRNA.
We also observed that CTIF induced the accumulation of Rev in the cellular
cytoplasm. Finally, we observed that the inhibitory effect of CTIF is
conserved in HIV-2, but not in the murine leukemia virus (MLV).
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UCHILE/oai:repositorio.uchile.cl:2250/168270 |
| Date | 04 1900 |
| Creators | García de Gracia, Francisco Javier |
| Contributors | Soto Rifo, Ricardo, Spencer, Eugenio, López-Lastra, Marcelo, Sandino, Ana María, Orellana, Omar, Universidad de Chile. Facultad de Ciencias. Escuela de Postgrado |
| Publisher | Universidad de Chile. |
| Source Sets | Universidad de Chile |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | Tesis |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Chile, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/cl/ |
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