Título de Ingeniero en Biotecnología Molecular / Diversos mecanismos de edición génica se han implementado a lo largo de los años para mutar el genoma del virus herpes simple tipo 2 (VHS-2). Éstos se han basado principalmente en el uso de procesos de recombinación homóloga. Un mecanismo comúnmente utilizado consiste en la realización de recombinación homóloga con un sustrato de intercambio alélico (AES) directamente sobre células transfectadas con genoma viral. Otra aproximación comúnmente utilizada es el desarrollo de recombinación homóloga en bacterias transformadas con un cromosoma artificial bacteriano (BAC) que contiene el genoma completo del virus herpes simple. La progenie viral mutante es luego obtenida mediante transfección de células con este material genético modificado. Si bien se han desarrollado diversas cepas mutantes de VHS-2 utilizando estas metodologías, ambas metodologías son laboriosas y presentan problemas técnicos tanto previos como posteriores a la generación de la mutación en el genoma. Dadas estas dificultades, se ha buscado desarrollar otros mecanismos más convenientes los cuales faciliten este proceso. Una metodología relativamente reciente que permite realizar modificaciones genéticas de manera más simple es aquella conocida como la tecnología de CRISPR-Cas9. Dada la mayor facilidad y especificidad de esta técnica, comparada a las más antiguas, nos propusimos mutar mediante el sistema CRISPR-Cas9, los genes virales US6, US4 y UL53 del VHS-2 para interrumpir la síntesis de las proteínas virales gD, gG y gK, respectivamente. Si bien se lograron desarrrollar los reactivos para realizar estas mutaciones, lamentablemente no se obtuvieron los aislados mutantes deseados. Se discuten los eventuales problemas que no permitieron lograr el objetivo
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UCHILE/oai:repositorio.uchile.cl:2250/171076 |
| Date | January 2019 |
| Creators | González Troncoso, María Paz |
| Contributors | González Muñoz, Pablo, Sauma Mahaluf, Daniela |
| Publisher | Universidad de Chile |
| Source Sets | Universidad de Chile |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | Tesis |
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