Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Los flavonoides son compuestos polifenólicos que se encuentran distribuidos en el reino
vegetal. Las propiedades antioxidantes de estos compuestos se relacionan con su capacidad
de atrapar radicales libres (ej. radical hidroxilo) y apagar especies excitadas (ej. oxígeno
singlete).
Los flavonoides poseen la capacidad de interactuar con distintas proteínas desde que se
administran, al estar en la circulación sanguínea, con proteínas estructurales celulares,
pudiéndose modificar tanto su biodisponibilidad como sus efectos farmacológicos. Estudios
recientes sugieren que la unión con albúmina afecta la absorción, biodisponibilidad y
actividad de los flavonoides, dependiendo de la estructura del polifenol.
El objetivo general de este trabajo es desarrollar metodologías cromatográficas HPLC para
la determinación del efecto antioxidante frente al radical hidroxilo, de polifenoles que están
interactuando con albúmina en medio acuoso tampón pH 7,4, siguiendo el consumo del
polifenol en función del tiempo.
Así, se desarrollaron dos metodologías analíticas por Cromatografía Líquida de Alta
Eficiencia (HPLC). Una fue desarrollada con la finalidad de lograr una óptima separación
del flavonoide y sus respectivos productos de oxidación. Para esta metodología se utilizó
una columna de fase reversa C8 y una gradiente de elución isocrática. Por otra parte, el
seguimiento del consumo de cada flavonoide en función del tiempo se realizó en una
columna C18, donde estos compuestos eluyen a tiempos menores en comparación con la
metodología utilizada para la separación de los posibles productos de oxidación. Ambas
metodologías fueron validadas en forma preliminar utilizando concentraciones del rango
micromolar, presentando una adecuada relación lineal entre la señal cromatográfica y la
concentración.
La metodología se aplicó eficientemente para la determinación del efecto antioxidante de
morina cuando está interaccionando con albúmina en medio acuoso tampón pH 7,4 y se
comparó con el medio homogéneo. Los resultados muestran que morina presenta una
mayor reactividad con el radical hidroxilo cuando está interactuando con la proteína, lo que
indica que aumenta su eficiencia antioxidante / Flavonoids are polyphenolic compounds that are distributed in the plant kingdom. The
antioxidant properties of these compounds are related to their ability to trap free radicals
(eg. hydroxyl radical) and quench excited species (eg. singlet oxygen).
Flavonoids have the ability to interact with different proteins since they are administered,
being in the bloodstream, with cellular structural proteins, being able to modify both their
bioavailability and their pharmacological effects. Recent studies suggest that binding with
albumin affects the absorption, bioavailability and activity of flavonoids, depending on the
structure of the polyphenol.
The general objective of this work is to develop HPLC chromatographic methodologies for
the determination of the antioxidant effect against the hydroxyl radical of polyphenols that
are interacting with albumin in aqueous buffer pH 7.4, following the consumption of
polyphenol as a function of time.
Thus, two analytical methodologies were developed by High performance Liquid
Chromatography (HPLC). One was developed with the purpose of achieving an optimum
separation of the flavonoid and its respective oxidation products. For this methodology, a
C8 reverse phase column and an isocratic elution gradient were used. On the other hand,
the monitoring of the consumption of each flavonoid as a function of time was carried out
in a C18 column, where these compounds elute at shorter times in comparison with the
methodology used for the separation of the possible oxidation products. Both
methodologies were validated in a preliminary way using concentrations of the micromolar
range, presenting an adequate linear relationship between the chromatographic signal and
the concentration.
The methodology was applied efficiently for the determination of the antioxidant effect of
morin when interacting with albumin in an aqueous buffer pH 7.4 and was compared with
the homogeneous medium. The results show that morin presents a greater reactivity with
the hydroxyl radical when it is interacting with the protein, which indicates that it increases
its antioxidant efficiency
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UCHILE/oai:repositorio.uchile.cl:2250/171550 |
| Date | January 2018 |
| Creators | Torres Manríquez, Juan Carlos |
| Contributors | Morales Valenzuela, Javier Eduardo, Montero Leal, Guillermo Esteban |
| Publisher | Universidad de Chile |
| Source Sets | Universidad de Chile |
| Language | Spanish |
| Detected Language | English |
| Type | Tesis |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Chile, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/cl/ |
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