Screening of expression constructs suitable for protein pharmaceuticals is often done in batch cultivations. But the production of the recombinant protein is made during fed-batch cultivations. The two types of cultivations are different and therefore may good expression constructs that grow poorly in batch cultivations but good in fed-batch cultivations be rejected. Therefore would it be desirable to develop a fed-batch method that can be used in shake flasks. Biosilta has developed a method where starch is broken down into glucose by an enzyme creating fed-batch conditions. This method has been tried out and analyzed during this project. It is shown that the cells grown under these conditions can be glucose limited. However, at a later stage of the cultivation the cells produce a large amount of acetate and pH is not stable. The system builds on a booster tablet which content is unknown. If the booster is not added to the cultivations the cells stop growing, this indicates that there is some other limitation than just glucose. It is also seen that the amount of protein that is produced during this fed-batch mimic cultivation is much lower than that is produced during normal batch cultivations. I would therefore not recommend EnBase as a screening method. / Screening av nya rekombinanta proteiner som ska användas till läkemedel sker oftast i batch-odling. Men själva odlingen av proteinläkemedlet sker sedan under fed-batch förhållanden. Dessa två typer av odling är olika och då cellerna växer olika kan detta leda till att fel, eller den inte mest lämpade kandidaten väljs. Därför vore det önskvärt att ta fram en fed-batch liknande metod i skakkolvar. Biosilta har tagit fram en metod där ett enzym bryter ned stärkelse till glukos som påminner om fed-batch. Denna metod har testats och undersökts i detta examensarbete. Det har visat sig att cellerna som växer under dessa förhållanden är begränsade på glukos men producerar stora mängder ättiksyra under den senare fasen av odlingen och att pH varierar mycket. Systemet bygger mycket på att en booster-tablett tillsätts, vad denna tablett innehåller är okänt. Men om tabletten inte tillsätts slutar cellerna att växa, detta tyder på att det finns någon mer begränsning än glukos. Det visade sig även att protein produktionen blev mycket lägre än vid odling i batch-fas. Det skulle av anledning av ovanstående inte vara bra att använda sig av EnBase som en screening metod.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:UPSALLA1/oai:DiVA.org:kth-49124 |
| Date | January 2011 |
| Creators | Andersson, Klara |
| Publisher | KTH, Skolan för bioteknologi (BIO) |
| Source Sets | DiVA Archive at Upsalla University |
| Language | English |
| Detected Language | English |
| Type | Student thesis, info:eu-repo/semantics/bachelorThesis, text |
| Format | application/pdf |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0028 seconds