Le but de ce projet, en collaboration avec Héma-Québec, était de développer une méthode
point de service (POC) pour la quantification des immunoglobulines A (IgA) dans un petit volume
de plasma humain. Les IgA jouent un rôle important au niveau de notre système immunitaire,
surtout au niveau des bio fluides sur les muqueuses comme la salive. On peut les retrouver
normalement dans le plasma à des concentrations plus grandes que 2000 ng/mL pour la majorité
des gens. Dans le cas d’une personne immunosupprimée, une concentration plus basse que 500
ng/mL est observée. La déficience en IgA est souvent associée à des maladies auto-immunes
comme la maladie de Crohn. Ces individus peuvent éprouver un choc anaphylactique à la suite
d’une transfusion de sang, ce qui nous motive à utiliser la résonance des plasmons de surface (SPR)
sur place à des collectes de sang et dans les milieux hospitaliers.
Pour réaliser ce capteur d’immunodéficience en IgA, un anticorps primaire spécifique aux
IgA fut lié à un peptide formant une monocouche auto-assemblée sur une surface d’or du capteur
SPR. Un deuxième anticorps a été utilisé pour quantifier spécifiquement cet analyte dans une
matrice humaine complexe. Plusieurs étapes ont été optimisées pour obtenir une limite de détection
basse, soit l’étape d’immobilisation de l’anticorps de capture, le type d’anticorps, le pH pour
l’immobilisation, la détection secondaire, la validation dans différentes matrices biologiques, parmi
d’autres. Le capteur a été validé avec quelques échantillons cliniques et la réponse SPR fut
comparée avec ELISA. Ainsi, nous anticipons que cette méthode pourrait être utile à des collectes
de sang pour assurer les réserves de sang déficient en IgA. / The goal of this project, in collaboration with Héma-Québec, was to develop a point-ofcare (POC) method to quantify immunoglobulin A (IgA) in a small volume of human plasma.
Immunoglobulin A play an important role in immunity, specifically in biofluids on mucosaes like
saliva. It can generally be found in plasma at concentrations higher than 2000 ng/mL for most
people. In the case of an immunosuppressed individual, a concentration under 500 ng/mL is
observed. IgA-deficiency is often associated with autoimmune diseases, such as Crohn’s disease.
These individuals may experience an anaphylactic shock following a blood transfusion, which
motivated us to use surface plasmon resonance (SPR) on site at blood drives and in a hospital
setting.
SPR quantifies the interactions between biomolecules. It is a complementary technique to
ELISA that can test more rapidly individuals susceptible of being IgA-deficient in a hospital setting
or at blood drives. To develop an IgA SPR sensor, a specific capture antibody to IgA was bound
to a peptide monolayer on the gold surface. A second antibody was used to specifically quantify
IgA in a complex matrix. Multiple steps were optimized to achieve the low detection limits required
for IgA detection, such as the capture antibody immobilisation step, type of antibody, pH of
immobilisation buffer, secondary detection, validation in different biological matrices, among
others. The SPR sensor was validated with a few clinical samples, and compared to ELISA, to
demonstrate the potential. As such, we envision that this rapid method may be used at blood drives
to ensure sufficient reserves of IgA-deficient blood.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:umontreal.ca/oai:papyrus.bib.umontreal.ca:1866/32817 |
| Date | 12 1900 |
| Creators | Dubois, Caroline |
| Contributors | Masson, Jean-François |
| Source Sets | Université de Montréal |
| Language | fra |
| Detected Language | French |
| Type | thesis, thèse |
| Format | application/pdf |
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