Τα έντομα και άλλοι ποικιλόθερμοι οργανισμοί έχουν αναπτύξει διάφορους μοριακούς
μηχανισμούς για την προστασία τους από ακραίες θερμοκρασίες και άλλες στρεσογόνες
καταστάσεις που συμβαίνουν κατά τη διάρκεια της ζωής τους. Ένας από τους σημαντικότερους
μηχανισμούς είναι η παραγωγή των θερμοεπαγόμενων πρωτεϊνών οι οποίες, ως μοριακοί συνοδοί,
προστατεύουν τα κύτταρα από τη μετουσίωση και συσσωμάτωση των πρωτεϊνών τους. Πολλές από
τις θερμοεπαγόμενες πρωτεΐνες συνθέτονται και σε φυσιολογικές συνθήκες και παίζουν
σημαντικούς ρόλους στην ορθή αναδίπλωση, μεταφορά και αποικοδόμηση των πρωτεϊνών του
κυττάρου.
Το εργαστήριο μας ενδιαφέρεται για το ρόλο των θερμοεπαγόμενων πρωτεϊνών και τη ρύθμιση
των γονιδίων τους στη Μεσογειακή μύγα. Τέσσερα θερμοεπαγόμενα γονίδια, hsp90, hsp70, hsp27
και hsp26, έχουν κλωνοποιηθεί και χαρακτηριστεί στο εργαστήριό μας. Στόχοι αυτής της
μεταπτυχιακής εργασίας είναι α) η λειτουργική ανάλυση της 5’ ανοδικής περιοχής του γονιδίου
hsp90 της Μεσογειακής μύγας και β) η έκφραση του γονιδίου σε συνθήκες ψυχρού στρες.
Για να μελετήσουμε την ρύθμιση του γονιδίου hsp90, δημιουργήσαμε διαγονιδιακά στελέχη που
έφεραν το γονίδιο της λουσιφεράσης (ως γονίδιο αναφοράς) υπό τον έλεγχο διαφορετικών 5’
περιοχών του γονιδίου hsp90. Η ανάλυση των στελεχών αυτών έδειξε ότι η ευρύτερη περιοχή του
υποκινητή που εκτίνεται έως και το -3536 περιλαμβάνει όλα τα απαραίτητα στοιχεία για τη
θερμοεπαγόμενη έκφραση του γονιδίου.
Για να μελετήσουμε εάν η χαμηλή θερμοκρασία (0 oC) έχει κάποια επίδραση στη βιωσιμότητα
του εντόμου και στην έκφραση του hsp90, ομάδες αρσενικών ενήλικων εντόμων επωάστηκαν για
διαφόρους χρόνους στους 0 oC και ακολούθως μελετήθηκε η επιβίωσή τους και η έκφραση του
θερμοεπαγόμενου γονιδίου με RT-PCR και qRT-PCR. Τα αποτελέσματά μας υποδηλώνουν ότι οι
χαμηλές θερμοκρασίες αυξάνουν την έκφραση του hsp90 σχεδόν στα ίδια επίπεδα με εκείνα του
θερμικού στρες. Επίσης η βιωσιμότητα των εντόμων βρέθηκε πολύ υψηλή στους 0 oC. / Insects and other poikilotherms have multiple molecular mechanisms for their protection from
extreme environmental and other stressful conditions which happens during their life. One of these
mechanisms is the production of heat shock proteins. These proteins, being molecular chaperones,
protect the cells from protein denaturation and aggregation. Some of these proteins are produced
under normal conditions, and they play important role in proper protein folding, transport and
degradation.
We are interested in the role of heat shock proteins and the regulation of their genes in
Mediterranean fruit fly (medfly). Four heat shock genes have been cloned and characterized in our
laboratory. These are hsp90, hsp70, hsp27 and hsp26. The aim of this master thesis is: a) to study the
normal and heat-induced regulation of the medfly’s hsp90 gene and b) to study the expression of this
gene under cold shock conditions.
For the first aim we created transgenic flies which they had the lusiferase gene (as a reference
gene) under the control of different 5’ upstream regions of hsp90 gene. The analysis of these
transgenic strains showed that the region between the first transcription base pair and -3536 base pair
is crucial for the expression of the gene under normal and heat shock conditions.
In order to examine whether the low temperature (0 oC) has any effect in the medfly’s viability
and the expression of hsp90 gene, male groups were exposed at different intervals at 0 oC and then it
was examined the viability and the expression of the gene. Our results suggest that the low
temperature increases the expression of hsp90 nearly to the same levels of the thermal stress and this
temperature does not affect the viability of the insect.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:upatras.gr/oai:nemertes:10889/5643 |
| Date | 24 October 2012 |
| Creators | Πασπαλιάρης, Βασίλης |
| Contributors | Μίντζας, Αναστάσιος, Paspaliaris, Vassilis, Φλυτζάνης, Κωνσταντίνος, Κατσώρης, Παναγιώτης |
| Source Sets | University of Patras |
| Language | gr |
| Detected Language | Greek |
| Type | Thesis |
| Rights | 0 |
| Relation | Η ΒΚΠ διαθέτει αντίτυπο της διατριβής σε έντυπη μορφή στο βιβλιοστάσιο διδακτορικών διατριβών που βρίσκεται στο ισόγειο του κτιρίου της. |
Page generated in 0.0021 seconds