Por meio da técnica de microperfusão estacionária in vivo, túbulos proximais (TP) de ratos Wistar foram perfundidos com solução CTRL contendo ou não Sinva 100μM ou Sil 10μM para determinar a reabsorção de bicarbonato (JHCO3-). A perfusão de Sil diminuiu o JHCO3- em 20%, enquanto que Sinva incrementou em 19,31% o JHCO3- comparado com o CTRL. Já a Prav diminuiu em 15% o JHCO3- . Para testar se os efeitos foram dependents de NHE3, PTs foram perfundidos com CTRL, Sil, Sinva ou Prav mais S3226, um inibidor específico de NHE3. O JHCO3- remanescente (insensível à S3226) não foi diferente entre os grupos, mostrando que NHE3 foi modulado por Sil e Sinva. Já o efeito inibitório da Prav ocorre não apenas via NHE3 mas também via H+ ATPase. Para determinar se a via Rho está envolvida nestes efeitos, os PTs foram perfundidos com Y-27632 1μM, inibidor de Rho GTPase. A perfusão com Y-27632 reverteu o efeito inibitório promovido tanto pelo Sil quanto pela Prav, demonstrando que o efeito inibitório destes fármacos sobre a atividade do NHE3 ocorre via Rho. Além disso, o efeito inibitório de Sil foi completamente abolido pelo inibidor de PKG dependente de GMPc KT5823 10-6 M. Para confirmar estes resultados, animais foram mantidos em gaiolas metabólicas por 24 h e tratados via oral com 7mg/Kg/dia de Sinva e 20mg/Kg/dia de Sil. Sil diminuiu a CE Na+, indicando que outros mecanismos de transporte podem estar envolvidos em alterações no manejo de Na+ pelos rins promovidas por Sil. Já a infusão de Prav em ratos Wistar pela jugular durante 30 min promoveu aumento da CE Na+, sugerindo que o fármaco age inibindo NHE3. / By means of stationary microperfusion, PT of Wistar rats were perfused with a CTRL solution with or without 100μM Simva or 10μM Sil to determine bicarbonate reabsorption (JHCO3-). Perfusion of Sil decreased JHCO3- by 20% and perfusion of Simva increased JHCO3- by 19,31% compared to CTRL. Prav decreased JHCO3- by 15%. To test if these effects were NHE3-dependent, PTs were perfused with CTRL, Sil, Simva or Prav plus 2μ M S3226, a specific NHE3 inhibitor. The reminiscent S3226-insensitive JHCO3- was not different among groups, showing that NHE3 was modulated by Sil or Simva. To determine if Rho was involved in these effects, the PTs were perfused with the Rho GTPase inhibitor Y-27632 (1μM). Perfusion with Y-27632 reversed the inhibitory effect promoted by both Sil and Prav, demonstrating that the inhibitory effect of these drugs on NHE3 activity occurs via Rho. Furthermore, the inhibitory effect of Sil was completely abolished by either the protein kinase G (PKG) inhibitor dependent of cGPM KT5823 10-6 M. To confirm our results the animals were kept for 24 hours in metabolic cages and treated orally with 7mg/kg Sim or 20mg/kg Sil. The Sil decreased the Na+ excretion load, indicating that other transport mechanisms beyond the proximal tubule involved in the changes of handling of Na+ by the treatment with Sil. On the other hand, the infusion of Prav in Wistar rats by jugular for 30 min promoted an increase in Na+ CE, suggesting that the drug acts by inhibiting NHE3.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-05022018-142859 |
| Date | 26 October 2017 |
| Creators | Santos, Priscilla Marys Costa dos |
| Contributors | Malnic, Gerhard |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Tese de Doutorado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Reter o conteúdo por motivos de patente, publicação e/ou direitos autoriais. |
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