Apesar da capacidade regenerativa da dentina já ser bem estabelecida, este processo pode ser insuficiente no caso de injúrias decorrentes de traumas e/ou lesões cariosas extensas, podendo levar à exposição pulpar e perda de sua vitalidade. Assim, pesquisas recentes no campo da engenharia tecidual têm identificado materiais e substâncias que poderiam ser utilizadas como biomodificadores da dentina e auxiliares na regeneração do complexo dentina-polpa. Entre eles estão os extratos ricos em proantocianidina, um composto fenólico bioativo presente no extrato de semente de uva (GSE). Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial estimulatório de quatro concentrações crescentes do GSE na atividade funcional de células odontoblastoides. Foram utilizadas células de camundongo da linhagem MDPC-23, cultivadas em garrafas de cultura até a subconfluência. Em seguida, as células foram cultivadas em placas de 24 poços em uma concentração de 104/poço e divididas em cinco grupos: células sem adição do GSE, células + 0.1 µg/mL de GSE; células + 1 µg/mL de GSE; células + 10 µg/mL de GSE; células + 20 µg/mL de GSE. Após 3, 7 e 10 dias, foram analisados os seguintes parâmetros: proliferação e viabilidade celular, detecção e atividade de fosfatase alcalina, quantidade de proteína total, detecção e quantificação de nódulos mineralizados, expressão quantitativa dos genes Alp, Col1a1 e Dmp1 por meio de PCR em tempo real e sua expressão proteica correspondente por meio de imunolocalização. Os dados obtidos foram analisados quanto à normalidade e submetidos aos testes estatísticos ANOVA e Kruskal-Wallis, com nível de significância estabelecido em 5%. Os resultados mostraram proliferação e viabilidade celular com as concentrações mais baixas de GSE (0,1 e 1 µg/mL), assim como a atividade de síntese de proteínas totais e da fosfatase alcalina. A deposição de nódulos mineralizados foi significativamente maior com a concentração de 1 µg/mL do extrato. Esta mesma concentração favoreceu a expressão quantitativa dos genes Alp, Col1a1 e Dmp1 e a secreção das proteínas correspondentes vistas por imunolocalização. Conclui-se que baixas concentrações do extrato de semente de uva podem influenciar e favorecer a atividade de células odontoblastoides, contribuindo para a regeneração dentinária, devido à suas características antioxidantes e biomineralizadoras / The process of dentinogenesis generally involves several steps of cell differentiation, culminating with an extracellular matrix very similar to bone tissue. Dentin regeneration may be necessary in cases of pulp exposure, root resorption and carious lesions. Studies on functional regeneration of lost tissues are being carried on recently, based on the presence of cells, scaffolds and/or substances that induce cell proliferation and differentiation. Among the several substances which can interact with cell metabolism are the extracts rich in proanthocyanidin, bioactive phenolic compounds present in fruits, vegetables and seeds. The purpose of this project is to evaluate the stimulatory potential of four different concentrations of grape seed extract (GSE) in the functional activity of odontoblast-like cells. MDPC-23 cell line was seeded in culture flasks until subconfluence followed by cell seeding in 24-well culture plates in the concentration of 104/well and divided in five groups: 1) cells without GSE, 2) cells + 0,1 µg/mL of GSE; 3) cells + 1 µg/mL of GSE; cells + 10 µg/mL of GSE and cells + 20 µg/mL of GSE. After 3, 7 and 10 days, there were evaluated the following parameters: cell proliferation and differentiation, ALP detection and activity, total protein content, mineralization detection and quantification, as well as the expression of genes Alp, Col1a1 and Dmp1 through Real Time PCR and their corresponding proteins by means of immunolocalization. Data were analyzed by ANOVA and Kruskal-Wallis statistical tests, with significance level set at 5%. The results demonstrated cell proliferation and viability with low GSE concentrations (0,1 and 1 µg/mL), as well as total protein content and ALP activity. Deposition of mineralized nodules was significantly increased with the GSE concentration of 1 µg/mL. The same concentration favoured the expression of genes Alp, Col1a1 and Dmp1 as well as the corresponding proteins. It is concluded that low concentrations of grape seed extract may influence functional activity of odontoblast- like cells, contributing to dentin regeneration by means of its antioxidant and biomineralizing properties
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-29082018-142329 |
| Date | 29 June 2018 |
| Creators | Rezende, Patricia Helena Colbachini |
| Contributors | Prado, Karina Fittipaldi Bombonato |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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