Le remodelage ventriculaire gauche (RVG) est un processus complexe qui intervient après un infarctus du myocarde chez 30% des patients en dépit des meilleurs traitements connus actuellement. Le but de mon travail de thèse consistait à identifier les déterminants moléculaires du RVG dans le but de mieux en comprendre les mécanismes physiopathologiques. Pour cela, nous avons étudié les modifications post-traductionnelles des protéines contractiles du VG et en particulier, la phosphorylation et la O-N-acétylglucosaminylation (O-GlcNAc). Nous nous sommes ensuite particulièrement intéressés à la troponine T (TnT) pour laquelle nous avons ainsi pu mettre en évidence une diminution de la phosphorylation au niveau de la sérine 208 au niveau du VG et du plasma chez le rat, suggérant que cela pourrait être un marqueur du RVG post-infarctus. Pour cette étude, nous avons travaillé en collaboration avec l'unité INSERM U644 de Rouen sur un modèle expérimental d'insuffisance cardiaque. L'infarctus du myocarde est induit chez le rat par ligature de la branche descendante de l'artère coronaire gauche, les rats témoins subissant l'intervention mais sans ligature. Dans un premier temps, nous avons réalisé une étude globale du phosphoprotéome du VG en phase tardive du RVG (2 mois post-ligature). Pour cela, les protéines extraites du VG ont été séparées par électrophorèse bidimensionnelle puis colorées au Pro-Q®Diamond (spécifique des protéines phosphorylées) puis au Sypro®Ruby (spécifique des protéines totales). Par analyse bioinformatique, nous avons mis en évidences 69 spots polypeptidiques présentant des modulations de phosphorylation. Nous avons donc analysé ces spots par spectrométrie de masse et avons identifié 30 protéines correspondant à 53 spots polypeptidiques présentant des modulations de phosphorylation. Parmi ces protéines, nous avons choisi de nous concentrer et d'étudier 6 protéines contractiles : la TnT, l'alpha-tropomyosine 1 (α-Tm 1), la desmine, l'αB-crystalline et les chaînes légères de myosine 1 et 2 (MLC). Pour chacune de ces protéines, nous avons identifié le type d'acide aminé responsable de la phosphorylation et quantifié les modulations de phosphorylation dans le VG des rats insuffisants cardiaques (IC). De manière intéressante, nous avons observé que le VG des animaux IC présentait une diminution significative de la phosphorylation sur les résidus sérine pour l'α-Tm 1, la TnT et la MLC-2 et sur les résidus de tyrosine pour l'αB-crystalline ainsi qu'une augmentation significative de la phosphorylation sur les résidus tyrosine pour la MLC-1 et sur les résidus de sérines pour la desmine, confirmant ainsi les résultats obtenus en électrophorèse bidimensionnelle. Afin de compléter l'analyse des modifications post-traductionnelles, nous avons étudié les modifications de O-GlcNAc pour chacune de ces protéines. Nous avons ainsi observé une diminution significative de la O-GlcNAcylation de l'α-Tm 1, de la desmine et l'αB crystalline ainsi qu'une augmentation de la O-GlcNAcylation de la MLC-3 et de la TnT. Par ailleurs, nous avons pu corréler ces modulations de phosphorylation et de O-GlcNAcylation avec des modulations de l'activité des enzymes impliquées dans ces modulations. En effet, par analyse bioinformatique de la séquence de la TnT et par recherche bibliographique nous avons mis en évidence que la protéine kinase C et la protéine phosphatase 2A pourrait être impliquées dans ces modulations de phosphorylation. Nous avons alors mis en évidence une diminution de l'activité de la protéine kinase C epsilon dans le VG des rats IC mais sans variation de l'activité de la protéine phosphatase 2A. Par ailleurs, nous avons mis en évidence une augmentation de l'activité de la O-GlcNAc transférase et une diminution de l'activité de la O-GlcNAcase dans le VG des rats IC. [...]

Les troubles musculo-squelettiques figurent parmi les principales causes d'arrêt de travail. Le mal de dos appelé aussi lombalgie est une des pathologies les plus fréquentes. La lombalgie est considérée aujourd'hui comme un véritable problème de santé publique. Les répercussions socio-économiques conséquentes résultent des lombalgies persistant plus de trois mois (lombalgies chroniques) qui affectent pourtant une minorité de sujets (moins de 10% des lombalgiques).Face aux coûts aussi importants de la lombalgie chronique et au regard du peu d'efficacité des traitements usuels, la recherche de prises en charge spécifiques se justifie. Aussi, l'objectif principal de ce travail est d'analyser les cinétiques dedéconditionnement et de reconditionnement du rachis chez des sujets lombalgiques et, parallèlement, d'apprécier les effets d'un programme intensif et dynamique de restauration fonctionnelle du rachis sur différents profils de sujetslombalgiques (homme et femme, avec ou sans chirurgie, sédentaire ou actif, avec une douleur initiale élevée ou faible à modérée). Ce travail s'intéresse aux effets du temps, de l'entraînement ou du réentraînement et de facteursspécifiques sur une population de sujets lombalgiques chroniques. Le reconditionnement des sujets lombalgiques chroniques est constaté à l'issue de 5 semaines de prise en charge (175 heures) dans un programme de restaurationfonctionnelle du rachis (RFR). L'évaluation de ce type de programme confirme bien l'efficacité sur les plans physique, fonctionnel, psychologique et professionnel d'un programme multidisciplinaire dynamique et intensif de type RFR, proposé pour des sujets lombalgiques chroniques dont le niveau de déconditionnement est avancé mais stabilisé. Cette issue thérapeutique, bien que très coûteuse, conserve ses bénéfices jusqu'à 12 mois post-traitement et peut représenter une alternative intéressante à la chirurgie. La douleur intense prétraitement des sujets lombalgiques chroniques ne constitue ni un frein, ni une variable prédictive des réponses au programme. Des habitudes de vie physique active ou sportive sont recommandées chez les sujets lombalgiques chroniques souhaitant bénéficier d'une prise en charge RFR.

Depuis le début des années 1990, l'imagerie de l'oreille et de la base du crâne s'est considérablement développée. Des pathologies récentes, mal connues ont été explorées en imagerie, en particulier en IRM. L'objectif de mes travaux de recherche, a été de développer des séquences Haute Résolution (HR) sur l'oreille et la base du crâne permettant une analyse sémiologique fine et une caractérisation de ces différentes pathologies dans l'objectif d'une prise en charge plus adaptée. Le début de mes travaux a été orienté vers le conduit auditif interne. Mon but initial a été de mettre point et de développer une séquence 3 HR T2 sur l'oreille interne et le conduit auditif interne ainsi qu'une séquence spin écho T1 HR en coupes fines. Ces séquences ont permis l'analyse précise de l'extension des schwannomes vestibulaires dans le fond du conduit auditif interne. Cette étude a permis de dégager des critères intéressants en imagerie dans le choix thérapeutique (chirurgie versus radio-chirurgie) et dans le choix de la voie d'abord chirurgicale. Mon travail s'est également orienté vers le développement des séquences de diffusion en base du crâne, le but était de développer une séquence de diffusion HR dans le suivi des cholestéatomes opérés de l'oreille moyenne. Les récidives de cholestéatome sont fréquentes et les oreilles opérées sont parfois difficiles à analyser en TDM en cas de comblement de la cavité opératoire. Des séquences IRM spécifiques sont alors nécessaires pour différencier une récidive de cholestéatome, du tissu fibro-inflammatoire fréquemment présent. Plusieurs auteurs avaient montré l'intérêt des séquences de diffusion du fait de coefficients de diffusion très différents entre le tissu fibro-inflammatoire et le cholestéatome. Cependant ces premières séquences de diffusion EPI basse résolution, étaient peu adaptées au rocher et la base du crâne. Notre travail a été de mettre au point et de développer une séquence de diffusion HR Turbo Spin écho adaptée à l'oreille et à la base du crâne permettant le dépistage des récidives de cholestéatome et de valider cette séquence par comparaison au gadolinium tardif et à la chirurgie. Mon travail sur la base du crâne haute résolution m'a également permis de développer des séquences Spin Echo T1 et 3D Echo de gradient T1 en Haute Résolution avec saturation de la graisse permettant une analyse fine des extensions tumorales périnerveuses à la base du crâne principalement dans les cancers du nasopharynx. Ces travaux ont permis de définir les voies d'extension précises de ces tumeurs afin de ne pas sous-évaluer le stade initial de ces tumeurs dans la classification TNM de l'UICC. Ces travaux associés à ceux d'autres chercheurs ont permis de mettre à jour récemment cette classification UICC des tumeurs du nasopharynx. Une de mes principales voies de recherche a été le dépistage, l'analyse et la description des pathologies de l'oreille interne. Une étude longitudinale menée de 1998 à 2008 incluant toutes les pathologies intra-labyrinthiques découvertes au CHU de Lille, a permis de définir et de caractériser trois grands types de pathologies distinctes: les schwannomes intra-labyrinthiques, les labyrinthites, les hémorragies intra-labyrinthiques. Ces pathologies nécessitent des prises en charge différentes. Nous avons pu également définir des critères pronostics en particulier des critères de gravité nécessitant une prise en charge rapide adaptée. Dans le cadre ce travail de recherche sur les pathologies de l'oreille interne, nous nous sommes également intéressés au Syndrome de déhiscence du canal semi-circulaire supérieur, syndrome clinique récemment décrit par Minor en 1998. [...]

La sclérose en plaques (SEP) est une maladie chronique, autoimmune, inflammatoire, démyélinisante et dégénérative du système nerveux central (SNC). Le rôle des lymphocytes B (LB) dans la pathogénèse de la SEP reste complexe, décrit parfois comme pathogène, régulateur ou réparateur. Dans un premier temps, notre travail a été réalisé sur un modèle animal de SEP, l'encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE). Le modèle à rechutes, induit par immunisation active de souris femelles SJL/J (H2s) par le peptide encéphalitogène de la protéine protéolipidique de la myéline (pPLP139-151) a été utilisé. La comparaison avec des souris femelles B10.S, congéniques pour le complexe H2, et décrites comme résistantes car ne développant pas de signes cliniques caractéristiques de l'EAE après immunisation active, nous a permis d'étudier l'implication des sous-populations lymphocytaires B au cours du développement de la pathologie. L'utilisation de ces modèles susceptible/résistant nous a permis de démontrer l'implication de l'homéostasie des sous-populations lymphocytaires B dans la physiopathologie de la réponse auto-immune. Dans un second temps, ces observations ont été confirmées par des études réalisées chez l'Homme, dont la répartition des sous-populations lymphocytaires B circulantes présente un déséquilibre homéostatique lors des premières phases de la maladie. En effet, nous avons observé que les LB transitionnels, aussi connus sous le nom de LB immatures tardifs, présentent des altérations quantitatives (nombre de cellules circulantes) et qualitatives (état d'activation particulier et expression accrue de molécules d'adhésions impliquées dans le processus d'extravasation leucocytaire). Ces caractéristiques, spécifiques des LB transitionnels de patients SEP, ont été associées au recrutement de ces cellules au sein du SNC. Ces résultats originaux mettent en exergue que les LB mémoires et les plasmablastes ne sont pas les seules populations lymphocytaires B impliquées dans de développement de la SEP.

La perfusion intraveineuse, continue ou intermittente, est un acte courant dans les services de soins bien que non dénué de risque. Différents dispositifs médicaux peuvent être employés pour permettre l'administration parfois simultanée de plusieurs substances actives. Ces dispositifs peuvent, de par leurs caractéristiques propres, générer des fluctuations plus ou moins importantes du débit massique de principe actif, c'est-à-dire la quantité de médicament administrée au patient par unité de temps. Le premier axe de travail concernant ces dispositifs médicaux est l'étude des prescriptions des normes, en particulier les définitions, les méthodes d'essai et les seuils de conformité attendus. Les principaux éléments de physiologie et de mécanique des fluides sont abordés afin d'appréhender la problématique. Cette étude est complétée par l'analyse des données de la littérature concernant l'impact des dispositifs médicaux sur le débit massique des principes actifs délivrés par voie intraveineuse. Une revue systématique de la littérature a été effectuée. Elle porte sur les travaux in vitro ou in vivo se rapportant au sujet et concernant tout élément susceptible de modifier le débit ou la concentration du médicament perfusé. Le premier travail expérimental réalisé in vitro concerne la perfusion simultanée de trois médicaments au moyen d'un dispositif unique de perfusion présentant plusieurs points d'accès. Les trois médicaments étaient perfusés par pousse-seringues et une solution d'hydratation par gravité. Le but de cette étude était d'évaluer l'impact des caractéristiques (volume résiduel et valve anti-retour) de deux dispositifs de perfusion, un premier présentant un très faible volume résiduel (0,046 ml) et une valve anti-retour et le second présentant un volume résiduel élevé (6,16 ml) et sans valve anti-retour) sur le débit massique de trois principes actifs. La quantification simultanée de trois principes actifs en solution (dinitrate d'isosorbide, midazolam et noradrénaline) a nécessité la mise au point d'une méthode multivariée sur spectre UV (régression partial least square (PLS)). Cette technique a permis de doser en continu (1 dosage par seconde) les trois principes actifs à la sortie de la ligne de perfusion. La méthode a été validée dans les échelles de concentrations respectives de 5-60, 10-80 et 2,5-20 µg.mL-1 pour le dinitrate d'isosorbide, le midazolam et la noradrénaline, dans des mélanges binaires et 6,67 à 30, 0,83 à 7,5 et 1,67 à 23,33 µg.ml−1 pour ces mêmes produits, dans des mélanges ternaires. La mise au point du modèle a permis de retenir la zone du spectre située entre 220 et 300 nm associée à un index Q2cum optimal. L'étude de recouvrement, employant le modèle pour prédire les compositions de 8 mélanges ternaires, retrouvait des valeurs de concentrations situées dans un intervalle de 99,5 à 101 % des valeurs théoriques. Les principaux paramètres dans cette étude étaient 1) l'évolution du débit massique des trois médicaments, 2) la valeur du plateau du débit massique à l'équilibre, et 3) l'efficience de perfusion (flow change efficiency (FCE)). Le FCE est obtenu en divisant l'aire sous la courbe du débit massique expérimental en fonction du temps par l'aire sous la courbe du débit massique attendu en fonction du temps. Ce paramètre est calculé pour chaque intervalle de 5 minutes après le début de la perfusion. Les systèmes de perfusion avec un volume résiduel réduit offrent de façon significative un meilleur FCE (53,0 ° 15,4% avec un volume résiduel très faible après 5 minutes de perfusion comparativement à 5,6 ° 8,2% avec un système de perfusion avec un volume résiduel élevé), quel que soient les conditions de changements de débit. Une relation non-linéaire a été établie entre le volume résiduel, le temps depuis le début de la perfusion et le FCE. [...]

Adverse Drug Events (ADE) are injuries due to medication management rather than the underlying condition of the patient. They endanger the patients and most of them could be avoided. The detection of ADEs usually relies on spontaneous reporting ormedical chart reviews. The objective of the present work is to automatically detectcases of ADEs by means of Data Mining, which are a set of statistical methodsparticularly suitable for the discovery of rules in large datasets.MaterialA common data model is first defined to describe the available data extracted from the EHRs (electronic health records). More than 90,000 complete hospital stays areextracted from 5 French and Danish hospitals. Those complete records includediagnoses, lab results, drug administrations, administrative and demographic data aswell as free-text reports. When the drugs are not available from any CPOE(Computerized Prescription Order Entry), they are extracted from the free-text reports by means of semantic mining. In addition, an exhaustive set of SPCs (Summaries of Product Characteristics) is provided by the Vidal Company.MethodsWe attempt to trace all the outcomes that are described in the SPCs in the dataset. By means of data mining, especially Decision Trees and Association Rules, the patternsof conditions that participate in the occurrence of ADEs are identified. Many ADEdetection rules are generated; they are filtered and validated by an expert committee. Finally, the rules are described by means of XML files in a central rules repository, and are executed again for statistics computation and ADE detection.Results236 ADE-detection rules have been discovered. Those rules enable to detect 27different kinds of outcomes. Several statistics are automatically computed for eachrule in every medical department, such as the confidence or the relative risk. Thoserules involve innovative conditions: for instance some of them describe theconsequences of drug discontinuations.In addition, two web tools are designed and are available through the web for thephysicians of the departments: the Scorecards enable to display statistical andepidemiological information about ADEs in a given department and the ExpertExplorer enables the physicians to review the potential ADE cases of theirdepartment.Finally, a preliminary evaluation of the clinical impact of the potential ADEs isperformed as well as a preliminary evaluation of the accuracy of the ADE detection.

Bien que le Diabète de Type 2 soit parfois considéré comme évitable, il est généralement irréversible et les traitements actuels sont communément inefficaces pour stopper la progression inexorable de la maladie vers un mauvais contrôle glycémique et des complications dégénératives micro- et macrovasculaires. Le DT2 est caractérisé par une altération de la sécrétion d'insuline par les cellules beta pancréatiques, combinée à une absence de réponse des organes cibles à l'insuline (insulino-résistance) incluant le foie, le tissu adipeux et le muscle squelettique. Malgré 40 ans de recherches intensives, les mécanismes moléculaires sous-jacents sont toujours largement débattus à ce jour. Le DT2 est une maladie à forte composante génétique, comme l'ont montré les études de jumeaux concordants en général pour le DT2. Au moins 2% des patients atteints de DT2 ont un diabète d'origine monogénique, survenant en général pendant l'enfance ou l'adolescence. L'une de ces formes survient spécifiquement à la naissance (diabète néonatal) et 50% de ses étiologies génétiques sont connus à ce jour. Les formes communes de DT2 survenant chez l'adulte sont polygéniques, liées à l'interaction entre des variants génétiques à effet modeste et faible pénétrance, et l'environnement ; en outre, des mécanismes " épigénétiques " seraient aussi en cause. L'identification des déterminants génétiques du DT2 a été dopée par les études d'association pangénomique (GWAS pour Genome Wide Association Studies) grâce à la mise au point de puces à ADN, qui permettent d'analyser conjointement plusieurs centaines de milliers de polymorphismes nucléotidiques simples (SNPs pour Single Nucleotide Polymorphisms) chez plusieurs centaines de milliers d'individus. Les GWAS ont permis d'identifier à ce jour une trentaine de gènes associées au risque de DT2. Le diagnostic du DT2 repose sur la mesure d'un trait continu, la glycémie à jeun. A partir de 1,25g/l, un individu est considéré diabétique. La glycémie à jeun, même chez des personnes non diabétiques, est fortement héritable, c'est-à-dire que ce paramètre métabolique est sous contrôle génétique. Nous avons ainsi utilisé la méthode des GWAS pour rechercher des loci régulant la glycémie dans des populations générales comme la population française DESIR. Nous avons mis en évidence la contribution du gène MTNR1B (codant le récepteur 2 de la mélatonine) dans la sécrétion d'insuline et la régulation de l'homéostasie glycémique. La mélatonine est l'hormone clef des rythmes circadiens de l'organisme, et il a été rapporté dans plusieurs études que la perturbation de ces rythmes est nuisible à l'homéostasie glycémique. Nous avons pu ensuite préciser quelles étaient les séquences d'ADN ayant un effet dans ce contrôle glycémique. Nous avons ainsi mis en évidence des mutations non-synonymes rares qui annihilaient la voie de signalisation de la mélatonine et qui sont associées à un risque élevé de DT2. Par ailleurs, via le consortium international MAGIC, nous avons contribué à l'identification de 16 marqueurs génétiques de la glycémie à jeun, de cinq marqueurs de la glycémie après charge de glucose, et de 10 loci intervenant dans la variance de l'hémoglobine glyquée (HbA1c, qui est un marqueur communément utilisé pour évaluer le contrôle glycémique d'un diabète traité). Ce faisant, nous avons montré que si le gène HK1 codant l'hexokinase 1 est le facteur génétique ayant le plus d'effet sur les valeurs d'HbA1c, il n'intervient pas sur les mécanismes physiologiques de la régulation de la glycémie. C'est uniquement de par les effets des variants d'HK1 sur la fonction des globules rouges (et sur le risque d'anémie) que ce gène modifie indirectement l'HbA1c.

Les études présentées dans cette thèse avaient pour but : 1/ évaluer le niveau d'activité physique (AP) des enfants et des adolescents et établir les relations avec les niveaux de condition physique 2/ identifier les patterns d'AP des jeunes français en fonction de l'âge, du sexe et selon les jours scolaires et les jours fériés 3 / promouvoir l'AP des enfants en milieu scolaire par le biais d'un aménagement spécifique des cours de récréation selon l'âge, le sexe et le niveau socio-économique. Ces différentes études devaient permettre d'identifier de manière précise et objective les patterns d'AP des jeunes français âgés de 3 à 16 ans et d'évaluer les effets d'un aménagement spécifique des cours de récréation en termes d'augmentation de l'AP pour la santé. Les expérimentations se sont déroulées uniquement en milieu scolaire dans des conditions réelles de pratique. Notre première étude a montré que l'intensité de l'AP semblait être en relation avec un faible pourcentage de masse grasse. Chez les 6-12 ans, le niveau d'AP était faiblement corrélé avec le niveau de condition physique. Seul le pourcentage de masse grasse était inversement corrélé au temps passé dans une activité intense chez les garçons,. L'AP intense semble être un indicateur de l'adiposité chez les jeunes. Afin d'augmenter la qualité de vie et de promouvoir la santé, les recommandations internationales en termes d'AP suggèrent, chez les enfants, un minimum de 60 minutes d'AP par jour, à une intensité de modérée à intense. Cependant, l'accroissement du nombre d'enfants ne répondant pas à ces recommandations chargées de promouvoir la santé est de plus en plus perceptible et préoccupante. Dans un souci d'une meilleure compréhension de cette évolution, une évaluation plus précise des patterns d'AP de l'enfance à l'adolescence est indispensable. La seconde étude présentée a consisté à mesurer l'AP des enfants suivant le sexe, l'âge et les jours de la semaine. Il est apparu que les garçons étaient plus actifs que les filles et que les enfants étaient plus actifs pendant les jours scolaires que les jours fériés. Si l'AP à des niveaux de modéré à très intense diminuait de l'enfance à l'adolescence, les changements dans les patterns d'AP étaient associés à une augmentation du temps passé dans une activité légère avec une diminution concomitante de l'AP modérée. Par contre, les AP intense et très intense restaient stables, les adolescents étant significativement plus actifs durant les jours scolaires que les jours fériés. Ces résultats montrent que l'école est un milieu propice à l'AP et apparaît comme une opportunité pour promouvoir l'AP. La troisième étude nous a permis de mesurer les effets d'un aménagement spécifique de la cour de récréation sur les niveaux d'AP des enfants issus d'un milieu socio-économique et culturel différent. Les écoles " défavorisées " sont touchées par une sédentarité et une obésité plus importante que les écoles " normales ", mais aussi par l'exclusion sociale et la violence. En structurant les temps de récréation par le biais de marquages au sol, les temps passés dans une AP de modérée à intense ont été augmentés de manière significative en milieu classique et maintenus en milieu défavorisé. Ce type d'intervention a permis également de réduire le nombre d'enfants ne répondant pas aux critères internationaux en termes d'AP pour la santé. Ainsi, ceux qui étaient les moins actifs ont augmenté significativement leur niveau d'AP. Nos différentes études montrent ainsi que l'accélérométrie avec une fréquence d'échantillonnage élevée permet de mesurer de manière précise les niveaux d'AP des enfants. En tenant compte de l'âge, du sexe et du milieu socio-économique, les réels patterns d'AP des enfants sont identifiés permettant d'orienter les politiques d'intervention pour répondre aux recommandations internationales en termes d'augmentation de l'AP pour la santé dès le plus jeune âge.

RhoH est une petite protéine G de la famille Rho constitutivement activée. Cette protéine, exclusivement exprimée dans les cellules hématopoïétiques, intervient dans le développement du système immunitaire. Elle régule la croissance des cellules souches et des progéniteurs hématopoïétiques, la différenciation des lymphocytes T et la signalisation des récepteurs TCR, BCR et FcεRI présents respectivement à la surface des cellules T, B et des mastocytes. La dérégulation de l'expression du gène RHOH est un facteur de progression tumorale dans certaines leucémies. En effet, l'augmentation de son expression dans la Leucémie Lymphoïde Chronique (LLC) et sa répression dans la leucémie à tricholeucocytes (HCL) sont des évènements impliqués dans la progression de ces maladies. La LLC et l'HCL sont deux pathologies affectant des lymphocytes B matures mais, pour cette dernière, les cellules présentent un état de différenciation plus avancé. RhoH module donc différemment les processus de prolifération, de migration et de survie cellulaires selon le stade de maturation des cellules, suggérant que son expression soit finement régulée dans les cellules hématopoïétiques. Au laboratoire, notre équipe a mis en évidence la répression de RHOH dans l'HCL, responsable de la progression de cette maladie. Cette expression anormale est le résultat d'une diminution des transcrits RHOH initiés en amont de l'exon 4. Le même phénomène a également été observé dans la leucémie T de l'adulte (ATL). L'HCL et l'ATL sont deux maladies caractérisées par une prolifération anormale de cellules matures activées de type B (HCL) ou de type T (ATL). Nous avons donc projeté de comprendre les mécanismes moléculaires intervenant dans la régulation physiologique du gène RHOH au cours de l'activation lymphocytaire B et T ; puis de mettre en évidence les évènements responsables de la répression de RHOH dans l'HCL et l'ATL. Notre objectif serait d'y restaurer l'expression de RHOH et ainsi d'essayer de contrecarrer le phénotype leucémique, ceci dans le but de proposer de potentielles nouvelles cibles thérapeutiques dans ces deux leucémies, dont les traitements sont soit inefficaces (ATL), soit satisfaisants mais associés à des taux de rechutes assez élevés (HCL). Notre projet s'est tout d'abord orienté sur l'étude de la régulation normale du gène RHOH dans les cellules B et T. Nos résultats ont permis de montrer que l'expression du gène RHOH est principalement due à l'activité du promoteur P3 dans les lymphocytes B et T normaux et dans des lignées cellulaires lymphoïdes. Dans les lignées lymphoïdes B, le promoteur P3 a été caractérisé et correspond à la séquence -236/+67, en regard du site d'initiation de la transcription. Nous avons observé une augmentation de son activité suite à l'activation de ces cellules par un analogue du diacylglycérol (DAG), suggérant que des facteurs de transcription comme AP1, complexe formé des membres des familles Jun et Fos, sont impliqués dans la régulation du gène RHOH dans des lignées cellulaires lymphoïdes B. Nos résultats ont également permis de mettre en évidence : d'une part, la fixation de JunD sur le promoteur P3, par immunoprécipitation de la chromatine et son rôle de régulateur négatif dans la transcription de RHOH ; d'autre part, l'importance des membres de la famille Fos dans l'expression de ce gène, dans la lignée lymphoïde B Raji. Dans les lymphocytes T, l'activation des cellules par des anticorps anti-CD3 et anti-CD28 a permis d'observer une variation biphasique de l'expression des transcrits RHOH initiés en amont de l'exon 4, au niveau du promoteur P3 : tout d'abord, une forte augmentation du taux des ARN messagers, reproduite par l'utilisation d'un ionophore pour le calcium, suivie d'une répression, mimée par l'analogue du DAG.

La zone marginale de la rate apparaît comme un lieu stratégique de détection des antigènes et agents pathogènes véhiculés par le sang. Ces propriétés sont principalement liées à la présence de cellules appartenant au système immunitaire inné parmi lesquelles se trouvent des nombreuses cellules présentatrices d'antigènes (APC), comme les macrophages, les lymphocytes B de la zone marginale (MZB) ou encore les cellules dendritiques (DC). Ces cellules représentent une première ligne de défense contre les pathogènes véhiculés par le sang et sont importantes pour l'initiation des réponses immunes. Il a fortement était suggéré la localisation dans la zone marginale d'une autre population appartenant au système immunitaire inné : les lymphocytes T Natural Killer invariants ou iNKT. Ces lymphocytes T non conventionnels sont caractérisés par l'expression de marqueurs de cellules NK et de lymphocytes T conventionnels notamment le TCR. Contrairement aux lymphocytes T conventionnels, les iNKT reconnaissent des antigènes (Ag) lipidiques (d'origine exogène ou endogène) présentés par l'intermédiaire de la molécule CD1d exprimée à la surface des APC, notamment les DC. En réponse à ces lipides, et notamment l'α-galactosylceramide (α-GalCer), les cellules iNKT ont la capacité unique de sécréter rapidement de grandes quantités de cytokines immunomodulatrices comme l'IFN-γ et/ou l'IL-4 qui, en retour, permettent l'activation d'autres populations immunes telles que les DC, les cellules NK, les lymphocytes B et lymphocytes T conventionnels. Les DC, en tant qu'APC professionnelles, sont de puissantes cellules activatrices des lymphocytes T conventionnels mais également des iNKT. Cependant, bien que souvent souligné dans la littérature, le rôle des autres APC dans l'activation des lymphocytes T conventionnels mais surtout des iNKT restait relativement obscur lorsque ce travail de thèse a débuté. Parmi les APC, les MZB représentaient des cibles idéales puisqu'elles ont la particularité d'exprimer fortement les molécules de présentation telle que les molécules du CMH de classe II, la molécule CD1d mais aussi les molécules de co-stimulation. Nous avons donc débuté notre travail par l'étude du rôle des MZB dans l'activation des lymphocytes conventionnels et des iNKT. Nous montrons que les MZB sensibilisés avec un peptide de l'ovalbumine sont capables d'activer les lymphocytes T CD4+, dont la réponse est orientée vers un profil Th1 après l'activation des MZB par le CpG-ODN (agoniste du TLR-9). Ainsi, les MZB se comportent comme de véritables APC. Nous avons ensuite étudié l'activation des iNKT en réponse à lα'-GalCer. De façon surprenante, bien que les MZB expriment fortement la molécule CD1d, elles sont incapables d'activer in vitro les iNKT primaires en réponse l'α-GalCer libre. Elles sont cependant capables de présenter l'α-GalCer aux iNKT suggérant qu'il manque aux MZB des facteurs (solubles ou non) pour induire l'activation des iNKT. De façon intéressante, l'ajout de DC non sensibilisées restaure la production d'IFN-γ et d'IL-4 par les iNKT co-cultivés en présence de MZB sensibilisés avec l'α-GalCer. Nous montrons que les DC participent à cette activation via un mécanisme de présentation croisée mais également via l'apport de facteurs nécessaires aux MZB pour induire l'activation des iNKT. Il existe une réelle coopération entre ces deux types d'APC pour une activation optimale des iNKT. Finalement, nous montrons que les MZB sensibilisés avec l'α-GalCer induisent l'activation des lymphocytes iNKT et NK in vivo. Nous nous sommes ensuite concentrés sur les DC qui comme indiqué ci-dessus, sont des APC professionnelles. Cependant, dans la rate, les DC représentent une population très hétérogène dont le rôle de chaque sous-population notamment dans l'activation des iNKT était également très peu connu lorsque ce travail a débuté.