Streptococcus pneumoniae (pneumococo) é um importante patógeno humano, responsável por graves infecções das vias respiratórias. O principal fator de virulência desse microrganismo é a cápsula polissacarídica (PS), antígeno das vacinas atuais, que são elaboradas com os PS purificados de cepas de pneumococo prevalentes na população. O objetivo desse trabalho foi desenvolver um processo de purificação do PS do sorotipo 14, responsável por 39% das doenças em crianças de 0-6 anos no Brasil. A metodologia de purificação envolveu separação celular por microfiltração tangencial e concentração do microfiltrado com membrana de ultrafiltração tangencial de 50 kDa. O produto dessa etapa foi diafiltrado com dodecil sulfato de sódio em membrana de ultrafiltração tangencial de 30 kDa, seguido de precipitação com ácido tricloroacético a 5%, precipitação por etanol (20% e 60%) e cromatografia de troca aniônica. A pureza do PS foi avaliada pelo conteúdo de proteínas e ácidos nucleicos remanescentes e o tamanho por cromatografia de exclusão molecular. O PS foi obtido com pureza e tamanho requeridos pelos órgãos regulatórios e o rendimento final do processo foi de 65%. / Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) is an important human pathogen responsible for severe respiratory tract infections. The main virulence factor of this microorganism is the capsular polysaccharide (PS), which is the antigen of all current vaccines, which are prepared with purified PS of pneumococcal strains prevalent in the population. The objective of this work was to develop a new purification process for PS of serotype 14, responsible for 39% of diseases in children of 0-6 years old in Brazil. The purification method involved cell separation by tangential microfiltration and concentration of cell-free culture broth containing PS by tangential ultrafiltration (50 kDa). The product of this step was diafiltrated with sodium dodecyl sulfate by tangential ultrafiltration (30 kDa), following by 5% trichloroacetic acid precipitation, 20% and 60% ethanol precipitation and anion exchange chromatography. The PS purity was evaluated by the content of residual proteins and nucleic acids, and the molecular mass by size exclusion chromatography. The purity and molecular mass requirements were achieved and the process global yield was 65%.

Streptococcus pneumoniae (pneumococo) é um importante patógeno humano, responsável por graves infecções das vias respiratórias. O principal fator de virulência desse microrganismo é a cápsula polissacarídica (PS), antígeno das vacinas atuais, que são elaboradas com os PS purificados de cepas de pneumococo prevalentes na população. O objetivo desse trabalho foi desenvolver um processo de purificação do PS do sorotipo 14, responsável por 39% das doenças em crianças de 0-6 anos no Brasil. A metodologia de purificação envolveu separação celular por microfiltração tangencial e concentração do microfiltrado com membrana de ultrafiltração tangencial de 50 kDa. O produto dessa etapa foi diafiltrado com dodecil sulfato de sódio em membrana de ultrafiltração tangencial de 30 kDa, seguido de precipitação com ácido tricloroacético a 5%, precipitação por etanol (20% e 60%) e cromatografia de troca aniônica. A pureza do PS foi avaliada pelo conteúdo de proteínas e ácidos nucleicos remanescentes e o tamanho por cromatografia de exclusão molecular. O PS foi obtido com pureza e tamanho requeridos pelos órgãos regulatórios e o rendimento final do processo foi de 65%. / Streptococcus pneumoniae (pneumococcus) is an important human pathogen responsible for severe respiratory tract infections. The main virulence factor of this microorganism is the capsular polysaccharide (PS), which is the antigen of all current vaccines, which are prepared with purified PS of pneumococcal strains prevalent in the population. The objective of this work was to develop a new purification process for PS of serotype 14, responsible for 39% of diseases in children of 0-6 years old in Brazil. The purification method involved cell separation by tangential microfiltration and concentration of cell-free culture broth containing PS by tangential ultrafiltration (50 kDa). The product of this step was diafiltrated with sodium dodecyl sulfate by tangential ultrafiltration (30 kDa), following by 5% trichloroacetic acid precipitation, 20% and 60% ethanol precipitation and anion exchange chromatography. The PS purity was evaluated by the content of residual proteins and nucleic acids, and the molecular mass by size exclusion chromatography. The purity and molecular mass requirements were achieved and the process global yield was 65%.

INTRODUÇÃO: O Sangramento Uterino Disfuncional (SUD) é uma das causas mais prevalentes de sangramento uterino, estando relacionado a variações hormonais, independente de causas orgânicas. A ablação endometrial é uma das opções terapêuticas, porém está associada à necessidade de treinamento específico e apresenta alto custo. Este estudo tem como objetivo desenvolver modelo de ablação endometrial em ratas adultas. Além disso, avaliar os efeitos histológicos e histomorfométricos causados pelo ácido tricloroacético no útero desses animais, bem como a regeneração endometrial e o retorno do ciclo estral. MÉTODOS: 30 ratas fêmeas adultas foram divididas em dois grupos. Todos os animais foram submetidos à injeção intra-uterina de SF 0,9% em um corno uterino e de ácido tricloroacético (ATA) no corno contralateral. O primeiro grupo, constituído de 15 ratas, foi sacrificado após 1 dia da injeção e tiveram os úteros removidos (Grupo 1). O segundo grupo, constituído de 15 ratas, foi sacrificado após voltar a apresentar um ciclo estral normal, quando foram submetidos à coleta de esfregaços vaginais e eutanasiados em fase de diestro, o que ocorreu cerca de 20 a 30 dias após o procedimento (Grupo 2). As espessuras do epitélio superficial e do estroma endometrial, o número de glândulas endometriais por campo e a espessura miometrial foram comparadas entre os cornos uterinos de cada animal do Grupo 1. As mesmas comparações foram realizadas entre os cornos dos animais do Grupo 2. Por fim, foi avaliada a regeneração endometrial nos Grupos 1 e 2. RESULTADOS: Todos os animais apresentaram recuperação satisfatória do procedimento, não havendo sinais de toxicidade aguda associada ao uso de ATA. No grupo 1, as medianas da espessura do epitélio superficial do endométrio (ATA 0mm vs. Controle 0,05mm,p=0,0001), da espessura do estroma endometrial (ATA 0,325mm vs. Controle 0,525mm, p=0,0006), do número de glândulas (ATA 4,5 vs. Controle 6,5, p=0,0012) e da espessura miometrial (ATA 0,25mm vs. Controle 0,35mm, p=0,009) foram significativamente inferior no corno que recebeu a injeção de ATA. No Grupo 2, quatro animais (27%) morreram na segunda semana após o procedimento e, em seis animais (40%), o material obtido não pode ser avaliado devido à intensa destruição tecidual. Nos cinco animais restantes (33%) a mediana da espessura do epitélio superficial do endométrio (ATA 0,0mm vs. Controle 0,05mm, p<0,004), da espessura do estroma endometrial (ATA 0,325mm vs. Controle 0,725mm, p=0,011), do número de glândulas (ATA 3 vs. Controle 6,5, p=0,011) e da espessura miometrial (ATA 0,35mm vs. Controle 0,5mm, p=0,024), foram significativamente inferior no corno submetido à injeção de ATA. Quanto à mediana da espessura do epitélio superficial do endométrio (Grupo 1 0mm vs. Grupo 2 0mm, p=1) e à mediana da espessura do estroma endometrial (Grupo 1 0,325mm vs. Grupo 2 0,325mm, p=0,857), não houve diferenças significantes entre os cornos uterinos submetidos à injeção de ATA. A mediana do número de glândulas após a injeção de ATA foi superior no Grupo 1 em comparação ao Grupo 2 (p=0,003). CONCLUSÃO: O estudo permitiu o desenvolvimento de um modelo experimental viável de ablação de endométrio em ratas adultas. As alterações histológicas e histomorfométricas encontradas nos cornos uterinos mostraram que o ácido tricloroacético é um potente agente na destruição química endometrial. Não houve regeneração endometrial após retorno ao ciclo estral. / INTRODUCTION: Dysfunctional uterine bleeding is one of the most prevalent causes of uterine bleeding and it is related to hormonal variations without organic causes. Endometrial ablation is a therapeutic option but the methods are frequently expensive and dependent of high cost technologies. The objective of the present study is to develop an animal model of endometrial ablation in adults female rats. In addition, to evaluated the histological and histomorphometric effects after trichloroacetic acid (TCA) exposure into uterine cavity. METHODS: A total of thirty female adult rats were divided in two groups of 15 rats each. All animals were submitted to injection of 0,3 ml of TCA 90% in one uterine horn and the same amount of saline solution 0,9% (control) in the other. Group 1 was sacrificed in the following day of the procedure, whereas group 2 was sacrificed in phase of diestrous after recovery of normal estral cycle identified by vaginal smears, approximately 20 to 30 days after the procedure. Superficial epithelia of the endometrium, estromal thickness, number of endometrial glands as well as of myometrium thickness were assessed and compared between the uterine horns of the same rats of group 1. The same evaluation was performed in group 2. Also, endometrial regeneration was evaluated comparing histological alterations in the uterine horn that was injected with TCA in group 1 and 2. RESULTS: All animals recovered satisfactorily from the procedure. In group 1, superficial epithelia of the endometrium (TCA 0,0mm vs 0,05 mm control, p=0,0001), estromal thickness (TCA 0,325mm vs 0,525 mm Control, p=0,009), number of endometrial glands (TCA 4,5mm vs 6,5 mm control, p=0,001) and mean myometrial thickness (TCA 0,25mm vs 0,35 mm Control, p=0,0006) presented a significant difference between the horns showing endometrial destruction on TCA uterine horn. In group 2, four rats (27%) died in the second week after the initial procedure and six rats (40%) had no viable material to be analyzed due to extent tissue destruction. The rest of the group (33%) showed a mean superficial epithelia of the endometrium (TCA 0,0mm vs 0.05 mm control, p<0,004), mean estromal thickness (TCA 0,325mm vs 0,725 mm Control, p=0,011), mean number of endometrial glands (TCA 3 vs 6,5 control, p=0,011) and mean myometrial thickness (TCA 0,35mm vs 0.5 mm Control, p=0,024) significant different between horns showing endometrial destruction on TCA uterine horn. There was no significant difference in the mean superficial epithelia of the endometrium (group 1 0mm vs. group 2 0mm, p=1) and mean estromal thickness (group 1 0,325mm vs. group 2 0,325mm, p=0,857) between TCA uterine horn from both groups. However, number of endometrial glands (4,5mm in group 1 vs 3 mm in group 2, p=0,003) was higher in group 1. CONCLUSION: The study developed a valid model for endometrial ablation in adult females rats. The histological and histomorphometric effects observed in the uterine horns showed that the trichloroacetic acid is a potent agent for endometrial ablation in rat model. In the current model no endometrial regeneration was observed after recovery of normal estral cycle.

INTRODUÇÃO: O Sangramento Uterino Disfuncional (SUD) é uma das causas mais prevalentes de sangramento uterino, estando relacionado a variações hormonais, independente de causas orgânicas. A ablação endometrial é uma das opções terapêuticas, porém está associada à necessidade de treinamento específico e apresenta alto custo. Este estudo tem como objetivo desenvolver modelo de ablação endometrial em ratas adultas. Além disso, avaliar os efeitos histológicos e histomorfométricos causados pelo ácido tricloroacético no útero desses animais, bem como a regeneração endometrial e o retorno do ciclo estral. MÉTODOS: 30 ratas fêmeas adultas foram divididas em dois grupos. Todos os animais foram submetidos à injeção intra-uterina de SF 0,9% em um corno uterino e de ácido tricloroacético (ATA) no corno contralateral. O primeiro grupo, constituído de 15 ratas, foi sacrificado após 1 dia da injeção e tiveram os úteros removidos (Grupo 1). O segundo grupo, constituído de 15 ratas, foi sacrificado após voltar a apresentar um ciclo estral normal, quando foram submetidos à coleta de esfregaços vaginais e eutanasiados em fase de diestro, o que ocorreu cerca de 20 a 30 dias após o procedimento (Grupo 2). As espessuras do epitélio superficial e do estroma endometrial, o número de glândulas endometriais por campo e a espessura miometrial foram comparadas entre os cornos uterinos de cada animal do Grupo 1. As mesmas comparações foram realizadas entre os cornos dos animais do Grupo 2. Por fim, foi avaliada a regeneração endometrial nos Grupos 1 e 2. RESULTADOS: Todos os animais apresentaram recuperação satisfatória do procedimento, não havendo sinais de toxicidade aguda associada ao uso de ATA. No grupo 1, as medianas da espessura do epitélio superficial do endométrio (ATA 0mm vs. Controle 0,05mm,p=0,0001), da espessura do estroma endometrial (ATA 0,325mm vs. Controle 0,525mm, p=0,0006), do número de glândulas (ATA 4,5 vs. Controle 6,5, p=0,0012) e da espessura miometrial (ATA 0,25mm vs. Controle 0,35mm, p=0,009) foram significativamente inferior no corno que recebeu a injeção de ATA. No Grupo 2, quatro animais (27%) morreram na segunda semana após o procedimento e, em seis animais (40%), o material obtido não pode ser avaliado devido à intensa destruição tecidual. Nos cinco animais restantes (33%) a mediana da espessura do epitélio superficial do endométrio (ATA 0,0mm vs. Controle 0,05mm, p<0,004), da espessura do estroma endometrial (ATA 0,325mm vs. Controle 0,725mm, p=0,011), do número de glândulas (ATA 3 vs. Controle 6,5, p=0,011) e da espessura miometrial (ATA 0,35mm vs. Controle 0,5mm, p=0,024), foram significativamente inferior no corno submetido à injeção de ATA. Quanto à mediana da espessura do epitélio superficial do endométrio (Grupo 1 0mm vs. Grupo 2 0mm, p=1) e à mediana da espessura do estroma endometrial (Grupo 1 0,325mm vs. Grupo 2 0,325mm, p=0,857), não houve diferenças significantes entre os cornos uterinos submetidos à injeção de ATA. A mediana do número de glândulas após a injeção de ATA foi superior no Grupo 1 em comparação ao Grupo 2 (p=0,003). CONCLUSÃO: O estudo permitiu o desenvolvimento de um modelo experimental viável de ablação de endométrio em ratas adultas. As alterações histológicas e histomorfométricas encontradas nos cornos uterinos mostraram que o ácido tricloroacético é um potente agente na destruição química endometrial. Não houve regeneração endometrial após retorno ao ciclo estral. / INTRODUCTION: Dysfunctional uterine bleeding is one of the most prevalent causes of uterine bleeding and it is related to hormonal variations without organic causes. Endometrial ablation is a therapeutic option but the methods are frequently expensive and dependent of high cost technologies. The objective of the present study is to develop an animal model of endometrial ablation in adults female rats. In addition, to evaluated the histological and histomorphometric effects after trichloroacetic acid (TCA) exposure into uterine cavity. METHODS: A total of thirty female adult rats were divided in two groups of 15 rats each. All animals were submitted to injection of 0,3 ml of TCA 90% in one uterine horn and the same amount of saline solution 0,9% (control) in the other. Group 1 was sacrificed in the following day of the procedure, whereas group 2 was sacrificed in phase of diestrous after recovery of normal estral cycle identified by vaginal smears, approximately 20 to 30 days after the procedure. Superficial epithelia of the endometrium, estromal thickness, number of endometrial glands as well as of myometrium thickness were assessed and compared between the uterine horns of the same rats of group 1. The same evaluation was performed in group 2. Also, endometrial regeneration was evaluated comparing histological alterations in the uterine horn that was injected with TCA in group 1 and 2. RESULTS: All animals recovered satisfactorily from the procedure. In group 1, superficial epithelia of the endometrium (TCA 0,0mm vs 0,05 mm control, p=0,0001), estromal thickness (TCA 0,325mm vs 0,525 mm Control, p=0,009), number of endometrial glands (TCA 4,5mm vs 6,5 mm control, p=0,001) and mean myometrial thickness (TCA 0,25mm vs 0,35 mm Control, p=0,0006) presented a significant difference between the horns showing endometrial destruction on TCA uterine horn. In group 2, four rats (27%) died in the second week after the initial procedure and six rats (40%) had no viable material to be analyzed due to extent tissue destruction. The rest of the group (33%) showed a mean superficial epithelia of the endometrium (TCA 0,0mm vs 0.05 mm control, p<0,004), mean estromal thickness (TCA 0,325mm vs 0,725 mm Control, p=0,011), mean number of endometrial glands (TCA 3 vs 6,5 control, p=0,011) and mean myometrial thickness (TCA 0,35mm vs 0.5 mm Control, p=0,024) significant different between horns showing endometrial destruction on TCA uterine horn. There was no significant difference in the mean superficial epithelia of the endometrium (group 1 0mm vs. group 2 0mm, p=1) and mean estromal thickness (group 1 0,325mm vs. group 2 0,325mm, p=0,857) between TCA uterine horn from both groups. However, number of endometrial glands (4,5mm in group 1 vs 3 mm in group 2, p=0,003) was higher in group 1. CONCLUSION: The study developed a valid model for endometrial ablation in adult females rats. The histological and histomorphometric effects observed in the uterine horns showed that the trichloroacetic acid is a potent agent for endometrial ablation in rat model. In the current model no endometrial regeneration was observed after recovery of normal estral cycle.

Atualmente existem vários tratamentos para melhorar a aparência da pele com fotoenvelhecimento. A quimioabrasão é uma dessas técnicas, consiste na associação de esfoliação química com ácido tricloroacético a 35%, seguida por dermabrasão. O ácido tricloroacético facilita a dermabrasão por promover coagulação das proteínas da pele, tornando-a mais friável. Além disto, produz um branqueamento na pele que está relacionado ao seu grau de penetração, auxiliando a uniformização da profundidade atingida com a dermabrasão. A técnica de dermabrasão utilizada neste estudo, foi manual com lixas d?água, por ser indicada para tratamento de regiões da face, como a perioral, pois não evidencia os limites entre as regiões tratadas ou não. Trata-se de um lixamento graduável, sendo mais profundo sobre as rítides e mais superficial na periferia da região tratada. Foram estudadas 12 pacientes submetidas à quimioabrasão para o tratamento de rítides periorais. Após 30 dias, observou-se atenuação das rugas e melhora da textura da pele, em todas as pacientes. Após um ano, os resultados se mantiveram ou ficaram clinicamente melhores. Foi realizado um estudo comparativo da quantificação das células de Langerhans e expressões da molécula de adesão intercelular-1, do antígeno da classe II do complexo principal de histocompatibilidade (HLA-DR), dos linfócitos CD4+ e CD8+ na pele, antes e 30 dias após a realização da quimioabrasão. Todas as pacientes apresentaram redução da quantidade das células de Langerhans, após 30 dias (p=0,002). Não se observou diferença estatisticamente significante para os outros elementos celulares estudados. A diminuição da quantidade das células de Langerhans justificaria o desenvolvimento de infecção por herpes simples, em três pacientes, mesmo sem apresentarem antecedente pessoal para a doença. Este trabalho mostra que as células de Langerhans, mesmo com a reepitelização completa da pele, mantêm-se em menor número, 30 dias após a realização de quimioabrasão. / At the latest years, the interest in improving the appearance of the photoaged skin has increased considerably. Chemabrasion is an effective procedure that alleviates many facial cutaneous disorders like photodamage and wrinkled skin. This is a combined procedure of 35% trichoroacetic acid chemical peel associated with manual dermabrasion with drywall sanding screen. The trichoroacetic acid coagulates skin proteins and promotes a more uniform depth of the dermabrasion. The technique of manual dermasanding takes little skill factor, causes no splatter, provides uniformly pleasant results, and leaves no sharp lines of demarcation. It is indicated for the treatment of subunits of the face. Twelve patients with actinic damage of the perioral skin have undergone chemabrasion. Improvement in rhytides and skin texture were observed in all patients after 30 days and one year. This study also evaluated the expression of CD1-a positive Langerhans cells, ICAM-1, HLA-DR and CD4+ and CD8+ cells, before and one month after the surgery. Significant difference in the expression of anti-CD1a was detected between the two comparison groups, before and after chemabrasion. After 30 days, the Langerhans cells were reduced in all patients (p=0,002). The results of the expression of HLA-DR, ICAM-1, CD4+ and CD8+ cells before and after the surgery had no statistically different significance. After chemabrasion, three patients had herpes virus infection. The resurfacing techniques can cause immunological impairment, which justifies the high incidence of bacterial and virus infections in the skin, after these treatments.

Atualmente existem vários tratamentos para melhorar a aparência da pele com fotoenvelhecimento. A quimioabrasão é uma dessas técnicas, consiste na associação de esfoliação química com ácido tricloroacético a 35%, seguida por dermabrasão. O ácido tricloroacético facilita a dermabrasão por promover coagulação das proteínas da pele, tornando-a mais friável. Além disto, produz um branqueamento na pele que está relacionado ao seu grau de penetração, auxiliando a uniformização da profundidade atingida com a dermabrasão. A técnica de dermabrasão utilizada neste estudo, foi manual com lixas d?água, por ser indicada para tratamento de regiões da face, como a perioral, pois não evidencia os limites entre as regiões tratadas ou não. Trata-se de um lixamento graduável, sendo mais profundo sobre as rítides e mais superficial na periferia da região tratada. Foram estudadas 12 pacientes submetidas à quimioabrasão para o tratamento de rítides periorais. Após 30 dias, observou-se atenuação das rugas e melhora da textura da pele, em todas as pacientes. Após um ano, os resultados se mantiveram ou ficaram clinicamente melhores. Foi realizado um estudo comparativo da quantificação das células de Langerhans e expressões da molécula de adesão intercelular-1, do antígeno da classe II do complexo principal de histocompatibilidade (HLA-DR), dos linfócitos CD4+ e CD8+ na pele, antes e 30 dias após a realização da quimioabrasão. Todas as pacientes apresentaram redução da quantidade das células de Langerhans, após 30 dias (p=0,002). Não se observou diferença estatisticamente significante para os outros elementos celulares estudados. A diminuição da quantidade das células de Langerhans justificaria o desenvolvimento de infecção por herpes simples, em três pacientes, mesmo sem apresentarem antecedente pessoal para a doença. Este trabalho mostra que as células de Langerhans, mesmo com a reepitelização completa da pele, mantêm-se em menor número, 30 dias após a realização de quimioabrasão. / At the latest years, the interest in improving the appearance of the photoaged skin has increased considerably. Chemabrasion is an effective procedure that alleviates many facial cutaneous disorders like photodamage and wrinkled skin. This is a combined procedure of 35% trichoroacetic acid chemical peel associated with manual dermabrasion with drywall sanding screen. The trichoroacetic acid coagulates skin proteins and promotes a more uniform depth of the dermabrasion. The technique of manual dermasanding takes little skill factor, causes no splatter, provides uniformly pleasant results, and leaves no sharp lines of demarcation. It is indicated for the treatment of subunits of the face. Twelve patients with actinic damage of the perioral skin have undergone chemabrasion. Improvement in rhytides and skin texture were observed in all patients after 30 days and one year. This study also evaluated the expression of CD1-a positive Langerhans cells, ICAM-1, HLA-DR and CD4+ and CD8+ cells, before and one month after the surgery. Significant difference in the expression of anti-CD1a was detected between the two comparison groups, before and after chemabrasion. After 30 days, the Langerhans cells were reduced in all patients (p=0,002). The results of the expression of HLA-DR, ICAM-1, CD4+ and CD8+ cells before and after the surgery had no statistically different significance. After chemabrasion, three patients had herpes virus infection. The resurfacing techniques can cause immunological impairment, which justifies the high incidence of bacterial and virus infections in the skin, after these treatments.