Doenças crônicas sistêmicas, em especial o diabetes mellitus, favorecem o aparecimento e a continuidade de lesões dermo-epidérmicas, sendo o impacto econômico e social significativo. No âmbito da medicina regenerativa para o tratamento de lesões cutâneas crônicas, o emprego clínico da bioengenharia de tecidos associada à terapia celular tem sido considerado uma promissora alternativa terapêutica. Neste contexto, o estudo tem como objetivo avaliar a eficácia terapêutica no tratamento de úlceras cutâneas de pacientes diabéticos, empregando células-tronco mesenquimais do tecido adiposo (CT-TA) associadas a plasma rico em plaquetas (PRP) obtido de sangue autólogo. A pesquisa aplicada foi composta por seis pacientes diabéticos e portadores de úlceras cutâneas crônicas. A reepitelização total ocorreu em 5 das 9 lesões tratadas, sendo o índice de cicatrização médio superior a 70% após 3 meses da aplicação. Desta forma, é possível concluir que a terapia com CT-TA associadas a PRP proporciona uma redução na área ulcerosa de lesões cutâneas crônicas em pacientes diabéticos. / Systemic chronic diseases, especially diabetes mellitus, favor the emergency and continuity of dermal-epidermal lesions, being significant the economic and social impact. Within the regenerative medicine field for treatment of cutaneous chronic wounds, the clinical use of tissue bioengineering and cell therapy has been considered as a promising therapeutic alternative. In this context, the present study aims to evaluate the therapeutic efficiency, using adipose-derived mesenchymal stem cells (ADSC) associated with platelet-rich plasma (PRP) obtained from autologous blood, for the treatment of cutaneous ulcers from diabetic patients. The applied research was composed of six diabetic patients with chronic skin ulcers. The total re-epithelialization occurred in 5 of the 9 lesions treated, and the average wound healing index greater than 70% after 3 months of application. In this way, it can be concluded that ADSC therapy associated with PRP provides a reduction in ulcer area of chronic skin lesions in diabetic patients.

A terapia laser de baixa intensidade (TLBI) vem sendo utilizada no tratamento de feridas devido aos seus efeitos cicatrizantes. No entanto, espécies bacterianas podem ser detectadas em úlceras cutâneas crônicas, não estando claro quais os melhores parâmetros a serem utilizados para se obter maior eficácia da inibição das bactérias que podem vir a colonizar essas feridas, já que são escassos os estudos que associam diferentes linhagens de bactérias, com diferentes comprimentos de onda e fluências da TLBI. O objetivo do estudo foi analisar a influência da TLBI no crescimento bacteriano in vitro. Para realização do estudo foram utilizadas linhagens da S. aureus (ATCC 25923), P. aeruginosa (ATCC 27853) e E. coli (ATCC 25922), as quais foram repicadas e incubadas por um período de 24 horas, à temperatura de 37º C. Após o crescimento bacteriano, as células foram suspensas em solução fisiológica com turvação de 0,5 na escala de McFarland (1,5 X 108 UFC/mL-1). Em seguida foram realizadas cinco diluições seriadas até alcançar a concentração de 1,5 X 103 UFC/mL-1. Uma alíquota de 300 L desta suspenção foi transferida para poços da placa de microtitulação e então expostas a irradiação. A seguir uma fração de 100 L foi espalhada sobre a superfície do meio de cultura sólido Mueller-Hinton em placas de Petri (90 x 15 mm), incubada a 37° C e após 24, 48 e 72 horas foram realizadas às contagens de UFC (unidades formadoras de colônias). A irradiação laser (laserpulse - Ibramed® Amparo, SP Brasil) foi realizada nos comprimentos de onda de 450, 660, 830 e 904 nm, nas fluências de 0 (controle), 3, 6, 12, 18 e 24 J/cm2, aplicado de forma direta e perpendicular a placa, a uma distância de 2 mm, sobre uma área de 1 cm2. Todos os dados foram submetidos ao teste de normalidade Shapiro-Wilk, sendo os dados referentes a contagem das UFC submetidos ao teste de Kruskal Wallis e post hoc de Dunn com nível de significância de 5%. A irradiação laser inibiu o crescimento da S. aureus em todos os comprimentos de ondas testados, nas fluências superiores a 12 J/cm², com maiores taxas de inibição em 24 J/cm2 (79,6%). Ao analisar o comportamento da taxa de inibição bacteriana, pode-se observar uma tendência similar entre todos os comprimentos de onda. No entanto, para a P. aeruginosa a TLBI foi capaz de inibir o crescimento em todos os comprimentos de onda, somente na fluência de 24 J/cm², não sendo possível identificar um padrão de inibição. A E. coli apresentou um padrão de inibição nos comprimentos de onda de 450 e 830 nm. Para os comprimentos de onda de 660 e 904 nm pode-se identificar inibição somente em 12 e 18 J/cm2, respectivamente. Assim, pode-se afirmar que a TLBI foi capaz de inibir o crescimento bacteriano em todos os comprimentos de onda, não apresentando o mesmo padrão de inibição entre as espécies bacterianas, comprimento de onda e fluências testadas, se mantendo por até 72 horas após a irradiação. / Low level laser therapy (LLLT) has been used in treatment of wounds due your healing effects. Some bacteria\'s species can be detected in almost all chronic ulcers, being not clear which are the best parameters to more effective inhibition of bacteria that may colonize these wounds. There are just a few studies that relate different bacteria types with different wavelength and different fluence of LLLT. Thus, the study objective is analyze the LLLT effect of bacterial growth in vitro. In this study were used S. aureus (ATCC 25923), P. aeruginosa (ATCC 27853) and E. coli (ATCC 25922), which were transplanted and incubated for 24 hours at a temperature of 37° C. After bacterial growth, the cells were suspended in saline with a turbidity of 0.5 McFarland scale (1.5 X 108 CFU/mL-1). Next, five serial dilutions were performed to achieve a concentration of 1.5 X 103 CFU/mL-1. An aliquot 300 L of this suspension was transferred to wells of a microtiter plate and then exposed to irradiation. Then 100 L of a fraction was spread on the surface of solid culture medium Mueller-Hinton in Petri dishes (90 x 15 mm) plates, incubated at 37° C and after 24, 48 and 72 hours to CFU counts were made (colony forming units). The laser irradiation (Laserpulse - Ibramed® - Amparo, SP - Brazil) was performed at wavelengths of 450, 660, 830 and 904 nm, the fluence of 0 (control), 3, 6, 12, 18 and 24 J/cm2 and applied directly perpendicular to the plate at a distance of 2 mm over an area of 1 cm2. All data were subjected to test normality the Shapiro-Wilk test, and the data for CFU counts submitted to test the Kruskal Wallis test and post hoc Dunn\'s test with a significance level of 5%. The laser irradiation inhibited the growth of S. aureus in all wavelengths tested in the higher fluences to 12 J/cm2, with higher rates of 24 J/cm2 inhibition (79.6%). In analyzing the behavior of the rate of bacterial inhibition, one can observe a similar trend among all wavelengths. However, for the LLLT P. aeruginosa was able to inhibit the growth of all wavelengths, the only fluence 24 J/cm2, it is not possible to identify a standard of inhibition. E. coli showed a standard of inhibition at a wavelength of 450 and 830 nm. For the wavelengths of 660 and 904 nm can be identified only inhibition at 12 and 18 J/cm2, respectively. Thus, it can be stated that LLLT was able to inhibit bacterial growth in all wavelengths, not presenting the same standard inhibition among bacterial species, the wavelength and fluence tested by keeping for up to 72 hours after irradiation.

Orientador: Regina Célia Popim / Resumo: Introdução: As feridas complexas apresentam difícil resolução e associam-se a perda cutânea extensa, infecções importantes, comprometimento da viabilidade dos tecidos e/ou associação com doenças sistêmicas que prejudicam os processos normais de cicatrização, cursam com elevada morbimortalidade e têm sido apontadas como grave problema de saúde pública. Na prática clínica, é importante avaliar as feridas e documentar a avaliação. O registro incompleto sobre o paciente e o tratamento em uso é apontado como um desafio no acompanhamento das feridas e também prejudica ações de gestão, pesquisa e educação. A incorporação de fotografias de feridas à pratica profissional, mostra-se como uma estratégia para auxiliar profissionais na observação, evolução e registro claro e preciso. O Optimum-Path Forest (OPF) é um framework para o desenvolvimento de técnicas de reconhecimento de padrões baseado em partições de caminhos ótimos e particularmente eficiente para a classificação de imagens. O classificador OPF gera resultados a partir do cruzamento das classes e características selecionadas. Objetivo: Descrever as etapas do desenvolvimento de um aplicativo para dispositivos móveis capaz de segmentar e classificar tecidos de feridas complexas baseado no Optimum-Path Forest (OPF) supervisionado. Método: Foi aplicada uma nova metodologia inteligente para análise e classificação de imagens de feridas complexas por meio de técnicas de processamento digital de imagens e aprendizado de máquina com ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Complex wounds are difficult to resolve and are associated with extensive cutaneous loss, major infections, compromised tissue viability and / or are related to systemic diseases that impair normal healing processes, have high morbidity and mortality and have been identified as severe public health problem. In clinical practice, it is important to evaluate the wounds and document the evaluation. The incomplete record on the patient and the treatment in use is pointed out as a challenge in the follow up of the wounds and also impairs management, research and education actions. The incorporation of wounds’ photos in the professional practice, stands out as a strategy to assist professionals in the observation, evolution and clear and precise recording. Optimum-Path Forest (OPF) is a framework for the development of pattern recognition techniques based on optimal path partitions and is particularly efficient for image classification. The OPF classifier generates results from the intersection of the selected classes and characteristics. Objective: Describe the steps in developing a mobile application capable of segmenting and sorting complex wound tissue based on the supervised Optimum-Path Forest (OPF). Method: A new intelligent methodology was applied for the analysis and classification of complex wound images using digital image processing and machine learning techniques with the supervised Optimum-Path Forest (OPF) standards classifier. The image bank of 27 comp... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Talita De Azevedo Coelho Furquim Pereira (talitapereira@bauru.sp.gov.br) on 2018-04-24T00:47:22Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - final repositório.pdf: 1807192 bytes, checksum: 3197e207676b603a47d2146acf83b045 (MD5) / Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2018-04-26T16:58:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pereira_tacf_me_bot.pdf: 1807192 bytes, checksum: 3197e207676b603a47d2146acf83b045 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-26T16:58:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pereira_tacf_me_bot.pdf: 1807192 bytes, checksum: 3197e207676b603a47d2146acf83b045 (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / Introdução: As feridas complexas apresentam difícil resolução e associam-se a perda cutânea extensa, infecções importantes, comprometimento da viabilidade dos tecidos e/ou associação com doenças sistêmicas que prejudicam os processos normais de cicatrização, cursam com elevada morbimortalidade e têm sido apontadas como grave problema de saúde pública. Na prática clínica, é importante avaliar as feridas e documentar a avaliação. O registro incompleto sobre o paciente e o tratamento em uso é apontado como um desafio no acompanhamento das feridas e também prejudica ações de gestão, pesquisa e educação. A incorporação de fotografias de feridas à pratica profissional, mostra-se como uma estratégia para auxiliar profissionais na observação, evolução e registro claro e preciso. O Optimum-Path Forest (OPF) é um framework para o desenvolvimento de técnicas de reconhecimento de padrões baseado em partições de caminhos ótimos e particularmente eficiente para a classificação de imagens. O classificador OPF gera resultados a partir do cruzamento das classes e características selecionadas. Objetivo: Descrever as etapas do desenvolvimento de um aplicativo para dispositivos móveis capaz de segmentar e classificar tecidos de feridas complexas baseado no Optimum-Path Forest (OPF) supervisionado. Método: Foi aplicada uma nova metodologia inteligente para análise e classificação de imagens de feridas complexas por meio de técnicas de processamento digital de imagens e aprendizado de máquina com o classificador de padrões Optimum-Path Forest (OPF) supervisionado. Criou-se o banco de imagens de 27 feridas complexas, que foram rotuladas por quatro especialistas conforme a classificação dos tecidos em quatro classes: granulação (vermelho), tecido fibrinóide (amarelo), necrose (preto) e hematoma (roxo), gerando 108 imagens rotuladas. Acrescentou-se duas classes: branco (o que está na foto, exceto o leito da ferida) e dúvida (divergência na classificação pelos profissionais). O classificador OPF foi treinado a partir dessas 108 imagens. Aplicou-se o OPF às imagens de feridas e verificou-se a acurácia. Em seguida, iniciou-se a construção do aplicativo. Resultados e Discussão: O presente estudo desenvolveu um esquema de classificação de tecido de feridas assistido por computador para avaliação e gerenciamento de feridas complexas, a partir de fotos de feridas da câmera digital de um smartphone. A aplicação do OPF a feridas complexas trouxe como resultado uma acurácia de 77,52% ± 6,14. Com esta ferramenta, foi desenvolvido como produto desta pesquisa um aplicativo para segmentação, classificação de tecidos e mensuração de feridas complexas. O aplicativo gera um relatório no formato Portable Document Format (PDF) que pode ser enviado por e-mail, impresso ou anexado a prontuário eletrônico compatível. Conclusão: Foi construído um banco com 27 imagens de feridas complexas, que quatro profissionais rotularam para treinamento do classificador OPF, aplicou-se o OPF às imagens de feridas complexas, avaliou-se a acurácia deste processo e desenvolveu-se um aplicativo para dispositivos móveis com as funções de segmentação da ferida, classificação de tecidos e mensuração da ferida. Os resultados mostraram que o valor da acurácia obtido na análise computacional teve valor significativo, equiparando-se a avaliação de especialistas em feridas. Comparando com estudos similares, a análise computacional de feridas mostrou-se com menor variabilidade em relação a avaliação de profissionais, sugerindo que a incorporação desta tecnologia na prática clínica favoreça o cuidado em saúde do paciente com feridas complexas, além de fornecer dados para a gestão, ensino e pesquisa. / Introduction: Complex wounds are difficult to resolve and are associated with extensive cutaneous loss, major infections, compromised tissue viability and / or are related to systemic diseases that impair normal healing processes, have high morbidity and mortality and have been identified as severe public health problem. In clinical practice, it is important to evaluate the wounds and document the evaluation. The incomplete record on the patient and the treatment in use is pointed out as a challenge in the follow up of the wounds and also impairs management, research and education actions. The incorporation of wounds’ photos in the professional practice, stands out as a strategy to assist professionals in the observation, evolution and clear and precise recording. Optimum-Path Forest (OPF) is a framework for the development of pattern recognition techniques based on optimal path partitions and is particularly efficient for image classification. The OPF classifier generates results from the intersection of the selected classes and characteristics. Objective: Describe the steps in developing a mobile application capable of segmenting and sorting complex wound tissue based on the supervised Optimum-Path Forest (OPF). Method: A new intelligent methodology was applied for the analysis and classification of complex wound images using digital image processing and machine learning techniques with the supervised Optimum-Path Forest (OPF) standards classifier. The image bank of 27 complex wounds was created, which were labeled by four specialists according to the classification of the tissues into four classes: granulation (red), fibrinoid (yellow) tissue, necrosis (black) and hematoma (purple), generating 108 images. Two classes were added: white (what is in the photo, except the wound bed) and doubt (divergence in classification by professionals). The OPF classifier was trained from these 108 images. The OPF was applied to the wound images and the accuracy was verified. Then, the application developing process was started. Results and Discussion: The present study developed a computer-aided wound tissue classification scheme for evaluation and management of complex wounds from photos of a smartphone. The OPF application to complex wounds resulted in an accuracy of 77.52 ± 6.14. With this 4 tool, it was developed the product of this research: an application for segmentation, tissue classification and measurement of complex wounds. The application generates a Portable Document Format (PDF) report that can be emailed, printed or attached to a compatible electronic medical record. Conclusion: A bank was made with 27 images of complex wounds, which four professionals labeled for training the OPF classifier, applied the OPF to complex wound images, assessed the accuracy of this process and developed a mobile application with the functions of wound segmentation, tissue classification and wound measurement. The results showed that the value of the accuracy obtained in the computational analysis had a significant value, being equal to the evaluation of specialists in wounds. Comparing to similar studies, the computational analysis of wounds showed less variability than professionals´ evaluation, suggesting that the incorporation of this technology in clinical practice favors the health care of patients with complex wounds, besides providing data for the management, teaching and research.

A terapia laser de baixa intensidade (TLBI) vem sendo utilizada no tratamento de feridas devido aos seus efeitos cicatrizantes. No entanto, espécies bacterianas podem ser detectadas em úlceras cutâneas crônicas, não estando claro quais os melhores parâmetros a serem utilizados para se obter maior eficácia da inibição das bactérias que podem vir a colonizar essas feridas, já que são escassos os estudos que associam diferentes linhagens de bactérias, com diferentes comprimentos de onda e fluências da TLBI. O objetivo do estudo foi analisar a influência da TLBI no crescimento bacteriano in vitro. Para realização do estudo foram utilizadas linhagens da S. aureus (ATCC 25923), P. aeruginosa (ATCC 27853) e E. coli (ATCC 25922), as quais foram repicadas e incubadas por um período de 24 horas, à temperatura de 37º C. Após o crescimento bacteriano, as células foram suspensas em solução fisiológica com turvação de 0,5 na escala de McFarland (1,5 X 108 UFC/mL-1). Em seguida foram realizadas cinco diluições seriadas até alcançar a concentração de 1,5 X 103 UFC/mL-1. Uma alíquota de 300 L desta suspenção foi transferida para poços da placa de microtitulação e então expostas a irradiação. A seguir uma fração de 100 L foi espalhada sobre a superfície do meio de cultura sólido Mueller-Hinton em placas de Petri (90 x 15 mm), incubada a 37° C e após 24, 48 e 72 horas foram realizadas às contagens de UFC (unidades formadoras de colônias). A irradiação laser (laserpulse - Ibramed® Amparo, SP Brasil) foi realizada nos comprimentos de onda de 450, 660, 830 e 904 nm, nas fluências de 0 (controle), 3, 6, 12, 18 e 24 J/cm2, aplicado de forma direta e perpendicular a placa, a uma distância de 2 mm, sobre uma área de 1 cm2. Todos os dados foram submetidos ao teste de normalidade Shapiro-Wilk, sendo os dados referentes a contagem das UFC submetidos ao teste de Kruskal Wallis e post hoc de Dunn com nível de significância de 5%. A irradiação laser inibiu o crescimento da S. aureus em todos os comprimentos de ondas testados, nas fluências superiores a 12 J/cm², com maiores taxas de inibição em 24 J/cm2 (79,6%). Ao analisar o comportamento da taxa de inibição bacteriana, pode-se observar uma tendência similar entre todos os comprimentos de onda. No entanto, para a P. aeruginosa a TLBI foi capaz de inibir o crescimento em todos os comprimentos de onda, somente na fluência de 24 J/cm², não sendo possível identificar um padrão de inibição. A E. coli apresentou um padrão de inibição nos comprimentos de onda de 450 e 830 nm. Para os comprimentos de onda de 660 e 904 nm pode-se identificar inibição somente em 12 e 18 J/cm2, respectivamente. Assim, pode-se afirmar que a TLBI foi capaz de inibir o crescimento bacteriano em todos os comprimentos de onda, não apresentando o mesmo padrão de inibição entre as espécies bacterianas, comprimento de onda e fluências testadas, se mantendo por até 72 horas após a irradiação. / Low level laser therapy (LLLT) has been used in treatment of wounds due your healing effects. Some bacteria\'s species can be detected in almost all chronic ulcers, being not clear which are the best parameters to more effective inhibition of bacteria that may colonize these wounds. There are just a few studies that relate different bacteria types with different wavelength and different fluence of LLLT. Thus, the study objective is analyze the LLLT effect of bacterial growth in vitro. In this study were used S. aureus (ATCC 25923), P. aeruginosa (ATCC 27853) and E. coli (ATCC 25922), which were transplanted and incubated for 24 hours at a temperature of 37° C. After bacterial growth, the cells were suspended in saline with a turbidity of 0.5 McFarland scale (1.5 X 108 CFU/mL-1). Next, five serial dilutions were performed to achieve a concentration of 1.5 X 103 CFU/mL-1. An aliquot 300 L of this suspension was transferred to wells of a microtiter plate and then exposed to irradiation. Then 100 L of a fraction was spread on the surface of solid culture medium Mueller-Hinton in Petri dishes (90 x 15 mm) plates, incubated at 37° C and after 24, 48 and 72 hours to CFU counts were made (colony forming units). The laser irradiation (Laserpulse - Ibramed® - Amparo, SP - Brazil) was performed at wavelengths of 450, 660, 830 and 904 nm, the fluence of 0 (control), 3, 6, 12, 18 and 24 J/cm2 and applied directly perpendicular to the plate at a distance of 2 mm over an area of 1 cm2. All data were subjected to test normality the Shapiro-Wilk test, and the data for CFU counts submitted to test the Kruskal Wallis test and post hoc Dunn\'s test with a significance level of 5%. The laser irradiation inhibited the growth of S. aureus in all wavelengths tested in the higher fluences to 12 J/cm2, with higher rates of 24 J/cm2 inhibition (79.6%). In analyzing the behavior of the rate of bacterial inhibition, one can observe a similar trend among all wavelengths. However, for the LLLT P. aeruginosa was able to inhibit the growth of all wavelengths, the only fluence 24 J/cm2, it is not possible to identify a standard of inhibition. E. coli showed a standard of inhibition at a wavelength of 450 and 830 nm. For the wavelengths of 660 and 904 nm can be identified only inhibition at 12 and 18 J/cm2, respectively. Thus, it can be stated that LLLT was able to inhibit bacterial growth in all wavelengths, not presenting the same standard inhibition among bacterial species, the wavelength and fluence tested by keeping for up to 72 hours after irradiation.

Doenças crônicas sistêmicas, em especial o diabetes mellitus, favorecem o aparecimento e a continuidade de lesões dermo-epidérmicas, sendo o impacto econômico e social significativo. No âmbito da medicina regenerativa para o tratamento de lesões cutâneas crônicas, o emprego clínico da bioengenharia de tecidos associada à terapia celular tem sido considerado uma promissora alternativa terapêutica. Neste contexto, o estudo tem como objetivo avaliar a eficácia terapêutica no tratamento de úlceras cutâneas de pacientes diabéticos, empregando células-tronco mesenquimais do tecido adiposo (CT-TA) associadas a plasma rico em plaquetas (PRP) obtido de sangue autólogo. A pesquisa aplicada foi composta por seis pacientes diabéticos e portadores de úlceras cutâneas crônicas. A reepitelização total ocorreu em 5 das 9 lesões tratadas, sendo o índice de cicatrização médio superior a 70% após 3 meses da aplicação. Desta forma, é possível concluir que a terapia com CT-TA associadas a PRP proporciona uma redução na área ulcerosa de lesões cutâneas crônicas em pacientes diabéticos. / Systemic chronic diseases, especially diabetes mellitus, favor the emergency and continuity of dermal-epidermal lesions, being significant the economic and social impact. Within the regenerative medicine field for treatment of cutaneous chronic wounds, the clinical use of tissue bioengineering and cell therapy has been considered as a promising therapeutic alternative. In this context, the present study aims to evaluate the therapeutic efficiency, using adipose-derived mesenchymal stem cells (ADSC) associated with platelet-rich plasma (PRP) obtained from autologous blood, for the treatment of cutaneous ulcers from diabetic patients. The applied research was composed of six diabetic patients with chronic skin ulcers. The total re-epithelialization occurred in 5 of the 9 lesions treated, and the average wound healing index greater than 70% after 3 months of application. In this way, it can be concluded that ADSC therapy associated with PRP provides a reduction in ulcer area of chronic skin lesions in diabetic patients.