- / -

- / -

Η κινάση εστιακής προσκόλλησης (FAK) είναι μια πρωτεϊνική κινάση τυροσίνης (nRPTK) με κυτταροπλασματική κατανομή στην περιφέρεια του κυττάρου. Εντοπίζεται κυρίως σε περιοχές του κυττάρου γνωστές ως εστίες προσκόλλησης, με τις οποίες το κύτταρο προσκολλάται στην εξωκυτταρική ύλη. Συμμετέχει σε σημαντικές κυτταρικές διεργασίες όπως στην κυτταρική κίνηση και μετανάστευση, στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, στην κυτταρική επιβίωση και απόπτωση. Η FAK ενεργοποιείται από πολλά ερεθίσματα που μπορούν να επάγουν φωσφορυλίωση της σε αμινοξέα τυροσίνης (Υ397, Υ576, Υ577, Υ861, Υ925) όπως για παράδειγμα αυξητικοί παράγοντες, νευροπεπτίδια, παράγοντες που ενεργοποιούν υποδοχείς συνδεδεμένους με G-πρωτεΐνες και μηχανικά ερεθίσματα αλλά κυρίως μετά από τη διέγερση των ιντεγκρινικών υποδοχέων των κυττάρων. Ο ρόλος της FAK στην μεταγωγή μηνυμάτων, στο πλαίσιο της κυτταρικής επικοινωνίας είναι διττός: δρα ως κινάση φωσφορυλιώνοντας τα υποστρώματα της αλλά και ως πρωτεΐνη συνδετήρας (adaptor protein) δημιουργώντας πολυπρωτεϊνικά σηματοδοτικά σύμπλοκα. Δεδομένης, λοιπόν, της ιδιαίτερης φύσης του μορίου, η FAK θα μπορούσε να χαρακτηριστεί ως ενεργοποιούμενη πρωτεΐνη ικρίωμα (activable scaffold protein). Στην παρούσα εργασία μελετήσαμε την ενεργοποίηση της FAK κατά την κυτταροφαγία του βακτηρίου E. coli. Έτσι, χρησιμοποιήθηκαν φαρμακολογικοί αναστολείς για να ανιχνευθεί η συμμετοχή τελεστών της μεταγωγής σημάτων στην ενεργοποίηση της FAK. Επιπλέον, διερευνήθηκε με ανοσοκατακρημνίσεις η συμπλοκοποίηση της FAK με πρωτεΐνες-κλειδιά σημαντικών κυτταρικών μονοπατιών σε κύτταρα που βρίσκονταν σε εναιώρημα. / Cells respond to extracellular stimuli with the recruitment of multiple cytoskeletal and regulatory proteins, which form specialized complexes. These complexes are usually involved in the promotion of integrin-mediated signals to the nucleus. In this study, we investigated whether any signal transduction complexes are constitutively present, in Medfly hemocyte suspension, in the absence of external stimuli. Hemocytes from the 3rd instar larvae were isolated and protein crude extracts were prepared. In hemocyte lysates, the presence of FAK (focal adhesion kinase), Integrin β1 and the adaptor protein Paxillin was identified with immunoprecipitation and immunoblot analysis. The presence of these proteins was also confirmed with immunofluorescence microscopy, in attached hemocytes on glass slides. Co-immunoprecipitation with FAK and immunoblot analysis with anti-Paxillin, anti-tubulin, anti-actin and anti-ERK revealed the complex formation of FAK with Paxillin, Tubulin, Actin and ERK in hemocyte suspensions. The profiles of this complex and of each one of these proteins, separately, varies, during development and phagocytosis of E.coli. Consequently, it was demonstrated that FAK forms complex with cytoskeletal proteins like paxillin, tubulin, actin and signalling proteins such as ERK, in Medfly hemocytes, without the influence of any extracellular stimuli.

- / -

- / -

- / -

- / -

- / -

- / -

- / -