El estudio de los mecanismos de reprogramación nuclear tiene actualmente una notable importancia, dado que el dominio de estos procesos constituyen la clave para actuar eficazmente en cuestiones tan dispares como el cáncer o la medicina regenerativa. También resulta muy importante este tipo de estudios sobre reprogramación cuando se pretende la obtención de animales transgénicos múltiples y orientados. Aunque para ello se pueden utilizar muy diversos modelos animales, en nuestro caso, se ha optado por el pez cebra, por sus características en el desarrollo, como la brevedad en la embriogénesis y transparencia de los embriones, su capacidad de regeneración y el conocimiento de su genoma, entre otras. Bien es cierto que a estas ventajas le acompañan cierto inconvenientes tales como no disponer hasta este momento de técnicas tales como el transplante nuclear y, a otro nivel, el quimerismo. Técnicas cuyos desarrollo se pretende en esta tesis, lo que justifica los objetivos aquí planteados. Para ello se han realizado diferentes trabajos experimentales titulados: "Ultraviolet radiation and handling medium osmolarity affect chimaerism success in zebrafish", "Evaluation of presumptive caudal fin blastema cells as candidate donors in intraspecies zebrafish (Danio rerio) chimaeras", "Definition of three somatic adult cell nuclear transplant methods in zebrafish (Danio rerio): before, during and after egg activation by sperm fertilization", "Transplant of adult fibroblast into the central region of metaphase II eggs resulted in mid blastula transition (MBT) embryos", "Electroactivation of zebrafish (Danio rerio) eggs", "Comparison of different activating stimuli efficiency in zebrafish nuclear transplant", "Reconstruction of heteroparental gynogenetic diploid condition by nuclear transplant in zebrafish". Los dos primeros relativos al quimerismo, su eficiencia final se optimizó mediante la penalización con radiación UV del embrión receptor. / Pérez Camps, M. (2009). Epigenetic reprogramming of somatic cells by nuclear transplant in zebrafish [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/6902 / Palancia

En este trabajo de tesis, se presentan diversos estudios experimentales, desarrollados prin cipalmente en pez cebra pero también en ostra del Pacífico, que persiguen la puesta a punto de técnicas relevantes para la utilización de estas dos especies en el campo de la biomedicina, la toxicogenómica y la acuicultura como modelo experimental. En pez cebra, se han puesto a punto y testado: Técnicas de vitrificación de tejido de aleta caudal, de blastómeras (en microvolúmenes) y de tejido gonadal. Técnica de quimerismo de la línea germinal en estadio MBT, con una penalización previa por radiación ultravioleta de los embriones receptores. Técnica de quimerismo larvario (larvas de 48-72 h) utilizando como donantes células testiculares obtenidas de individuos adultos y previamente criopreservadas. Técnica de transplante nuclear utilizando como donantes núcleos de células somáticas adultas y larvarias. Técnica de electroactivación en medio iónico de oocitos de pez cebra. In ostra del Pacífico, se han puesto a punto y testado: Evaluación de los cambios estacionales en la calidad oocitaria y espermática en ostra del Pacífico. Técnica de electrofusión cigótica de cigotos obtenidos por fecundación in vitro en ostra del Pacífico. Técnicas de vitrificación de tejido de aleta caudal, de blastómeras (en microvolúmenes) y de tejido gonadal. En relación con este grupo de técnicas, señalar el diferente nivel de dificultad de cada una de ellas e incluso de los resultados alcanzados. Así, la vitrificación de tejido de la aleta caudal no ha supuesto problema adicional respecto a la aplicación de dicha técnica en los últimos años a tejidos epiteliales de cinco especies de mamíferos, lo que da idea de la versatilidad en el uso de dicha técnica de vitrificación básica. Por contra, la criopreservación de blastómeras ha supuesto un verdadero reto, ya que los patrones de permeabilidad celular en esta especie acuática es muy diferente a la característica en mamíferos. / Cardona Costa, J. (2010). EMBRYOLOGICAL AND MICROMANIPULATION TECHNIQUES IN ZEBRAFISH (Danio rerio) AND PACIFIC OYSTER (Crassostrea gigas) [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/8326 / Palancia