Objetivo general: Caracterizar genoarquitectonicamente de modo comparado la placa alar mesencefálica del ratón y el pollo durante el desarrollo y la vida postnatal temprana. Materiales y métodos: Se utilizaron ratones de la cepa Swiss Albino. Se analizaron embriones de E10.5, E11.5, E12.5, E14.5, E16.5 y E18.5, así como algunos estadios postnatales y el adulto (P0, P10-14, P25 y P56). En el estudio de aves se utilizaron embriones de pollo (HH30-HH45) y algunos estadios postnatales (P1, P2, P6). Para llevar a cabo el análisis pretendido se realizaron hibridaciones in situ con múltiples sondas de RNAm en embriones in toto, o en secciones de vibratomo y de criostato. El material procesado fue escaneado utilizando el software Image Scope. Finalmente los datos fueron seleccionados para su interpretación y análisis. Resultados: Como resultado del análisis genoartiquectónico se caracterizó molecularmente los límites rostral y caudal del mesencéfalo de ratón y pollo durante el desarrollo y algunos estadios postnatales. Además de los ya conocidos marcadores Pax6, Tcf7l2 y Fgf8, otros factores de transcripción tales como Lim1, Lhx2, Foxp1, Tcfap2B, Dbx1, Esrrb y FoxB1 resultaron útiles para identificar estos límites. Además estos datos genoarquitectónicos han contribuido a clarificar los límites entre los dominios alares anteroposteriores y los subdominios dorsoventrales de m1 y m2 (mesomeros 1 and 2). Se ha llevado a cabo un detallado estudio genoarquitectónico comparado de los colículos superior e inferior (torus semicircular) del pollo y el ratón, lo cual ha permitido confirmar y en su caso postular homologías de sus componentes estructurales (capas, núcleos, poblaciones neuronales) entre ambas especies. Otras regiones comprendidas en este estudio son el gris tectal y el área preístmica. Conclusiones: Los datos obtenidos en este estudio permiten disponer de marcadores adicionales para localizar con precisión los límites del mesencéfalo, así como también identificar las regiones y subregiones alares que componen los mesómeros 1 y 2. Los abundantes datos moleculares obtenidos contribuirán a futuros estudios de los dominios alares mesencefálicos, cuya finalidad sea comprender los fenómenos causales de su proceso de laminación o especificación celular diferencial. Finalmente, se aporta la definición de un nuevo territorio histogenético radial intercalado entre los colículos superior e inferior, el área intercollicular. Por otra parte el detallado análisis genoarquitectónico comparado del colículo inferior/torus semicircular entre pollo y ratón ha permitido postular posibles homologías entre ambas especies. / Characterize comparatively the genoarchitectonic structure of the mesencephalic alar plate of the mouse and chick during development and early postnatal life. Methods: The study used mice wild Albino Swiss strain. We analyzed embryos at E10.5, E11.5, E12.5, E14.5, E16.5 and E18.5; as well as selected postnatal stages and the adult (P0, P10-14, P25 y P56). To carry out the intended analysis multiple in situ hybridizations with mARN probes were performed on whole embryos, in vibratome sections and cryostat sections. In selected cases an immunohistochemical reaction served as counterstaining of the hybridization. The processed material was scanned using Image Scope software. Finally, specific data were selected for further interpretation and analysis. Results: Using our genoarchitectonic approach we characterized molecularly the rostral and caudal midbrain limits during all stages of development and some postnatal stages. Besides the known relevant markers Pax6, TCF7L2 and Fgf8, other patterns of transcription factors such as Lim1, Lhx2, Foxp1, Tcfap2b, Dbx1, FoxB1 and Esrrb were useful to identify these limits. Furthermore, these genoarchitectonic data helped to clarify the boundaries between the various anteroposterior alar domains and their respective dorsoventral subdomains across m1 and m2 (mesomeres 1 and 2). Finally, the analysis allowed obtaining data on the selective expression of genes in the different strata that make up the layers of the superior and inferior colliculi. Other studied regions were the tectal gray, the intercollicular area and the preisthmic area. Conclusions: The data obtained in this study identified additional markers that accurately locate the boundaries of the midbrain, and served to identify genoarchitectonically distinct regions that make up the alar plate of mesomere 1. The novel intercollicular area was identified as a full radial histogenetic zone. Finally, abundant molecular data were generated that will contribute to future causal developmental studies of the superior and inferior colliculi, as regards the process of layering or cell specification. Moreover, detailed postulates of homology were proposed between the structural components of the mammalian inferior colliculus and the avian torus semicircularis.

Tesis por compendio de publicaciones / Anogenital distance (AGD) is a sexually dimorphic trait in mammals. Several experimental studies have shown that AGD at birth reflects androgen levels during in utero development and predicts AGD in adulthood. In men, a positive association between AGD and androgen levels as well as reproductive function has been shown, which has not been studied in human female population. The aim of this study was to explore the relationship between the mother´s gynaecologycal characteristics and maternal exposures and some health reproductive characteristics in the female offspring. Methods: This is a cross sectional study of 100 healthy young university students (18–23 years old) carried out between February 2011 and November 2011 in the Murcia region. Physical and gynaecological examinations were conducted on the young women taking two variants of AGD: anus-clitoris (AGDAC) and anus-fourchette (AGDAF). Besides, all participants provided a blood sample for determination of reproductive hormones and the students as well as their mothers completed an epidemiological questionnaire on lifestyles and gynaecological history. We used multiple linear regression analysis to examine the associations between AGD measurements and the mothers´ gynaecological characteristics as well as AGD and the reproductive hormone levels in the young participants. We used multiple linear and logistic regression analysis to examine the association between maternal exposition to products of daily use during pregnancy and the AGD in their female offspring as well as between AGD and features of the students´ reproductive system. Results: A statistically significant positive association was found between maternal exposure to insecticides/pesticides and solvents/degreasers during pregnancy and AGDAF in female offspring (OR: 3.9, 95% CI 1.2, 12.7 and 3.8, 95% CI 1.1, 12.6, respectively) as well as between the presence of maternal irregular menstrual cycles before pregnancy and their daughters´ AGDAF greater (p=0.03). The young participants´ AGDAF was positively associated with serum testosterone levels (p<0,05). Serum testosterone increased 0.06 ng/ml (95% CI 0.01, 0.10; p=0.02) for each cm of increase in AGDAF. Besides, both AGD measures were positively associated with ovarian follicle number in the university students. Women in the upper tertile of AGDAF and AGDAC distributions were more likely to have ≥ 6 ovarian follicles [OR: 6.0 (95% CI 2.0, 17.6) and 3.0 (95% CI 1.1, 8.6), respectively] compared to women in the lowest tertile. Conclusion: Our results suggest that certain maternal characteristics and exposures during in utero development are related to AGD in female offspring. AGD can be used as a sensitive biomarker of exposure to androgens in utero development. AGD might predict normal genital development in women, and might be used as a new instrument to evaluate ovarian function. Our results suggest, therefore, that the androgenic environment during early fetal life may exert a fundamental influence in the human female reproductive system. / La distancia anogenital (DAG) es un marcador de desarrollo genital que presenta dimorfismo sexual en mamíferos. Diversos estudios experimentales han mostrado que la DAG al nacimiento refleja la exposición androgénica a la que el feto ha estado expuesta durante su desarrollo intrauterino y predice la DAG en la vida adulta. A su vez, la DAG se ha mostrado asociada con los niveles séricos de andrógenos y función reproductiva en varones, algo que no ha sido estudiado en población femenina humana. El objetivo de este estudio fue explorar la relación entre características ginecológicas y exposiciones maternas con parámetros del sistema reproductivo en la descendencia femenina. Métodos: Se trata de un estudio transversal realizado entre febrero-noviembre del 2011 que incluyó 100 jóvenes universitarias sanas entre 18-23 años de la Región de Murcia. A cada participante se le realizó un examen físico y ginecológico completo que incluyó dos variantes de DAG: ano-clítoris (DAGAC) y ano-horquilla vulvar (DAGAH). Además se tomó una muestra de sangre de las jóvenes participantes y tanto éstas como sus madres completaron un cuestionario epidemiológico sobre estilos de vida e historia ginecológica. Se utilizó un análisis de regresión lineal para examinar la asociación entre las medidas de DAG y características ginecológicas maternas y la relación entre las DAGs y niveles de hormonas reproductivas en las jóvenes. Se empleó análisis de regresión lineal y logística multivariante para conocer las asociaciones entre las exposiciones maternas a productos de uso cotidiano durante el embarazo y la DAG de las hijas, y entre las DAGs y características del sistema reproductivo de las universitarias. Resultados: Se encontró una asociación positiva estadísticamente significativa entre mayor exposición materna a insecticidas/ plaguicidas y disolventes/desengrasantes durante el embarazo y DAGAH en descendencia femenina (OR: 3.9; IC 95% 1.2, 12.7 y 3.8; IC 95% 1.1, 12.6, respectivamente), así como entre la presencia de ciclos menstruales irregulares maternos antes del embarazo y mayor DAGAH de sus hijas (p=0,03). DAGAH de las jóvenes participantes se asoció positivamente con sus niveles de testosterona en suero (p<0,05). Testosterona sérica aumentó 0,06 ng / ml (IC del 95%: 0.01, 0.10; p=0.02) por cada cm de aumento de AGDAH. Además, ambas medidas de DAG se asociaron positivamente con el número de folículos ováricos en las universitarias. Aquellas con DAGAH y DAGAC en el tertil superior eran más propensas a tener ≥ 6 folículos ováricos [OR: 6,0 (IC del 95%: 2,0, 17,6) y 3,0 (IC 95 % 1.1, 8.6), respectivamente] en comparación con aquellas del tertil inferior. Conclusiones: Nuestros resultados respaldan que ciertas condiciones y exposiciones maternas durante el período prenatal podrían estar asociadas con variaciones de las DAGs en sus hijas. Las DAGs son útiles como biomarcador que refleja la exposición androgénica fetal durante el desarrollo intraútero. Además, la DAG parece predecir el desarrollo reproductivo normal en las mujeres, y podría ser una nueva herramienta de potencial interés clínico para evaluar la función ovárica. Por tanto, nuestros resultados sugieren que el medio ambiente androgénico durante la vida fetal temprana puede influir en el desarrollo del sistema reproductivo de las mujeres.

El objetivo general de esta tesis es la caracterización de la migración protagonizada por un conjunto de neuronas Pax6+ en el tálamo del pollo y del ratón y su análisis comparativo. MATERIALES Y MÉTODOS Se utilizaron embriones de pollo (HH28 – HH38) para analizar mediante técnicas de inmunohistoquímica y de hibridación in situ con sondas de mRNA del gen Pax6 en secciones de vibratomo. También se llevaron a cabo marcajes mediante BDA y posterior cultivo organotípico. Las preparaciones fueron escaneadas y analizadas. Las imágenes de secciones de cerebros de ratón procesadas mediante hibridación in situ para el gen Pax6 de estadios embrionarios y postnatales fueron obtenidas del atlas de desarrollo del ratón (Allen Brain Atlas). RESULTADOS Y CONCLUSIONES Las observaciones obtenidas confirman la existencia de una migración neuronal tardía que se origina en la región retrohabenular, en el techo posterior del prosómero 2. Las células migratorias Pax6+ comienzan a visualizarse claramente en la región retrohabenular en el estadio HH31, terminando la migración aparentemente en HH37. Se desplazan desde su origen laterorrostralmente en la zona fronteriza entre la región habenular y el tálamo propiamente dicho. En el caso del pollo, este avance es más marcado y alcanza, a través del núcleo superficial microcelular, regiones cercanas a la frontera intertalámica, incorporándose escasas células de esta migración a la región habenular lateral. En ratón, en cambio, la migración penetra más importantemente en la región habenular lateral donde acaba integrándose en el subnúcleo parvocelular de la división lateral del núcleo habenular lateral y a penas se observan otras células fuera de esa zona habenular. En el pollo se observa un segundo origen celular Pax6+ a continuación del área retrohabenular, ya en la zona pretectal precomisural. Desde este origen existe una pequeña migración que alcanza aparentemente las inmediaciones del núcleo parvocelular de la comisura posterior. El resultado de los marcajes con BDA in vitro en el estadio HH31, de producción inicial de estas células, corroboró la existencia de un movimiento migratorio desde este origen en la región retrohabenular hacia la zona de destino descrita mediante hibridación in situ de Pax6, tanto en el caso de la migración talámica como la pretectal. Desde el punto de vista de la anatomía comparada, se concluye que los fenómenos retrohabenulares migratorios observados en el pollo y en el ratón coinciden en su cronología embriológica, ya que aparecen en estadios comparables y en ambos casos figura como diana la región habenular lateral. Si bien en el pollo aparecen células que parecen invadir zonas no habenulares cercanas cabe preguntarse si no cabría incluir dichas regiones en la zona habenular. En el caso del ratón las células migradas componen una subpoblación menor del área habenular lateral que forma el subnúcleo parvocelular de la división lateral del núcleo habenular lateral. / The overall objective of this thesis is to characterize the migration of a population of Pax6+ neurons in the chick and mouse thalamus and its comparative analysis. METHODS Chick embryos (HH28 – HH38) were used to analyze by immunohistochemistry and in situ hybridization with Pax6 mRNA probes in vibratome sections. Labelling with BDA were also carried out and subsequent organotypic culture. The preparations were scanned and analyzed. The images of mouse brain sections processed by in situ hybridization for the Pax6 gene in embryonic and postnatal stages were obtained from the atlas of mouse development (Allen Brain Atlas). RESULTS AND CONCLUSIONS The observations confirm the existence of a late neuronal migration originated in the retrohabenular region, in the posterior roof of prosomere 2. Migratory Pax6+ cells become clearly visible in the retrohabenular region at HH31, finishing the migration apparently at HH37. They progress from their origin latero-rostrally through the habenular-thalamic border. This advance is more pronounced in the chick, reaching through the superficial microcellular nucleus regions near the intrathalamic border, joining few of these migrating cells the lateral habenular region. In contrast, the migration in mouse penetrates mainly in the lateral habenular region where it integrates the parvocellular subnucleus of the lateral division of the lateral habenular nucleus and scarce cells are found out of the habenular region. A second Pax6+ cellular origin is found in chick, adjacent to the retrohabenular area, in the precommisural pretectal region. From this origin a small migration takes place apparently to the surroundings of the parvocellular nucleus of the posterior commisure. The results of the in vitro BDA labelling at HH31, initial production stage of these cells, confirmed the existence of a migratory movement from this origin in the retrohabenular region to the target area described by Pax6 in situ hybridization, for both thalamic and pretectal migrations. From a comparative anatomical point of view, the retrohabenular migratory phenomena observed in chick and mouse concur in their embryological chronology, since they appear at comparable stages and the target is the lateral habenular region in both cases. While in chick there appear cells invading nearby non habenular regions, one might wonder whether these regions should be included in the habenular zone. In the case of mouse, the migrated cells shape a minor subpopulation of the lateral habenular area that forms the parvocellular part of the lateral division of the lateral habenular nucleus.

No hay estudios donde se haya contrastado la valoración de pacientes tratados con una artroplastia total de rodilla, en los que se compare la valoración objetiva que realiza el cirujano al emplear la escala HSS, con la que realiza el paciente de manera subjetiva al emplear los cuestionarios WOMAC y EuroQol-5D (EQ-5D), ni se ha estudiado la influencia de la desalineación de los miembros inferiores, la insuficiencia venosa y la hipertensión, sobre la calidad de vida percibida por el paciente tras implantar una artroplastia total de rodilla (ATR). Nuestro objetivo es verificar que existe una alta correlación entre el HSS, con el WOMAC y el EuroQol-5D en los pacientes intervenidos de ATR, así como si factores como el índice de masa corporal (IMC), padecer diabetes mellitus, tener una cardiopatía, sufrir hipertensión, presentar una desalineación de los miembros inferiores o padecer insuficiencia venosa crónica, modifican los resultados del WOMAC y del EuroQol-5D. Se realizó un estudio prospectivo observacional donde se incluyeron 213 pacientes con una edad media de 69,62 años que presentaban gonartrosis grado III o IV a los que se les implantó una ATR por el mismo cirujano entre los años 2004 y 2010. La toma de datos se realizó en cuatro tiempos: preoperatorio, tres, seis y doce meses tras la cirugía. Se comprobó que existe una correlación estadísticamente significativa entre los datos obtenidos en el Euro-Qol-5D y el WOMAC en cuanto a la movilidad (p<0,01) y el descenso del dolor (p<0,02) tras una ATR. No encontramos correlación en cuanto a la mejoría del dolor tras implantar la ATR, al comparar los datos obtenidos entre el HSS frente a los del EuroQol-5D y del WOMAC Sí se halló correlación estadísticamente significativa entre los tres cuestionarios para la mejoría del arco de movimiento y la no necesidad de bastón o muletas para caminar tras la intervención quirúrgica (p<0,05). Los pacientes con un IMC>30 tenían peores resultados en el WOMAC que los pacientes con un IMC<30 aunque la diferencia no era estadísticamente significativa (p>0,05). Ambos grupos mejoraron de forma significativa al año de llevar la prótesis de rodilla (p<0,03). No encontramos correlación (estadísticamente significativa) en cuanto a la mejoría del dolor tras ATR, al comparar los datos obtenidos entre el HSS y los del EuroQol-5D y el WOMAC para los pacientes con IMC>30 o IMC<30. Sí se halló correlación estadísticamente significativa entre los tres cuestionarios para la mejoría del arco de movimiento (Grupo I = p<0,01, Grupo II = p<0,03) y la no necesidad de bastón o muletas para caminar tras la intervención quirúrgica (Grupo I = p<0,04, Grupo II = p<0,02). Las variables hipertensión arterial, cardiopatía, diabetes mellitus, deformidad severa de rodilla y tener un IMC>30 se correlacionaban con obtener peores resultados en el WOMAC y el Euro Qol-5D. No encontramos correlación significativa entre el flexo, la laxitud y la deformidad en varo/valgo, estando la gran mayoría de los pacientes satisfechos con el resultado quirúrgico obtenido. Concluimos que se obtienen peores valoraciones objetivas clínicas con el cuestionario HSS, que la valoración de la calidad de vida que realiza el propio paciente tras la cirugía con cuestionarios de calidad de vida como el WOMAC y el EQ-5D. Aquellos pacientes que van a ser intervenidos de una artroplastia total de rodilla y que presentan un IMC >30, hipertensión arterial, diabetes mellitus, alguna cardiopatía o una deformidad en varo o en valgo severa, tienen más posibilidades de conseguir peores resultados con el WOMAC y con el EuroQol-5D, y por lo tanto que aumente el riesgo de insatisfacción con el resultado de la Artroplastia Total de Rodilla. / We have decided to perform this research work, due to the non-existence of studies where the patient and surgeon expectations on TKR were analysed employing the HSS, WOMAC and EuroQol-5D (EQ-5D) test and studies where the influence on the patient Health Related Quality of Life of the following parameters: having diabetes, a cardiac pathology, high blood pressure, a lower limb alignment deformity, Chronic Venous Insufficiency or the implant design have been performed. We wanted to determine if the results obtained with a clinical score as HSS are correlated with the results recruited on Health Related Quality of Life (HRQoL) scores like WOMAC and EuroQol-5D; and estimate if having diabetes, cardiac pathology, high blood pressure, lower limb alignment deformity, Chronic Venous Insufficiency or the implant design influence on the results obtained on the WOMAC and EuroQol-5D. A prospective study has been done including 213 patients with knee osteoarthritis (Kellgren and Lawrence 3 rd and 4 th degrees) operated of a TKR by the same surgeon during 6 years. The collection of data has been performed on four times: preoperatory, three, six and 12 months postop We found a statistically significant correlation between the Euro-Qol-5D and y el WOMAC on the improvement of the range of movements (p<0, 01) and the pain reduction (p<0, 02) after a TKR. A statistically significant correlation has been detected once the results of the HSS, EuroQol-5D and WOMAC were compared for the improvement of the range of movements and the use of a stick or crutches to walk after the surgery (p<0.05). Present a cardiac pathology, diabetes or a severe varus-valgus deformity was statistically significant correlated with obtaining a worst WOMAC and EuroQol-5D postsurgical result. Patients with a BMI>30 presented worst results on the WOMAC tan patients with a BMI <30 even if the difference between both groups was not statistically significant (p>0, 05). Both groups improved significantly after 12 months of follow-up (p<0, 03). Comparing the results of the HSS preop and 12 months postop we have seen that the range of movements didn’t improve significantly on patients with a BMI <30 (p>0,05) and it improve significantly on patients with a BMI>30 ( p<0.00). After comparing the HSS, EuroQol-5D and WOMAC results; we didn’t found a statistically significant correlation (p>0.05) for the improvement of pain on patients with a BMI>30 or BMI <30; but we have noticed a statistically significant correlation (BMI <30 = p<0, 01, BMI>30 = p<0, 03) for the improvement of the range of movements and the need of a stick or crutches. Present a cardiac pathology, diabetes a BMI > 30 or a severe varus-valgus deformity was statistically significant correlated with obtaining a worst WOMAC and EuroQol-5D postsurgical result. We didn’t found a significant correlation between the flexum, instability and the lower limb deformity; being the majority of the patients satisfied with their surgical result. Objective clinical estimation measured with the HSS questionnaire; doesn’t correlate with the improvement on quality of life that the patient experiments after the surgery through the WOMAC and the EuroQol-5D for the parameters pain and correction of the deformity postop and correlates with the parameters range of movements and use of stick-crutches. Patients that are going to have a TKR and present high blood pressure, diabetes, a cardiac pathology or a severe varus-valgus deformity have more possibilities of obtain worst results on the WOMAC and EuroQol-5D and the risk of dissatisfaction with the result of the TKR can be increased.

Introducción: nuestro conocimiento actual de la anatomía de la sustancia blanca cerebral es muy limitado. Material y Métodos: se estudiaron 15 especímenes de autopsias frescas. Se realizó disección de fibras con preservación cortical. Se estudiaron 4 voluntarios sanos mediante tractografía por tensor de difusión (DTI) con un escáner de RM de 3.0 Teslas. Resultados: en este trabajo se evidenció que el fascículo uncinado atraviesa el tercio anterior del istmo temporal, mientras que el fascículo fronto-occipital inferior (FFOI) atraviesa los dos tercios posteriores del istmo temporal. Se identificaron dos componentes del FFOI: (i) porción superficial y dorsal, y (ii) porción profunda y ventral. Por último, se aislaron tres segmentos del componente perisilviano del fascículo longitudinal superior (FLS): (A) porción horizontal, (B) porción vertical, y (C) el fascículo arcuato. Conclusiones: en este trabajo se presenta una nueva técnica de disección de fibras, esta técnica permite aislar los tractos de sustancia blanca, respetando al mismo tiempo la estructura cerebral durante todas las etapas de la disección.

Un área muy actual de investigación es el estudio de las causas del envejecimiento. En el ámbito de la biología reproductiva también lo está siendo por sus implicaciones tanto en la medicina como en la veterinaria. Si durante muchos años los estudios se han centrado en la mujer o en las hembras para explicar el descenso reproductivo con la edad actualmente se está prestando más atención al factor masculino. Estos estudios abordan varios aspectos: cambios endocrinos, alteraciones de los espermatozoides, trasmisión de enfermedades hereditarias, o la necesidad de terapias sustitutivas de testosterona en la vejez. Respecto a los cambios histológicos del testículo envejecido, se han realizado diversos estudios desde hace décadas, pero han dejado ciertas cuestiones sin aclarar y se han centrado en el hombre y en la rata. Junto a esto, durante los últimos años, diversos autores han propuesto que el mecanismo tisular implicado en la progresiva disminución de la espermatogénesis con la edad, está relacionado con cambios en el equilibrio entre la proliferación/apoptosis en el epitelio seminífero. En la presente tesis doctoral nos hemos propuesto por un lado, realizar un completo análisis histológico tanto cualitativo como cuantitativo de los cambios que acontecen con la edad en el epitelio seminífero y pared tubular del hámster sirio. Por otro, hemos investigado también si la proliferación está o no alterada en este epitelio relacionándola con las alteraciones histológicas observadas en el mismo. Para ello, utilizamos hámsteres machos de 6, 12 y 24 meses de edad. Los testículos fueron fijados y procesados para microscopia de luz convencional e inmunohistoquimica y, electrónica de transmisión. Se realizó un estudio semicuantitativo del tipo histológico de degeneración de las secciones de los túbulos seminíferos determinando el grado de progresiva alteración de su epitelio con la edad. Inmunohistoquímicamente se identificó la inmunoreactividad a laminina y fibronectina en la pared tubular y las células en proliferación. Morfométricamente se calculó una serie de parámetros testiculares y el volumen total de inmunoreactividad a fibronectina y laminina. Respecto a la proliferación se calculó el índice total de proliferación como el número de células proliferando por tipo histológico de sección tubular. Por último, con las secciones ultrafinas se realizó una descripción ultrarestructural del epitelio seminífero y se calculó el grosor de la pared tubular. En los animales envejecidos se observó un incremento significativo de las secciones tubulares con diversas alteraciones del epitelio seminífero especialmente hipoespermatogénesis y detención de la espermatogénesis. El volumen del testículo, el diámetro y volumen del túbulo como el volumen de epitelio del túbulo seminífero sufrieron un descenso significativo con la edad, por el contario la longitud del túbulo se incrementó. El volumen de fibronectina y laminina aumento en los animales viejos siendo el índice de proliferación menor en estos animales. El número de células en proliferación por tipo histológico de sección de túbulo seminífero fue progresivamente y significativamente menor en las secciones alteradas respecto a las secciones normales. No se observó diferencias significativas respecto a la edad entre tipos histológicos de sección de túbulo seminífero. Ultraestructuralmente se observó alteraciones citológicas importantes en la célula de Sertoli así como en el proceso de espermiogénesis. La pared presentó un engrosamiento significativo tanto en los túbulos normales como en los hipoespermatogénicos o en detención de la espermatogénesis. En conclusión, el envejecimiento del túbulo seminífero del hámster supone una pérdida progresiva de la actividad espermatogénica que está relacionada con cambios del túbulo y de su pared. Estos cambios no se producen de forma uniforme en todo él y se asocian a una disminución de la proliferación celular en sus zonas alteradas histológicamente. Éstas presentan además células de Sertoli modificadas ultraestructuralmente. / A very current area of research is the study of the causes of aging. In the field of reproductive biology the aging is important by their implications both in medicine and veterinary. If for many years the studies have focused on women or females to explain the reproductive decline with age it is now being paid more attention to male factor. These studies address several aspects: endocrine changes, abnormal sperm, transmission of hereditary diseases, or the need for testosterone replacement therapy in older age. Regarding the histological changes of aging testes, they have conducted several studies for decades, but have left some issues unclear and have focused on humans and rats. Alongside this, in recent years, several authors have proposed that the mechanism involved in decrease of spermatogenesis with age, is related to changes in the balance between proliferation / apoptosis in the seminiferous epithelium. In this thesis we have proposed on the one hand, a complete histological analysis of qualitative and quantitative changes that occur with age in the seminiferous epithelium and tubular wall of the Syrian hamster. Furthermore, we have also investigated whether this proliferation in the epithelium altered is linked with the histological changes observed in it. To do this, we use male hamsters 6, 12 and 24 months old. The testes were fixed and processed for conventional light microscopy, immunohistochemistry and transmission electron microscopy. A semiquantitative histological study of sections of seminiferous tubules for determining the degree of gradual deterioration with age, in its epithelium was performed with age. Immunoreactivity to laminin and fibronectin in the tubular wall and proliferating cells was identified. Morphometrically a series of testicular parameters and the total volume of fibronectin and laminin immunoreactivity was calculated. The total proliferation index as the number of proliferating cells by histologic type of tubular section was calculated. Finally, with ultrathin sections, an ultrarestructural description of seminiferous epithelium, and thickness determination of tubular wall was performed. In aged animals a significant increase in the tubular sections with various disorders especially hypospermatogenesis of seminiferous epithelium and arrest of spermatogenesis was observed. The testicular volume, diameter and volume as epithelial volume of seminiferous tubule suffered a significant decrease with age, on the contrary an increased tubule length was observed. An increase in fibronectin and laminin volume in old animals and less proliferation rate in these animals was determined. The number of proliferating cells per histologic section of seminiferous type tubule, progressively and significantly decrease in altered sections respect to normal sections. No significant differences respect to age between histological types sections of seminiferous tubule was observed. Ultrastructurally important cytological changes were observed in the Sertoli cell and the process of spermiogenesis. The wall thickening showed an increase significant in normal, hipospermatogenic and spermatogenesis arrest tubules. The number of proliferating cells per histologic section of seminiferous type tubule, progressively and significantly decrease in altered sections respect to normal sections. In conclusion, the aging of the seminiferous tubule hamster suppose a loss of spermatogenic activity which is related to changes in the tubule and its wall. These changes do not occur uniformly throughout the tubule and they associated with a decrease in cell proliferation in altered tubular areas. These areas also have Sertoli cells with a modified ultrastructure.

Tesis por compendio de publicaciones / El hámster sirio (Mesocricetus auratus) es un roedor de reproducción estacional en días largos que sufre una fuerte atrofia testicular cuando es sometido a un fotoperiodo corto. La presente tesis doctoral tiene como objetivos, en primer lugar, estudiar las variaciones histomorfométricas que tienen lugar en el testículo durante la regresión testicular debida a fotoperiodo corto así como determinar la importancia que tienen los fenómenos de proliferación y apoptosis en el proceso de atrofia del epitelio seminífero durante este periodo; en segundo lugar, dilucidar si la histoquímica de lectinas “in situ” permite identificar células germinales y/o somáticas en apoptosis durante esta regresión; finalmente, determinar si existe muerte celular de células de Sertoli durante esta regresión y si se produce por apoptosis. Para ello, se utilizaron 50 hámsteres sirios macho jóvenes sometidos a un fotoperiodo de 14:10h luz-oscuridad. Cinco machos se utilizaron como grupo de control mantenidos con el fotoperiodo de 14:10 h de luz-oscuridad. Los otros animales fueron sometidos a un fotoperiodo corto de 8:16h de luz-oscuridad. A las 4, 6, 8, 10 y 12 semanas se sacrificaron nueve animales tratados más un control, se extrajeron sus testículos y se procesaron para su estudio tanto con microscopía de luz (H&E, histoquímica de lectinas y TUNEL e inmunohistoquímica de PCNA y vimentina) como con microscopía electrónica de transmisión (MET). Mediante microscopía de luz se realizaron diversos estudios semicuantitativos. Con ellos y los del tiempo de sacrificio se establecieron tres grupos de regresión: regresión media (MR), regresión fuerte (SR) y regresión total (TR). Se calcularon también los índices de proliferación y apoptosis de las diferentes células germinales y somáticas del epitelio seminífero. Además, se realizaron estudios cuantitativos utilizando un software de análisis de imagen. Mediante la MET se estudiaron los cambios en las células germinales y de Sertoli durante la apoptosis. Durante la regresión testicular debida a fotoperiodo corto se produjo, a nivel celular en el epitelio seminífero, un descenso inicial de la proliferación en espermatogonias y un aumento de la apoptosis de células germinales. Al final de la regresión, se recuperó la actividad proliferativa de espermatogonias aunque la actividad apoptótica continuó afectando principalmente a los espermatocitos. Histomorfométricamente se produjo tanto un descenso del diámetro y volumen tubular como, un acortamiento del túbulo seminífero con un descenso del volumen intersticial. Varias lectinas mostraron afinidad por residuos de glucoconjugados de células germinales en apoptosis: Gal β1,3-GalNAcα1, α-D-manosa, N-acetilgalactosamina y L-fucosa. Además, la lectina PNA mostró afinidad por células de Sertoli que se encontraban en apoptosis. La H&E y las secciones semifinas identificaron células de Sertoli con una morfología alterada siendo algunas TUNEL+ en los grupos MR y SR. Mediante MET se identificaron cambios característicos de la apoptosis en estas células. Por otra parte, durante la regresión testicular, se observaron, con microscopía de luz, espermátidas elongadas fagocitadas por células de Sertoli mayoritariamente en los grupos MR y SR. En conclusión: a) la regresión testicular en el hámster sirio conlleva, tanto un descenso del diámetro y volumen del túbulo seminífero como el acortamiento del túbulo seminífero y un descenso del volumen intersticial. Además, hay un descenso inicial en la proliferación y un incremento en la apoptosis de las células germinales. Al final de la regresión, las actividades proliferativa y apoptótica de las espermatogónias recuperan los valores anteriores a la regresión; b) el uso de la histoquímica de lectinas podría ser una herramienta muy útil para estudiar la apoptosis en el epitelio seminífero debido a la especificidad mostrada; c) hay evidencias morfológicas de la pérdida de células de Sertoli por apoptosis. También algunas espermátidas elongadas son fagocitadas y eliminadas por estas células de Sertoli. / The Syrian hamster (Mesocricetus auratus) is a long-day seasonal breeding rodent which suffers strong testicular atrophy when subjected to a short photoperiod. The present thesis has as objectives: (i) to study the histomorphometrical changes that take place in the Syrian hamster testes during testicular regression due to a short photoperiod and to determine the importance of the phenomena of proliferation and apoptosis in the process of seminiferous epithelium atrophy during this period; (ii) to determine whether “in situ" lectin histochemistry allows the identification of germ and/or somatic cells in apoptosis during this regression; and iii) to determine whether Sertoli cell death occurs during regression and whether it is produced by apoptosis. For this purpose, 50 young Syrian hamsters subjected to a 14:10 h L:D photoperiod were used. Five males were maintained with this 14:10 h L:D photoperiod and used as Control. The other forty five animals were subjected to a short photoperiod of 8:16 h L:D. At 4, 6, 8, 10 and 12 week, nine treated animals plus one control were sacrificed, and their testes were extracted and processed for study both by light microscopy (H&E, lectin and TUNEL histochemistry techniques and PCNA and vimentin immunohistochemistry) and transmission electron microscopy (TEM). Using light microscopy, several semiquantitative studies were carried out. Based on these data and the week when the animals were sacrificed, three regression groups were established: mild regression (MR), strong regression (SR) and total regression (TR). The proliferation and apoptosis indexes of the different germinal and somatic cells of the seminiferous epithelium were calculated. Furthermore, quantitative studies were made using image analysis software. Using TEM the changes suffered by the different germ and Sertoli cells during apoptosis were studied. During testicular regression due to short photoperiod, an initial decrease in spermatogonia proliferation and an increase in germ cell apoptosis were observed at cellular level in the seminiferous epithelium. At the end of regression, the spermatogonial proliferative activity was recovered although the apoptotic activity continued, mainly affecting spermatocytes. Histomorphometrically, a decrease in tubular diameter and volume, shortening of the seminiferous tubules and a decrease in the interstitial volume were observed. Several lectins showed affinity for glycoconjugate residues (Gal β1,3-GalNAcα1, α-D-mannose, N-acetylgalactosamine and L-fucose) of germ cells in apoptosis. Furthermore, the PNA lectin showed affinity for Sertoli cells undergoing apoptosis. H&E and semi-thin sections identified Sertoli cells with a degenerated morphology that were TUNEL+ in the MR and SR groups. Apoptotic changes in the nucleus and cytoplasm of these cells were identified by TEM. Moreover, during testicular regression and using light microscopy, some elongated spermatids were seen to have been phagocytosed by Sertoli cells, mainly in the MR and SR groups. In conclusion: a) testicular regression in Syrian hamster involves both a decrease in seminiferous tubular diameter and volume, and shortening of the seminiferous tubule accompanied by a decrease in interstitial volume. Furthermore, there is an initial decrease in proliferation and an increase in apoptosis involving all germ cells. At the end of regression, the proliferative and apoptotic activities of the spermatogonia recover the values observed prior to regression; b) lectin histochemistry can be considered a very useful tool for studying apoptosis in the seminiferous epithelium because of the specificity it shows; c) there is morphological evidence that some Sertoli cells are lost through apoptosis. Also, some elongated spermatids are phagocytized and eliminated by Sertoli cells.