por compendio / La anguila europea (Anguilla anguilla) se encuentra en un estado de conservación vulnerable debido a múltiples causas antropogénicas y naturales, entre las que adquieren gran importancia las infecciones parasitarias. Esto motivó el interés por describir la composición y estructura de la comunidad de helmintos de las anguilas del Mar Menor, laguna costera hipersalina en el sureste de la Península Ibérica, con particular atención al nematodo invasor Anguillicoloides crassus. Asimismo, se determinó el impacto de esta comunidad parasitaria en la aptitud ecológica de la población de anguilas de esta laguna. Se realizó la necropsia a 298 anguilas capturadas entre los años 2008 y 2010 en el Mar Menor. Se calcularon índices epidemiológicos (prevalencia, abundancia e intensidad media) para las diferentes especies parasitarias identificadas, así como índices ecológicos (riqueza específica, diversidad y dominancia) aplicados tanto a la comunidad como a la infracomunidad intestinal. Asimismo, se evaluó la aptitud ecológica de las anguilas mediante el empleo de tres aproximaciones, i) la condición corporal, calculada a partir del índice de masa escalada, ii) la asimetría fluctuante observada entre diferentes medidas de estructuras anatómicas pares y iii) el índice somático del bazo. Finalmente, se relacionó dicha aptitud ecológica con la riqueza parasitaria específica y con la intensidad individual de las especies de parásitos más prevalentes. Los resultados de nuestros estudios indican que la helmintofauna de esta población está compuesta por dos trematodos digeneos (Deropristis inflata y Bucephalus anguillae), dos nematodos (Contracaecum sp. y A. crassus) y dos plerocercoides de la familia Proteocephalidae. La infección de A. crassus en anguilas del Mar Menor está estabilizada en valores mínimos, ya que la prevalencia se mantuvo estable en torno al 3%, durante los 3 años en los que se llevaron a cabo estos estudios, lo que se puede atribuir a la ausencia de hospedadores intermediarios. Se observó una mayor prevalencia de parasitación total (93%) en las anguilas del Mar Menor en comparación con las descritas en hábitats semejantes. El 99.99% de los parásitos aislados pertenecían a especies eurihalinas o típicas de hábitats salobres (D. inflata, B. anguillae, Contracaecum sp.), mientras que tan sólo el 0.1% de los mismos eran especies parasitarias frecuentes en aguas continentales (A. crassus y los cestodos de la familia Proteocephalidae). Cabe destacar, que éste último porcentaje es muy inferior al detectado en otros estudios realizados en ecosistemas salinos y salobres, relacionándose con la permanente hipersalinidad del Mar Menor. Como ocurre en otras lagunas costeras, los dos trematodos especialistas (D. inflata y B. anguillae) fueron las especies más prevalentes y abundantes, siendo la primera la especie dominante en la comunidad y en la infracomunidad. El estudio de la estructura de la comunidad de helmintos demostró que el máximo número de especies de parásitos por anguila no excedió de cuatro, y tanto la riqueza específica de la comunidad (seis especies) como la diversidad (índice de Shannon-Wiener = 0.71) fueron bajas, al igual que se describe en otras lagunas hipersalinas. De esta manera, nuestros resultados corroboran que las comunidades de parásitos de anguila europea que habitan lagos costeros mediterráneos son similares en composición y estructura, aunque se pueden diferenciar características específicas de cada ecosistema, basadas en sus distintos grados de salinidad. Finalmente, se evidenció que la relación entre los índices ecológicos empleados para medir la aptitud ecológica y la riqueza parasitaria específica y la intensidad individual de las especies de helmintos fue positiva. Asimismo, se observó que la condición corporal de las anguilas no se ve negativamente afectada a pesar de que la intensidad y la riqueza específica aumenten. No obstante, esta parasitofauna sí provoca una mayor asimetría fluctuante y un ligero incremento del índice somático del bazo. Todo lo anterior parece indicar que los trematodos digeneos y Contracaecum sp. han coevolucionado con la anguila europea y por ello parecen ser tolerados por esta especie, a la que ocasionan escasos daños / European eel population is considered critically endangered in the IUCN red list. Decline in eel recruitment has been associated to a combination of multiple natural and anthropogenic causes, including parasite infections. Therefore, the aim of this study was to determine the helminth community composition and structure of the European eel population from Mar Menor, as well as describe their infra-community, with particular attention to the invasive nematode A. crassus. In addition, the impact of the parasite community on the ecological fitness of this eel population was determined. From 2008 to 2010 a total of 289 eels were captured in Mar Menor, a coastal permanent hypersaline lagoon located on the southeast of the Iberian Peninsula. A detailed parasitological study of eels was performed, and prevalence, abundance and intensity for each parasite species were calculated, as well as parasite richness, diversity and dominance, all determined at community and infra-community levels. Additionally, eel’s ecological fitness was evaluated using (1) body condition calculated from somatic mass index (SMI), (2) fluctuating asymmetry (FA) and (3) the spleen somatic index (SSI). Finally, the helmintofauna effect on these eel’s ecological fitness was estimated. The following parasites species were isolated from Mar Menor eels: Deropristis inflata and Bucephalus anguillae (digeneans), Contracaecum sp. and Anguillicoloides crassus (nematodes) and two Proteocephalidae plerocercoids (cestodes). Prevalence of parasitic infection in this study was 93%, the highest record described in similar habitats. Most of the isolated helminths (99.9%) were euryhaline or brackish waters species, while only the 0.01% of the isolated parasites were common freshwater species (A. crassus and Proteocephalidae larvae). This value was much lower than the ones registered in other brackish and marine ecosistems, probably due to the permanent hipersalinity of Mar Menor. Deropristis inflata and B. anguillae, both of them eel specialist trematodes, were the most prevalent and most abundant species of helminths, as reported in other coastal lagoons. Moreover, D. inflata was the dominant species at both community and the infra-community levels. The study of the helminth community structure revealed that the maximum number of parasitic species per eel was four. In this sense, parasite richness (six species) and diversity (Shannon-Wiener index = 0.71) were low, as previously described for other saline lagoons. Our results provided further evidence of the similar composition and structure of helminth communities between eels from different coastal lagoons; however, salinity-dependent singularities were also found and could reflect the life history of individual eels. On the other hand, a positive relationship between parasite intensity and richness and ecological fitness measures was described. Furthermore, the increase of parasite intensity and richness did not seem to damage Mar Menor eels’ body condition; however, parasitism was associated to an increment of the FA and the slight raise in spleen somatic index. These minimum costs suggest that both trematodes and Contracaecum sp. coevolved with the European eel, and eels inhabiting the Mar Menor tend toward these parasites tolerance. Finally, our studies demonstrated that A. crassus infection is stabilized at minimum values in Mar Menor eel population since a low prevalence (around 3%) has been maintained along last three years, probably due to the absence of intermediate hosts in this habitat.

Los escarabajos de corteza son insectos unidos a las plantas leñosas. Estos escarabajos están encuadrados dentro de los curculiónidos en la subfamilia Scolytinae. Esta subfamilia está compuesta solamente por insectos fitófagos. Su ciclo vita es crítico en los ciclos de materia y energia de los bosques templados. Además estos insectos pueden afectar a los intereses ecómicos en las zonas donde se producen fenómenos de plaga, las cuales pueden acabar afectando a miles de kilómetros cuadrados de bosque. El objetivo general de esta tesis es realizar una aproximación al estudio de los escarabajos de corteza desde diferentes perspectivas. Los aspectos estudiados han permitido identificar si existen patrones de nicho diferenciados en las poblaciones de Tomicus destruens de la cuenca mediterránea, analizar las diferencias en la expresión de microRNAs en T. yunnanensis y T. destruens, caracterizar posibles serina proteasas en T. yunnanensis y analizar las redes ecológicas en las que participan los escarabajos de corteza. En el capítulo uno utilizamos linajes jerárquicos obtenidos mediante análisis cladístico anidado (NCA) de los haplotipos de ADN mitocondrial (ADNmt) del escarabajo de corteza Tomicus destruens, para modelar la distribución por máxima entropía, usando variables ambientales y de hospedador a lo largo de toda la cuenca mediterránea. Los modelos ecológicos desarrollados indican que las linajes de ADN mitocondrial orientales minoritarios de T. destruens difieren en su nicho ecológico potencial de acuerdo a su relación con variables climáticas extremas. El objetivo del segundo capítulo es identificar y caracterizar in silico microRNAs de Tomicus yunnanensis y validar su expresión en T. yunnanensis y T. destruens, mediante el uso de herramientas bioinfomáticas y la utilización de métodos moleculares mediante stem-loop pcrs. Siete miRNAs fueron validados en ambas especies por PCR cuantitativa en tiempo real (RT-qPCR), de los cuales mir-2c-3p y mir-4944-5p mostraron expresión en ambas especies. La expresión de tyu-mir-2c-3p fue mayor en T. destruens que en T. yunnanensis, tanto en machos como en hembras. Sin embargo, se observó la máxima expresión de tyu-mir-4944-5p en las hembras de T. destruens, seguido por los machos de T. yunnanensis y T. destruens. En el tercer cápitulo el objetivo principal de este estudio fue analizar in silico el transcriptoma del escarabajo de corteza T. yunnanensis mediante herramientas bioinformáticas e identificar posibles genes candidatos para la síntesis de serina proteasas. Entre las serina proteasas identificadas, cuatro proteasas semejantes a tripsinas y cinco proteasas semejantes a quimotripsinas fueron anotadas in silico. Estas enzimas fueron clasificadas dentro de la familia SA1 y mostraba todas las características de serina proteasas digestivas. El objetivo del cuarto capítulo es identificar las señales del nicho semiótico que afectan a la comunicación intraespecífica de los escarabajos de corteza y también la comunicación con otros organismos, utilizando el concepto de “eco-field” junto con la Teoría General de Recursos (GTR) con el fin de detectar los procesos de ampliación del nicho semiótico en escarabajos de corteza a lo largo de la matriz del paisaje forestal. Una nueva perspectiva in la ecología del paisaje es la aplicación del concepto Eco-field junto con la Teoría General de Recursos. En este artículo, nosotros describimos la existencia de un eco-field en los escarabajos de corteza como una configuración espacial con una específica portadora de significado para cada interacción de cada organismo-recurso. En esta tesis se han abordado aspectos filogeográficos y genómicos de los escarabajos de corteza para entender mejor sus relaciones evolutivas y su ecología. Además se ha realizado una aproximación biosemiótica para analizar las implicaciones de la comunicación de los escolítidos en las redes ecológicas. / Bark beetles (Coleoptera: Curculionidae, Scolytinae) are insects linked to woody plants. This subfamily is exclusively composed of phytophagous species. In temperate forest ecosystems, their life cycle is critical in the matter and energy cycles of forests, but sometimes produce outbreaks episodes that come to disrupt the economic interests. The importance of these insects is that they are the first to arrive and complete their life cycle in susceptible hosts, facilitating the penetration of other wood-eating organisms like other insects (Hymenoptera and other Coleoptera) and especially fungi. Bark beetles affect mainly host trees with very little defence capability, either because they are weak by environmental conditions, injured or affected by fire. The overall objective of this thesis is to make an approach to the study of bark beetles from different perspectives. The study has allow to identify patterns of differentiated niche in populations of Tomicus destruens in the Mediterranean basin, to analyze differences in the expression of microRNAs in T. yunnanensis and T. destruens, to characterize possible serine proteases in T. yunnanensis and to analyze ecological networks where bark beetles participate. The objective of this chapter one was to identify some environmental factors of the ecological niche that affect the distribution of the mitochondrial lineages (mtLs) and the genetic diversity of T. destruens using nested clade analysis (NCA) together with the maximun entropy (MaxEnt) algorithm (NCA-MaxEnt).The ecological models developed indicate that minority eastern mtDNA lineages of T. destruens differ in their potential ecological niche according to their relation to extreme climatic variables. The main objective of the second chapter is to identify and characterize in silico microRNAs from Tomicus yunnanensis and to validate their expression in T. yunnanensis and T. destruens, using bioinformatics tools and molecular approaches with stem-loop pcrs.Seven miRNAs were validated in both species by quantitative real time PCR (RT-qPCR), of which mir-2c-3p and mir-4944-5p showed expression in both species. The expression of tyu-mir-2c-3p was higher in T. destruens than in T. yunnanensis, in both males and females. However, the highest expression of tyu-mir-4944-5p was observed in females of T. destruens, followed by males of T. yunnanensis and T. destruens. The main goal of the third chapter was to analyse in silico the transcriptome of the bark beetle T. yunnanensis by bioinformatic tools, and identify potential candidate genes for the synthesis of serine proteases. We intended to provide information on specific markers (digestion enzymes) to be used in future studies, aiming to develop new control strategies of this insect pest and its congeneric species.Among the serine proteases identified, four trypsin-like proteases and five chymotrypsin-like proteases were annotated in silico. These enzymes were classified into the SA1 family and showed all the characteristics of digestive serine proteases. The objective of this chapter was to identify the signals of the semiotic niche that affect intraspecific communication of bark beetles and with other organisms using the eco-field concept together with the General Theory of Resources (GTR) in order to detect processes of expansion of the semiotic niche in bark beetles along the entire landscape forestry matrix. A new perspective in landscape ecology is the application of the term Eco-Field together with the General Theory of Resources. In this paper, we describe the putative eco-field in bark beetles as a spatial configuration with a specific meaning-carrier for every organism-resource interaction. This thesis has addressed phylogeographic and genomic aspects of bark beetles to better understand their ecology and evolutionary relationships. In addition a biosemiotic approach was performed to analyse the implications of the communication of bark beetles in ecological networks.

OBJETIVOS: Estudiar el efecto de dos bisfosfonatos sobre el hueso mandibular de ratas Sprague-Dawley. MATERIAL Y MÉTODO: 70 ratas, divididas en 7 grupos: grupo control, 3 grupos que recibieron de forma sistémica pamidronato disódico a dosis de 3 mg/kg/día durante 1, 2 y 3 semanas respectivamente, y 3 grupos que recibieron ácido zoledrónico a dosis de 0’80 mg/kg/semana durante 1, 2 y 3 semanas. Realizamos exodoncias del molar inferior derecho, y se sacrificaron a los 14 días. Se realizó la medición de: área de neoformación ósea, mediante radiología; densidad vascular y ósea, mediante esterología; y microanálisis de elementos (Ca y P), mediante EDX. RESULTADOS Y CONCLUSIONES: La administración tanto de pamidronato disódico como de ácido zoledrónico aumentó la neoformación ósea en el alveolo post-extracción, así como la densidad ósea mandibular. La administración de ácido zoledrónico además causó disminución de la densidad vascular y aumento del Ca y P en el hueso post-extracción en ratas. / OBJECTIVES: Study the effect of two bisphosphonates on mandibular bone in Sprague-Dawley rats. MATERIAL AND METHODS: 70 rats, divided into 7 groups: group control, 3 groups receiving systemic dose of disodium pamidronate (3 mg/kg/day) during 1, 2 and 3 weeks respectively, and 3 groups receiving zoledronic acid at doses of 0'80 mg/kg/week for 1, 2 and 3 weeks. We did the extraction of the right lower molar, and then sacrificed the animals 14 days after the surgery. We measured in our study: new bone formation, through radiology; vascular and bone density, using esteorology; and microanalysis of elements (Ca and P) by EDX. RESULTS AND CONCLUSIONS: The administration of disodium pamidronate and zoledronic acid increased the new bone formation in the post-extraction socket, as well as higher mandibular bone density. The administration of zoledronic acid also caused decrease of vascular density and an increase of Ca and P in rats post-extraction bone.

El objetivo de la presente tesis fue investigar el efecto de la luz de diferente longitud de onda y el fotoperiodo durante el desarrollo temprano, el ritmo de eclosión y la actividad locomotora de larvas de pez cebra. Además, el estudio de un sincronizador adicional (alimento) con diferente periodo permitió evaluar los ritmos de alimentación en dos especies. Finalmente, se describió en el pez cebra adulto los ritmos diarios de genes implicados en la diferenciación sexual. Objetivos Específicos 1 Determinar la ontogenia de la expresión de genes reloj (clock1, bmal1, per1b, per2, dbp) larvas de zebrafish sometidos a ciclos de luz-oscuridad de 12:12 horas, y diferente espectro (LDW, LDB, LDR, DD). 2 Investigar la influencia de varias condiciones de iluminación de diferente longitud de onda, sobre la ontogenia de la actividad locomotora de larvas de pez cebra. 3 Determinar el efecto de los cambios de iluminación de diferente espectro de luz (LDW, LDB, LDR) sobre la actividad locomotora de larvas de zebrafish y la presencia de foto receptores capaces de mediar la respuesta a la luz. 4 Describir la existencia de ritmo de eclosión y la sincronización de embriones a diferentes ciclos de luz (LD, DL1, DL2, LL, DD). 5 Evaluar la existencia de actividad anticipatoria a la comida cuando proporcionada de manera periódica en el pez cebra y el pez hipogeo bajo condiciones oscuridad continua y la capacidad de re-sincronización y la presencia de desplazamientos progresivos de la fase. 6 Describir la variación diaria en la expresión de genes involucrados en la diferenciación sexual en macho y hembra de pez cebra adultos. Metodología 1 Los embriones se mantuvieron en condiciones de LD 12:12 horas LDW (blanco), LDB (azul) and LDR (rojo). Las larvas se muestrearon el 0,3,7 dpf a ZT3,9,15,21,3. Se extrajo el ARN y se medio la expresión de los genes con qPCR. 2 Embriones fueron mantenidos en LDW, LDB, LDR. Las larvas se grabaron con una cámara y los videos analizados con un software de seguimiento. 3 Larvas mantenidas bajo LDW, LDB, LDR fueron grabada hasta el 11 dpf con una cámara. El 3 dpf se muestrearon y se analizó la existencia de expresión de los genes con PCR. 4 Embriones bajo LD,DL1,DL2,LL y DD a 28°C. Fueron visualizado cada dos horas para calcular la tasa de eclosión 5 Pez cebra y pez de cueva en DD fueron alimentados en manera periódica con comederos automáticos. Se utilizaron fotocélulas de rayo infrarrojo para la grabación de la actividad locomotora y el software “el Temps” para la representación de los datos. 6 Machos y hembras en ciclo LD 12:12, y 28 ºC, fueron muestreados durante un día ZT2,6,10,14,18,22. cerebro y gónadas, Se midieron lo genes de interés en cerebro y gónadas con qPCR. Conclusiones. 1 La ontogenia de la expresión de los genes reloj se desarrolla de manera diferente dependiendo de los ciclos de luz y también de la longitud de onda. Los genes del bucle negativo (per1b and per2) parecen desarrollar antes la ritmicidad, durante el desarrollo, respeto a aquellos del bucle positivo (clock and bmal) que no resulta dependiente de la luz. 2 La actividad locomotora está influenciada por los ciclos de luz, no mostrando ninguna ritmicidad bajo oscuridad continua. El diferente espectro de la luz influye en el inicio de la ritmicidad de las larvas a diferentes momentos. 3 El incremento de la actividad locomotora debido al cambio de iluminación de los ciclos de luz y del diferente espectro está relacionado con la presencia de varios fotorreceptores no visuales presentes desde el día 3 dpf. 4 La eclosión del pez cebra tiene un ritmo diario y está sincronizada a los ciclos de luz-oscuridad. La fase de este ritmo depende del tipo de ciclo de iluminación. 5 La actividad de anticipación al alimento es de origen endógeno en las dos especies. El pez cebra tiene una elevada plasticidad en el encarrilamiento de su ritmo a ciclos de comida de periodo diferente de 24 horas y presenta resincronización gradual tras retrasar la hora de alimentación. 6 La expresión de genes involucrados en la diferenciación sexual en adultos varia durante el día y la fase depende del ciclo de luz y del sexo. / Summary of Doctoral Thesis entitled “Impact of lighting conditions and feeding cycles on rhythms of early development, behaviour and sexual differentiation in zebrafish Danio rerio”. The aim of the present thesis was to investigate the effect of light of different wavelength and photoperiod on early development, hatching rhythms and locomotor activity of zebrafish larvae. Morover, the study of an additional zeitgeber (food) permitted to evaluate the feeding rhythms synchronized to different feeding period in adult zebrafish and cavefish blind specie. Finally we aims to describe in adult zebrafish, the daily rhythms of genes involved on sexual differentiation. In the present Doctoral thesis the specific objectives were established: 1 To determine the ontogeny of zebrafish larvae clock genes expression (clock1, bmal1, per1b, per2 dbp) under light-dark cycle of 12:12 hours and different spectrum (LDW, LDB, LDR, DD). 2 To investigate the influence of several lighting conditions of different wavelength on the ontogeny of locomotor activity of zebrafish larvae. 3 To determine the effect of illumination changes of different light spectrum (LDW, LDB, LDR) on locomotor activity of zebrafish larvae and the presence of photo receptors capable to mediate the response to light. 4 To describe the existence of hatching rhythms and embryo synchronization to different light cycle (LD, DL 1, DL2, LL, DD). 5 To evaluate the existence of feeding anticipatory activity when food is periodically provided in zebrafish and cavefish under continuous dark conditions. Evaluate the ability of the fish to re-synchronize when feeding time is delayed. 6 To describe the daily variation in the expression of genes involved in sexual differentiation into male and female zebrafish adults. Methodology 1. Embryos were maintained under LD 12:12 LDW (white), LDB (blue) and LDR (red). Larvae were sampled at 0,3,7 dpf and different time point ZT3,9,15,21. RNA was extracted and the gene expression analyzed with qPCR. 2. Embryos were kept in LDW, LDB, LDR. The larvae were recorded with a video camera and analyzed with specialized tracking software. 3. The larvae kept under LDW, LDB, LDR were recorded until 11 dpf with a camera. At 3 dpf were sampled and the presence of gene expression analyzed by PCR. 4. Embryos under LD, DL, DL, LL and DD at 28 ° C. They were visually analyzed every two hours to calculate hatching rate. 5. Zebrafish and cavefish were fed periodically with automatic feeder. Photocell with infrared beam were used to record the locomotor activity and a software "El Temps" used for data representation. 6 Zebrafish males and females maintained under cycle LD 12:12, and 28 degrees, were sampled during a day at different time point ZT2,6,10,14,18,22. The expression genes were measured in gonads and brain of both sexes with qPCR. Conclusions. 1. The ontogeny of clock genes expression develops differently depending on the light cycles and the wavelength of the light. The genes of the negative loop (per1b and per2) develop rhythmicity before, during development, respect those positive loop (clock and bmal). 2. The locomotor activity is strongly influenced by light cycles, showing no rhythmicity under continuous darkness. The different spectrum of light induces the asynchronous start of locomotor rhythmicity in larvae. 3. The locomotor activity increment as response of illumination change of different spectrum of the light cycles is related to the presence of several non visual photoreceptors already at 3 dpf. 4. Zebrafish hatch rhythmically during the light phase, appearing strongly synchronized to light-dark cycles. The phase of this rhythm at constant temperature depends on the lighting cycle. 5. The feeding anticipatory activity has endogenous origin in both species. The oscillator appears to posses: high plasticity in the synchronization of its rhythm to feeding cycle different of 24-hour and ability to re-synchronize when feeding time is delayed. 6. The expression of genes involved in sexual differentiation in adults varies during the day and the phase depends on the light cycle and sex.

A pesar de su aislamiento geográfico, el ecosistema antártico no está libre de la presencia de agentes infecciosos. Con esta tesis se pretende contribuir al conocimiento de los macroparásitos gastrointestinales de tres especies de pingüinos antárticos (Pygoscelis papua, Pygoscelis adeliae y Pygoscelis antarctica). Para ello se realizaron necropsias de individuos encontrados muertos de forma natural. Se recolectaron un total de 79 individuos en diferentes islas del archipiélago Shetland del Sur e islas situadas más al sur, adyacentes a la península Antártica. La gran mayoría de los pingüinos analizados estuvieron parasitados, mostrando una prevalencia global del 89 %. Sin embargo, el número de especies que se hallaron fue muy escaso, tan solo seis (Tetrabothrius pauliani, Parorchites zederi, Stegophorus macronectes, Pseudoterranova sp, Corynosoma sp.1 y Corynosoma sp.2). De ellos, solo los tres primeros, pueden ser considerados parásitos genuinos de las especies de pingüinos pigoscélidos, mientras que los restantes deberían ser tratados como parásitos accidentales. Esta escasa variedad específica puede explicarse por la alta especialización trófica (estenofagia) de los pingüinos que se alimentan principalmente de krill. La dificultad para la identificación de parásitos adultos fraccionados, en mal estado o de otros estadios de desarrollo de los helmintos como huevos o larvas, nos induce a considerar el empleo de técnicas alternativas para su diagnóstico e identificación como son los métodos moleculares. En este caso, la información molecular referente a las especies de parásitos aquí tratadas, así como de géneros y familias cercanas, es muy escasa, por lo que se procedió a realizar la caracterización molecular de las dos especies parásitas más prevalentes, Stegophorus macronectes y Parorchites zederi, obteniendo la secuencia del ADNr (18S, ITS1, 5.8S, ITS2 y 28S) de S. macronectes y la secuencia del ADNr 18S de P. zederi. Ambas secuencias fueron depositadas en la base de datos GenBank. Considerando que la información disponible de las relaciones filogenéticas de estas especies era nula, a partir de los datos moleculares obtenidos, concretamente con el ADNr 18S de S. macronectes y P. zederi, se realizaron estudios filogenéticos del orden al que pertenece cada especie (Spirurida y Cyclophyllidea, respectivamente) con el objetivo de clasificar molecularmente a estas especies dentro de su grupo. Por último, para obtener nuevos métodos diagnósticos, se desarrollaron sondas moleculares del parásito más prevalente, S. macronectes, a partir de las regiones ITS, y se probaron sobre individuos de la misma especie, especies cercanas, huevos y heces. / In spite of its geographic isolation, the Antarctic ecosystem is not free from the presence of infectious agents. This thesis aims to contribute to the knowledge of gastrointestinal parasites from three species of antarctic penguins (Pygoscelis papua, Pygoscelis adeliae and Pygoscelis antarctica). To do so, necropsies were carried out on individuals who had died due to natural causes. An amount of 79 individuals were collected from different islands of the South Shetland Archipelago and from islands located in a southward direction, adjacent to the Antarctic Peninsula. The vast majority of penguins analyzed were parasitized, showing an overall prevalence of 89%. However, the number of parasites species found was very low, only six (Tetrabothrius pauliani, Parorchites zederi, Stegophorus macronectes, Pseudoterranova sp., Corynosoma sp.1 and Corynosoma sp.2). Only T. pauliani, P. zederi and S. macronectes could be considered genuine parasites from pygoscelid penguins, the remaining should be considered accidental parasites. This small variety in parasite species may be due to the high trophic specialization (stenophagia) of penguins, as they mainly feed on krill. The challenge to identify fractionated adult parasites, in bad condition or in other developmental stages such as eggs or larvae, leads us to carry out alternative techniques for diagnosis and indentification such as molecular methods. In these cases, the molecular information regarding the parasite species analyzed here, as genera and inmediate families is very scarce, so we proceeded to perform the molecular characterization of the two most prevalent parasite species: Stegophorus macronectes and Parorchites zederi, obtaining the sequence of rDNA (18S, ITS1, 5.8S, ITS2 and 28S) from S. macronectes and the 18S rDNA sequence from P. zederi. Both sequences have been deposited in the GenBank database. Due to null molecular phylogenetic information of these species, new studies were performed. Hence, 18S rDNA of Stegophorus mecronectes and Parorchites zederi were used in order to classify them molecularly within their orders. Finally, for obtaining new diagnostic methods, molecular probes of the most prevalent parasite, S. macronectes, were developed from the ITS regions and tested on individuals of the same species, closely-related species, eggs and feces.

Este trabajo de investigación fue realizado con el objetivo de determinar la estructura y dinámica estacional de los artrópodos integran la comunidad sarcosaprófaga en un medio silvestre montañoso de Sierra Espuña, a 1500 m de altitud en El Morrón de Espuña (Murcia). Se llevaron a cabo seis experimentos estacionales, otoño e invierno del 2006, primavera y verano del 2007 y primavera y verano del 2008. Para cada experimento se utilizaron como dispositivos de captura la trampa de Schoenly modificada, cebada con un cerdo (Sus scrofa L.) de 5 kg. aproximadamente, que fue sacrificado mediante premedicación y trampas de caída colocadas en su interior. La entomofauna fue colectada diariamente durante los primeros quince días y después, cada dos o tres días hasta el final del experimento. Cada día de muestreo se registraron las variables ambientales, temperatura y humedad, y los cambios físico-químicos del cebo. El proceso de descomposición fue dividido en cinco etapas: fresco, enfisematoso, descomposición, descomposición tardía y restos. La duración de cada etapa varió en las diferentes estaciones, indicando que la temperatura y la humedad son las variables más importantes que influyen sobre el proceso de la descomposición, alargándolo en las estaciones con temperaturas más bajas y abreviándolo en las de temperaturas más altas. Se colectaron un total de 79442 ejemplares, 76114 individuos adultos y 3328 individuos inmaduros, correspondientes a 22 órdenes, 105 familias y 175 especies identificadas. El orden Diptera fue el más abundante en todas las estaciones y, Calliphoridae la familia más abundante. Por estaciones, las especies dominantes fueron Calliphora vomitoria (L.) en las primaveras, Chrysomya albiceps (Wiedemann, 1819) en los veranos y Calliphora vicina Robineau-Desvoidy, 1830 en el otoño e invierno. Otros dípteros abundantes en primavera fueron, Coproica vagans (Haliday, 1833), Pullimosina heteroneura (Haliday, 1836) (Sphaeroceridae) y Prochyliza nigrimana (Meigen, 1826) (Piophilidae). Abundantes en verano fueron Musca domestica L., Muscina levida (Harris, 1780), Muscina stabulans Fallén, 1817 (Muscidae); Suillia tuberiperda (Rondani, 1867) (Heleomyzidae); Trixoscelis curvata Carles-Tolrá, 1993 (Trixoscelididae); Piophila casei (L.) y las familia Phoridae, Fanniidae, Sarcophagidae. Otro díptero abundante en otoño fue Neoleria ruficeps (Zetterstedt, 1838) (Heleomyzidae). El orden Coleoptera fue el segundo orden más abundante con seis familias muy abundantes, las cuales se colectaron, sobre todo, en las primaveras y los veranos. En primavera los coleópteros más abundantes fueron Thanatophilus ruficornis (Küster, 1851) (Silphidae); Necrobia rufipes (De Geer, 1775) y Necrobia violaceus (L.) (Cleridae) y en verano, Aleochara bipustulata (Linnaeus, 1761), Bisnius sparsus (Lucas, 1846), Creophilus maxillosus (L.) (Staphylinidae); Dermestes undulatus Brahm, 1790, Dermestes frischi Kugelann 1792 (Dermestidae); Saprinus detersus (Illiger, 1807), Saprinus subnitesces Bickhardt, 1909 (Histeridae) y la familia Nitidulidae. E Hymenoptera también fue un orden importante con una familia dominante, Formicidae. Entre las especies capturadas, Crematogaster auberti (Emery, 1869) y Aphaenogaster ibérica (Emery, 1908) fueron muy abundantes durante el verano. Los niveles tróficos asociados a la descomposición de restos orgánicos animales englobó cinco categorías: grupo necrófago, necrófilo, omnívoro, oportunista y accidental. Las especies de las familias Calliphoridae, Sphaeroceridae, Muscidae y Silphidae fueron parte del grupo necrófago durante las primeras fases de la descomposición y algunas especies de Staphylinidae fueron parte del grupo necrófilo, atraídas por las larvas de dípteros. En etapas más avanzadas, en el grupo necrófago se observaron a las familias Piophilidae y Dermestidae, e Histeridae fue parte del grupo necrófilo. Entre los omnívoros, Formicidae fue dominante y Acari fue parte del grupo oportunista junto a Dermaptera y Collembola. Y en el grupo accidental estuvieron Heteroptera, Homoptera, Orthoptera y Thysanoptera. La variabilidad ecológica de la comunidad muestra variaciones estacionales y relacionadas con las fases de la descomposición. Esta variabilidad podría estar relacionada con las variables geográficas y ambientales consideradas. / This research work was carried out with the goal of determining the structure and seasonal dynamics of the arthropoda which are included in the sarcosaprophagous community in the wild mountainous area of Sierra Espuña, exactly at a height of 1,500 metres on El Morrón de Espuña (Murcia). Six seasonal experiments were carried out; two in autumn and winter 2006, two in spring and summer 2007 and two in spring and summer 2008. A modified version of Schoenly trap with pitfalls inside and baited with a pig’s cadaver (Sus scrofa L.) was used for each experiment. The pig, which weighed about 5 kilograms, had been killed intentionally. The entomofauna was collected daily during the first fortnight and after that, every two or three days until the end of the experiment. Environmental variables, temperature, humidity and also physical and chemical changes in the corpse were recorded every sampling day. The decomposition process was divided into five stages; fresh, bloat, active decay, advanced decay and dry/remains. The duration of each stage varied in the different seasons; which indicated that the temperature and humidity are the variables that have the greatest influence on the decomposition process, slowing down the process in the seasons with the lowest temperatures and shortening the process in the warmest seasons. A total of 79,442 specimens were collected, out of which 76,114 were adult specimens and 3,328 were immature specimens. These specimens belonged to 22 orders, 105 families and 175 species. Diptera was the most numerous order in all seasons, and Calliphoridae was the most abundant family. Seasonally speaking, the dominant species were Calliphora vomitoria (L.) during spring, Chrysomya albiceps (Wiedemann, 1819) in summer and Calliphora vicina Robineau-Desvoidy, 1830 in autumn and winter. Other dipterous insects which were numerous in spring were Coproica vagans (Haliday, 1833), Pullimosina heteroneura (Haliday, 1836) (Sphaeroceridae) and Prochyliza nigrimana (Meigen, 1826) (Piophilidae). Musca domestica L., Muscina levida (Harris, 1780), Muscina stabulans Fallén, 1817 (Muscidae); Suillia tuberiperda (Rondani, 1867) (Heleomyzidae); Trixoscelis curvata Carles-Tolrá, 1993 (Trixoscelididae); Piophila casei (L.) and the Phoridae, Fanniidae and Sarcophagidae families were also numerous in the summer. Another dipterous species which was substantially important was Neoleria ruficeps (Zetterstedt, 1838) (Heleomyzidae). The second most abundant order was Coleoptera, out of which six families were collected abundantly, mainly in spring and summer. Thanatophilus ruficornis (Küster, 1851) (Silphidae); Necrobia rufipes (De Geer, 1775) and Necrobia violaceus (L.) (Cleridae) were the most plentiful species from the Coleoptera order in spring. Aleochara bipustulata (Linnaeus, 1761), Bisnius sparsus (Lucas, 1846), Creophilus maxillosus (L.) (Staphylinidae); Dermestes undulatus Brahm, 1790, Dermestes frischi Kugelann 1792 (Dermestidae); Saprinus detersus (Illiger, 1807), Saprinus subnitesces Bickhardt, 1909 (Histeridae) and also the Nitidulidae family abounded in summer. Hymenoptera was also an important order in which a family, Formicidae, exceeded others. Among the species captured, plenty of Crematogaster auberti (Emery, 1869) and Aphaenogaster ibérica (Emery, 1908) were collected during summer. The trophic levels associated with decomposition of organic remains included 5 categories; necrophagous, necrophilous, omnivorous, opportunist and, lastly, accidental species. The specimens belonging to the Calliphoridae, Sphaeroceridae, Muscidae and Silphidae families were part of the necrophagous group during the first decomposition stages, and some Staphylinidae species, which were attracted by some dipterous larvae, were part of the necrophilous group. In more advanced stages, the Piophilidae y Dermestidae families were observed to be part of the necrophagous group and the Histeridae family was present as the necrophilous group. The omnivorous species were characterized by mostly Formicidae. Acari, together with Dermaptera and Collembola, were classified in the opportunist species. Last, but not least, Heteroptera, Homoptera, Orthoptera and Thysanoptera families completed the 5 categories being part of the accidental species. The ecological variability in the community shows seasonal variables and also variables related to the decomposition stages. This variability might be related to the geographical and environmental variables that have been taken into account.

El jabalí (Sus scrofa) es la pieza de caza mayor más importante de España, y además, supone una considerable fuente de recursos en algunas zonas rurales. Sin embargo, también causa pérdidas en cultivos y zonas periféricas de algunas ciudades. En el suroeste de España, la población de jabalíes está ampliamente distribuida y suele entrar en contacto con ganado doméstico, concretamente con cerdos ibéricos. Por todo ello, su amplia distribución y su papel en la sanidad animal y salud pública justifican la selección del jabalí como especie objetivo de este proyecto. Los objetivos de este estudio son describir la distribución de patógenos del jabalí (parásitos, bacterias y virus) en la Sierra de Aracena (Huelva), y evaluar la influencia de diferentes factores ambientales en su presencia. Fueron analizados un total de 199 jabalíes e 43 monterías celebradas durante las temporadas de caza 2010-2011 y 2011-2012. Durante la necropsia se recogieron muestras de órganos, sangre, heces y músculo. Los parásitos hallados fueron estudiados mediante identificación morfométrica, las muestras de músculo mediante digestión ácido-artificial y por último, las heces se procesaron mediante una técnica de sedimentación. Se utilizaron técnicas ELISA para analizar la presencia de virus y bacterias. Finalmente, todos los datos se analizaron estadísticamente (R software) y mediante software de SIG (QGIS) para estudiar la influencia de los factores de riesgo y las coinfecciones. De los 199 jabalíes analizados, 196 estaban parasitados por un total de 10 especies diferentes: Macracanthorynchus hirudineaceus (prevalencia-p-67.34%), Metastrongylus elongatus (p–71,36%), Metastrongylus pudendotectus (p-59,80%), Ascarops strongylina (p–37,19%), Physocephalus sexalatus (p–5,03%), Ascaris suum (p-18,59%), Globocephalus urosubulatus (p-64,32), Trichuris suis (p-31,16%), Oesohpagostomum dentatum (p-14,57%) y Cysticercus tenuicollis (p-12,56%). Sin embargo, es necesario remarcar la ausencia de trematodos y de Trichinella spp. Por otro lado, todos los virus y bacterias seleccionados fueron detectados: Mycobacterium bovis (seroprevalencia-sp-46,73%), Chlamydiaceae (sp-45,23%), Brucella suis (sp-27,17%), virus de la enfermedad de Aujeszky (sp-27,72%), PRRS (sp-6,52%) y PCV2 (sp-51,09%). Sólo M. hirudinaceus mostró una prevalencia significativamente mayor en las hembras, en las cuales también se detectaron títulos de anticuerpos frente a PRRS más elevados. En animales mayores se observaron prevalencias más altas de G. Urosobulatus, O. dentatum, C. tenuicollis, B. suis y PCV2, mientras que T. suis fue más prevalerte en animales jóvenes. El análisis de SIG determinó que la densidad de granjas suponía un factor de riesgo para M. hirudinaceus y G. Urosubulatus¸ sin embargo se obtuvo el resultado contrario para A. suum, cuya prevalencia incrementaba en las zonas con baja densidad de explotaciones. En este aspecto, los resultados de estos análisis revelan que los factores de riesgo más importantes para macro y micro-parásitos son la altitud media y la distancia media a explotaciones agro-ganaderas. Sin embargo, otras variables como la presencia de pinar o la distancia media a bosque de ribera también fueron significativos para algunos. Se ha observado una relación significativa en la coinfección entre algunos patógenos, siendo los más relevantes se han obtenido para la coinfección entre las dos especies de Metrastrongylus y la coinfección Chlamydiaceae - M. bovis. La población de jabalí en la Sierra de Aracena muestra un elevado contacto con determinados agentes infecciosos comunes también a cerdos domésticos. Su presencia en esta zona debería considerarse un factor de riesgo que afecta al mantenimiento y dispersión de estos patógenos entre los animales domésticos. Finalmente, nuestros resultados sugieren que esta interacción entre suidos domésticos y silvestres podría suponer un importante factor de riesgo para la sanidad animal y la salud pública. Por ello, sería recomendable continuar con estudios más profundos que ayuden a comprender mejor la ecopatología de las enfermedades contagiosas. / Wild boar (Sus scrofa) is the most important game species in Spain; moreover it is an important economic resource for some rural areas. Nevertheless, it also causes substantial economic losses in cultivated areas and peripheral zones of some cities. In the southwest of Spain, the population of wild boars is widely distributed and come into contact with extensively farmed livestock, particulary Iberian pig. In summary, its wide distribution in this area and its important role in public and animal health justify the selection of the wild boar as the target species for this project. The targets of this study were to describe the distribution of wild boar pathogens (parasites, bacteria and viruses) in Sierra de Aracena (Huelva, SW Spain), and evaluate the significance of different risk factors in their presence. A total 199 wild boar from 43 hunts hold during 2010-2011 and 2011-2012 hunting seasons were analysed. During necropsy, viscera, blood, faeces and muscle samples were collected. Isolated parasites were morphometrically identified, muscle samples was analysed using an acid-artificial digestion, and faeces were processed with a sedimentation technique. Moreover, serological techniques (ELISA) were used to diagnose viral and bacterial infections. Finally, all data were analysed through statistical (R software) and SIG methods (QGIS) to study the role of risk factors and coinfections. Of the 199 wild boars analysed, 196 harboured parasites. A total of 10 different parasite species were identified: Macracanthorynchus hirudineaceus (prevalence-p-67.34%), Metastrongylus elongatus (p–71,36%), Metastrongylus pudendotectus (p-59,80%), Ascarops strongylina (p–37,19%), Physocephalus sexalatus (p–5,03%), Ascaris suum (p-18,59%), Globocephalus urosubulatus (p-64,32), Trichuris suis (p-31,16%), Oesohpagostomum dentatum (p-14,57%) and Cysticercus tenuicollis (p-12,56%). However, the absence of trematodes and Trichinella spp should be emphasized. On the other hand, all the studied bacterial and viral agents were detected in serum samples: Mycobacterium bovis (seroprevalence-sp-46,73%), Chlamydiaceae (sp-45,23%), Brucella suis (sp-27,17%), Aujeszky disease virus (sp-27,72%), PRRS (sp-6,52%) and PCV2 (sp-51,09%). Only M. hirudinaceus showed a significant positive association with host sex (female), and antibodies titles for PRRS were also higher in sows. Additionally, a higher prevalence of G. Urosobulatus, O. dentatum, C. tenuicollis, B. suis and PCV2 was significally associated to older animals, while only T. suis was more prevalent woung ones. GIS analyses showed that farm density was a risk factor for M. hirudinaceus and G. Urosubulatus infections; however, it was not associated to A. suum, wich prevalence was higher in lower farm density areas. In this sense, our results showed that the most important environmental risk factors for both macro and micro-parasite presence were the mean altitude and the mean distance to farm areas. Nevertheless, other variables like the presence of pinewood or the mean distance to riparian forest were significant for some of the studied pathogens. A statistically significant association between some coinfecting pathogen pairs was observed. Thus, the most relevant results were obtained for two Metastrongylus species, and the coinfection between Chlamydiaceae - M. bovis coinfections. The wild boar population of the Sierra de Aracena shows a high level of contact with some infectious agents that are common in domestic pigs. Their presence in this area therefore should be considered as a risk factor that can affect the maintenance and spread of these pathogens among domesticated animals. In summary, our results suggest that this interaction between domestic and wild suids could be in this way an important risk factor for animal and public health. For this reason, deeper environmental studies should be desirable for a better understanding of contagious diseases ecopathology.

arnaldo@um.es / La oreja de mar Haliotis tuberculata, cuya cría en cautividad se encuentra muy poco desarrollada en Europa, resulta ser una especie potencial para la diversificación de la acuicultura de moluscos. Sin embargo, existen dos principales factores que limitan su producción. En primer lugar, el abastecimiento en alimento de calidad constituye un gasto significativo para las empresas. Además, en los últimos años, tanto las poblaciones naturales como las de cría han soportado altas tasas de mortalidad debidas a la presencia del patógeno Vibrio harveyi. El primer objetivo de esta tesis es la valorización de la macroalga G. turuturu como alimento para la oreja de mar. Por su carácter proliferativo, el alga roja Grateloupia turuturu, presente en la costa atlántica, constituye una importante fuente de biomasa disponible. Efectivamente, la composición bioquímica de Grateloupia turuturu resulta interesante para el crecimiento de la oreja de mar, la cual muestra una clara preferencia por las algas rojas. En el presente estudio, las macroalgas rojas Grateloupia turuturu y Palmaria palmata han sido probadas durante cinco meses como alimento para la oreja de mar europea Haliotis tuberculata tuberculata. Lo individuos fueron alimentados ad libitum mediante tres dietas diferentes: 1) Palmaria palmata, 2) Grateloupia turuturu y 3) dieta mixta de Palmaria palmata y Grateloupia turuturu (1:1). El interés nutricional fue evaluado mensualmente siguiendo para cada lote la mortalidad y el crecimiento de los individuos mediante medidas biométricas (longitud, anchura, peso). No se observó mortalidad durante el tiempo del experimento en cualquiera de los tratamientos. La composición bioquímica (proteínas, glúcidos, lípidos y cenizas) del producto final (el molusco tras finalizar el ensayo), así como el de las algas utilizadas como alimento, ha sido analizada. El consumo de algas por parte de los diferentes lotes de orejas de mar se estimó cada vez que distribuía nuevo alimento. El crecimiento en longitud y peso fue mayor para los abulones alimentados con P. palmata y la dieta mixta. Los abulones exhibieron una preferencia por P. palmata y mostraron la mayor ganancia de peso con este macroalga (107,8 ± 7,2%). Se ha comprobado que G. turuturu no puede ser utilizada en fresco como alimento monoespecífico para H. tuberculata tuberculata. Este hecho está relacionado con la rápida degradación de los tallos del alga en las condiciones de un criadero. No obstante, esta alga podría constituir un complemento alimenticio interesante para el gasterópodo. De hecho, cuando G. turuturu es suministrada en dieta mixta, los moluscos presentan un contenido mayor en lípidos que cuando son alimentados en dieta monoespecífica con Palmaria palmata. Otro objetivo de esta tesis consistió en estudiar los efectos de los extractos solubles, polares y apolares de la macroalga nativa Palmaria palmata y de la macroalga proliferante Grateloupia turuturu. Este estudio tenía como objeto hallar metabolitos potencialmente bioactivos sobre el crecimiento de V. harveyi. Estos análisis se llevaron a cabo mediante técnicas con microplacas (Bioscreen) y, en paralelo, análisis con RMN fueron efectuados con el fin de identificar eventuales diferencias en la composición de los extractos. Nuestros resultados preliminares, con un porcentaje de inhibición de 16%, son prometedores y muestran que G. turuturu posee un potencial antibacteriano que podría ser utilizado en aplicaciones futuras en acuicultura. Así, G. turuturu podría aplicarse a criaderos de oreja de mar en forma de extracto en el tratamiento del agua, en forma de alimento artificial o en co-cultivo formando parte de un sistema integrado junto con Haliotis tuberculata, gracias a sus propiedades antibacterianas contra Vibrio harveyi. Sería interesante también profundizar en la caracterización del/los metabolito/s responsable/s de esta actividad antibacteriana y una vez identificado/s, purificado/s con el objeto de caracterizar su naturaleza química y poder eventualmente mejorar su nivel de actividad antibiótica. / Valorization of the proliferating macroalgae Grateloupia turuturu in the farming of the European abalone Haliotis tuberculata Abalone Haliotis tuberculata, which farm production is not well developed in Europe, seems a potential candidate for the diversification of shellfish aquaculture. However, its production faces two main limitations. First, the supply of livestocks in quality food are a major expense for enterprises. Second, in recent years, natural populations as well as livestocks have suffered high mortalities related to the pathogenic bacterium Vibrio harveyi. The first objective of this thesis is the valuation of the macroalgae G. turuturu as feed for abalone. Because of its proliferative nature, red seaweed Grateloupia turuturu, present on the Atlantic coast, constitute represent an available biomass that could be valorized in abalone aquaculture. Indeed, Grateloupia turuturu presents a biochemical composition that could be of interest for abalone’s growth. This species shows a clear preference for red seaweeds. The suitability of two red algae species, Grateloupia turuturu and Palmaria palmata, as feed for the culture of the European abalone H. tuberculata, was evaluated over a 5-month period. Three experimental diets were tested: 1) Palmaria palmata, 2) Grateloupia turuturu and 3) a mixed diet of Palmaria palmata and Grateloupia turuturu (1:1). Biochemical composition (proteins, carbohydrates, lipids, ashes) of algae was measured. No mortality was observed during the time of the experiment in any of the treatments. Biochemical composition (proteins, carbohydrates, lipids and ash) from abalone (at the end of the experiment) and the algae used for food has been analyzed. Seaweed consumption by of abalone was estimated whenever new food distributed. Growth in length and weight was highest for abalones fed with P. palmata and the mixed diet. Abalones exhibited a preference for P. palmata and showed the highest weight gain with this macroalgae (107.8 ± 7.2%). G. turuturu was fast in desintegrating in abalone rearing conditions and was not suitable for good growth of H. tuberculata in a monospecific diet. However, this could be an interesting alga food supplement for the gastropod. In fact, when it is provided in G. turuturu mixed diet, molluscs have a higher lipid content that when fed diet in Palmaria palmata monospecific. Another goal of this thesis was to study the effects of soluble, polar and apolar Palmaria palmata native seaweed and Grateloupia turuturu proliferative seaweed extracts. The aim of this study was finding potentially bioactive metabolites on growth of V. harveyi. These analyzes were carried out by microplates techniques (Bioscreen) and, in parallel, NMR analyzes were performed to identify any differences in the composition of the extracts. Our preliminary results, with and percentage of inhibition of 16%, are promising and they showed that G. turuturu has an antibacterial potential that could be used in future applications in aquaculture. Thus, G. turuturu could be applied to breeding of abalone extract as water treatment, in the form of artificial food or co-cultivation of an integrated system with Haliotis tuberculata, thanks to its antibacterial properties against Vibrio harveyi. It would be interesting also to deepen the characterization of the metabolite manager this antibacterial activity and once identified, purified in order to characterize their chemical nature and to eventually improve their level of antibiotic activity.

Los objetivos de la presente tesis doctoral son describir la composición taxonómica de las larvas de peces que habitan las aguas del Mar Menor, conocer la distribución espacial y la dinámica temporal del ictioplancton en la laguna, analizar los factores ambientales que determinan dicha distribución y dinámica y, finalmente, valorar el papel de la colonización larvaria a través de los canales de comunicación con el mar abierto y las corrientes en la estructura del poblamiento ictiológico. METODOLOGÍA: El trabajo se ha llevado a cabo en el Mar Menor, laguna costera ubicada en el SE de la península ibérica, en el extremo oriental de la Región de Murcia. Se establecieron en la misma 20 localidades de muestreo donde se recogió material en 1997 y desde 2006 a 2012. Adicionalmente, durante 2009 y 2012 se sumaron 8 estaciones para estudiar la influencia del Mediterráneo adyacente, ubicándolas en la bocana interior de los tres canales de comunicación con el mar abierto y en el propio Mediterráneo. El diseño experimental de muestreo permite el análisis de las escalas espacio-temporales de variabilidad del poblamiento y de las condiciones ambientales. El material trabajado en la presente memoria proviene de un total de 3.342 muestras tomadas con arrastres sub-superficiales (0,5–2 m de profundidad), diurnos, circulares y con una duración de 7 minutos, utilizando una red de plancton estándar, de forma cónica, equipada con un flujómetro. Todos los huevos y larvas de peces fueron separados y contados, y éstas últimas fueron identificadas hasta especie. El análisis de las escalas de variabilidad se ha realizado mediante Permanova y para el estudio de la estructura del poblamiento y las variables ambientales que lo explican se han utilizado regresiones múltiples y análisis multivariantes de ordenación. RESULTADOS: Se colectaron un total de 55.262 huevos y se han examinado 185.135 especímenes de larvas y postlarvas de peces, pertenecientes a 24 familias, 48 géneros y 69 especies. De éstas, 15 especies son exclusivas de la laguna. En el Mediterráneo la riqueza de especies llega a 100, existiendo 46 que no penetran en la laguna como larvas. Las familias más abundantes han sido Gobiidae (64,49%), Engraulidae (16,76%), Blenniidae (16,54%) y Atherinidae (1,11%). A su vez, las especies dominantes fueron Gobius niger (34,65%), Engraulis encrasicolus (16,76%), Gobius paganellus (15,26%), Pomatoschistus marmoratus (8,72%), Parablennius pilicornis (7,83%), Salaria pavo (6,55%), Aphia minuta (2,96%), Gobius cruentatus (1,63%), Parablennius gattorugine (1,48%) y Gobius cobitis (1,08%). De las especies estudiadas, 23 (23,7%) son residentes en el Mar Menor o típicamente lagunares, 27 (27,8%) son migradoras o pobladores cíclicos regulares, 12 (12,4%) son pobladores ocasionales o irregulares y 28 (28,9%) son visitantes extraviados o esporádicos. La densidad media anual total de larvas de peces en la laguna fue de 613,27 (± 37,02) individuos por 1000 m3, muy superior a la encontrada en el Mediterráneo adyacente, de 126,05 (± 13,51) individuos por 1000 m3. CONCLUSIONES: El poblamiento ictioplanctónico lagunar muestra gran variabilidad espacio-temporal. Un 41,3% del poblamiento lagunar varía de un año a otro. No obstante, su dinámica presenta un ciclo estacional claro, con dos picos de abundancia, en primavera y en otoño. La mayoría de las especies de interés pesquero de las familias Mugilidae, Sparidae o Clupeidae en el ictioplancton lagunar solo aparecen testimonialmente, con abundancias relativas medias inferiores al 0,03%, indicando que su penetración en la laguna ocurre principalmente en fases juveniles La distribución espacial está relacionada principalmente con los patrones de circulación de la laguna y con la colonización a través de los canales de comunicación con el mar abierto a la que se superponen las condiciones tróficas asociadas a la entrada de nutrientes por la rambla del Albujón. Existe un importante componente aleatorio en la dinámica del poblamiento que probablemente forma parte de los mecanismos homeostáticos del ecosistema lagunar. La elevada riqueza y diversidad de especies acumuladas y la gran proporción de especies ocasionales y extraviadas sugieren un papel muy importante de los mecanismos de lotería competitiva. / The objectives of this thesis are to describe the taxonomic composition of larval fish that inhabit the waters of the Mar Menor, knowing the spatial distribution and temporal dynamics of ichthyoplankton in the lagoon, analyze the environmental factors that determine this distribution and dynamics and finally assess the role of larval colonization through the channels of communication with the open sea and the currents in the structure of ichthyological settlement. METHODOLOGY: The study has been conducted in the Mar Menor coastal lagoon located in the SE of the Iberian Peninsula at the eastern end of the Region of Murcia. Material was collected in 20 sampling sites in 1997 and from 2006 to 2012. Additionally, during 2009 and 2012, 8 stations, located in the inner mouth of the three channels of communication with the open sea and in the Mediterranean, were added to study the influence of the adjacent open sea. The experimental sampling design allows the analysis of the spatio-temporal scales of variability of the assemblage and environmental conditions. A total of 3,342 samples were analyzed. They were collected using diurnal, circular subsurface tows (0.5-2 m deep), with a duration of 7 minutes, using a standard plankton net, equipped with a flowmeter. All eggs and fish larvae were removed and counted, and the latter were identified to species. The analysis of the scales of variability was performed using PERMANOVA. The study of the structure of the assemblage and the environmental variables that explain it has been made by using multiple regression and multivariate ordination analysis. RESULTS: A total of 55,262 eggs were collected and 185 135 specimens of fish larvae and post-larvae, belonging to 24 families, 48 genera and 69 species, were examined. Of these, 15 species are unique to the lagoon. In the Mediterranean species richness reaches 100, 46 of them do not penetrate the lagoon as larvae. The most abundant families were Gobiidae (64.49%), Engraulidae (16.76%), Blenniidae (16.54%) and Atherinidae (1.11%). In turn, the dominant species were Gobius niger (34,65%), Engraulis encrasicolus (16,76%), Gobius paganellus (15,26%), Pomatoschistus marmoratus (8,72%), Parablennius pilicornis (7,83%), Salaria pavo (6,55%), Aphia minuta (2,96%), Gobius cruentatus (1,63%), Parablennius gattorugine (1,48%) and Gobius cobitis (1,08%). 23 (23.7%) of the studied species are resident in the Mar Menor lagoon, 27 (27.8%) are migratory or regular cyclical residents, 12 (12.4%) are occasional or irregular residents and 28 (28.9%) are marine stragglers or casual visitors. The total annual average density of fish larvae in the lagoon was 613.27 (± 37.02) individuals per 1000 m3, much higher than that found in the adjacent Mediterranean that reach 126.05 (± 13.51) individuals/1000 m3. CONCLUSIONS: The lagoon ichthyoplankton shows large spatial and temporal variability. 41.3% of the lagoon assemblage varies from year to year. However, their dynamics presents a clear seasonal cycle, with two abundance peaks in spring and autumn. Most species of commercial interest of the families Mugilidae, Sparidae or Clupeidae are present in the lagoon ichthyoplankton just in testimony with relative abundances lower to 0.03%, indicating that penetration into the lagoon occurs mainly as juveniles. The spatial distribution is mainly related to the circulation patterns of the lagoon and to the colonization through the channels of communication with the open sea. Overlapping to this act the trophic conditions associated with nutrient inputs from the Albujón watercourse. There is a substantial random component in the assemblage dynamics which is probably part of the homeostatic mechanisms of the lagoon ecosystem. The high richness and diversity of species and accumulated large proportion of occasional and straggler species suggest an important role of the mechanisms of competitive lottery.

Objetivo general: Caracterizar genoarquitectonicamente de modo comparado la placa alar mesencefálica del ratón y el pollo durante el desarrollo y la vida postnatal temprana. Materiales y métodos: Se utilizaron ratones de la cepa Swiss Albino. Se analizaron embriones de E10.5, E11.5, E12.5, E14.5, E16.5 y E18.5, así como algunos estadios postnatales y el adulto (P0, P10-14, P25 y P56). En el estudio de aves se utilizaron embriones de pollo (HH30-HH45) y algunos estadios postnatales (P1, P2, P6). Para llevar a cabo el análisis pretendido se realizaron hibridaciones in situ con múltiples sondas de RNAm en embriones in toto, o en secciones de vibratomo y de criostato. El material procesado fue escaneado utilizando el software Image Scope. Finalmente los datos fueron seleccionados para su interpretación y análisis. Resultados: Como resultado del análisis genoartiquectónico se caracterizó molecularmente los límites rostral y caudal del mesencéfalo de ratón y pollo durante el desarrollo y algunos estadios postnatales. Además de los ya conocidos marcadores Pax6, Tcf7l2 y Fgf8, otros factores de transcripción tales como Lim1, Lhx2, Foxp1, Tcfap2B, Dbx1, Esrrb y FoxB1 resultaron útiles para identificar estos límites. Además estos datos genoarquitectónicos han contribuido a clarificar los límites entre los dominios alares anteroposteriores y los subdominios dorsoventrales de m1 y m2 (mesomeros 1 and 2). Se ha llevado a cabo un detallado estudio genoarquitectónico comparado de los colículos superior e inferior (torus semicircular) del pollo y el ratón, lo cual ha permitido confirmar y en su caso postular homologías de sus componentes estructurales (capas, núcleos, poblaciones neuronales) entre ambas especies. Otras regiones comprendidas en este estudio son el gris tectal y el área preístmica. Conclusiones: Los datos obtenidos en este estudio permiten disponer de marcadores adicionales para localizar con precisión los límites del mesencéfalo, así como también identificar las regiones y subregiones alares que componen los mesómeros 1 y 2. Los abundantes datos moleculares obtenidos contribuirán a futuros estudios de los dominios alares mesencefálicos, cuya finalidad sea comprender los fenómenos causales de su proceso de laminación o especificación celular diferencial. Finalmente, se aporta la definición de un nuevo territorio histogenético radial intercalado entre los colículos superior e inferior, el área intercollicular. Por otra parte el detallado análisis genoarquitectónico comparado del colículo inferior/torus semicircular entre pollo y ratón ha permitido postular posibles homologías entre ambas especies. / Characterize comparatively the genoarchitectonic structure of the mesencephalic alar plate of the mouse and chick during development and early postnatal life. Methods: The study used mice wild Albino Swiss strain. We analyzed embryos at E10.5, E11.5, E12.5, E14.5, E16.5 and E18.5; as well as selected postnatal stages and the adult (P0, P10-14, P25 y P56). To carry out the intended analysis multiple in situ hybridizations with mARN probes were performed on whole embryos, in vibratome sections and cryostat sections. In selected cases an immunohistochemical reaction served as counterstaining of the hybridization. The processed material was scanned using Image Scope software. Finally, specific data were selected for further interpretation and analysis. Results: Using our genoarchitectonic approach we characterized molecularly the rostral and caudal midbrain limits during all stages of development and some postnatal stages. Besides the known relevant markers Pax6, TCF7L2 and Fgf8, other patterns of transcription factors such as Lim1, Lhx2, Foxp1, Tcfap2b, Dbx1, FoxB1 and Esrrb were useful to identify these limits. Furthermore, these genoarchitectonic data helped to clarify the boundaries between the various anteroposterior alar domains and their respective dorsoventral subdomains across m1 and m2 (mesomeres 1 and 2). Finally, the analysis allowed obtaining data on the selective expression of genes in the different strata that make up the layers of the superior and inferior colliculi. Other studied regions were the tectal gray, the intercollicular area and the preisthmic area. Conclusions: The data obtained in this study identified additional markers that accurately locate the boundaries of the midbrain, and served to identify genoarchitectonically distinct regions that make up the alar plate of mesomere 1. The novel intercollicular area was identified as a full radial histogenetic zone. Finally, abundant molecular data were generated that will contribute to future causal developmental studies of the superior and inferior colliculi, as regards the process of layering or cell specification. Moreover, detailed postulates of homology were proposed between the structural components of the mammalian inferior colliculus and the avian torus semicircularis.