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Investigating the tomato tolerance to cadmium (Cd) via high throughput proteomics / Investigando a tolerância de tomate ao (Cd) via proteômica de alto rendimento

Nogueira, Marina de Lima 30 April 2019 (has links)
The problem of cadmium (Cd) toxicity aggravates every year. However, the amount of plant species presenting some degree of tolerance to this metal is low. Therefore, it is of utmost importance to understand the Cd tolerance mechanisms. Two tomato cultivars exhibiting distinct levels of tolerance to Cd were investigated by exposing them to 35 μm de CdCl2 for eight days. The samples (roots, stems, and leaves) were collected at 0, 2, 4, 6 and 8 days. The root length and surface area were obtained using a WinRhizo PRO 2009c image analyzer. The ICP OES method was used for the quantification of metals in the different tissues. The translocation index (TrI), metal uptake and Cd distribution nutrient absorbed (NA), and nutrient efficiency (NUE) were calculated. The plant material used for stress indicators and proteomics analysis were collected in liquid nitrogen. Lipid peroxidation and H2O2 contents were obtained by spectrometry. For the proteomics data the gel-free method was used. The stress indicators showed the variation in both cultivars, evidencing the stress caused by the Cd. Chlorosis and necrotic spots were observed in plants exposed to Cd less significant way in the first days of exposure and more evident in the less tolerant cultivar (TTO) in the last days. The growth reduction can be observed in both cultivars, more evident in TTO. Regarding the Cd distribution, the two cultivars showed similar behavior, with the highest percentage of Cd in the roots. The Cd absorption could interfere with both cultivars in the accumulation absorption and efficiency in the use of most nutrients assessed. In general, the Cd interference was more evident at TTO than at YOSH. Highest percentages of TrI were also observed in TTO cultivar. Identification and evaluation of the differentially accumulated protein (DAP) in the two cultivars roots it is possible to observe that in the presence of Cd the cultivar TTO generates a more significant alteration in the amplitude of the accumulation and the number of proteins. These results suggest that the cultivar, which presents a higher degree of tolerance, has some form to make the Cd unavailable or a mechanism that makes the Cd transportation to the leaves more difficult. / O problema da toxicidade do cádmio (Cd) agrava-se a cada ano. No entanto, a quantidade de espécies de plantas que apresentam algum grau de tolerância a este metal é baixa. Portanto, é de suma importância entender os mecanismos de tolerância do Cd. Com esse intuito duas cultivares de tomate (TTO e YOSH) exibindo níveis distintos de tolerância ao Cd foram investigadas, expondo-as a 35 μm de CdCl2 por oito dias. As amostras (raízes, caules e folhas) foram coletadas aos 0, 2, 4, 6 e 8 dias. O comprimento da raiz e área de superfície foram obtidos usando um analisador de imagem WinRhizo PRO 2009c. O método ICP OES foi utilizado para a quantificação de metais nos diferentes tecidos. O índice de translocação (Trl), a absorção de metal e a distribuição de Cd dos nutrientes absorvidos (NA) e eficiência de nutrientes (NUE) foram calculados. O material vegetal usado para indicadores de estresse e análise proteômica foi coletado em nitrogênio líquido. A peroxidação lipídica e o teor de H2O2 foram obtidos por espectrometria. Para os dados proteômicos, foi utilizado o método livre de gel. Os indicadores de estresse mostraram a variação nas duas cultivares, evidenciando o estresse causado pelo Cd. A clorose e manchas necróticas foram observadas em plantas expostas ao Cd de maneira menos significativa nos primeiros dias de exposição e mais evidentes no cultivar menos tolerante (TTO) nos últimos dias. A redução do crescimento pode ser observada em ambas as cultivares, mais evidente no TTO. Quanto à distribuição de Cd, as duas cultivares apresentaram comportamento semelhante, com o maior percentual de Cd nas raízes. A absorção de Cd pode interferir nas duas cultivares na absorção, acúmulo e eficiência no uso da maioria dos nutrientes avaliados. Em geral, a interferência do Cd foi mais evidente no TTO do que no YOSH. As maiores porcentagens de TrI também foram observadas na cultivar TTO. Identificação e avaliação da proteína diferencialmente acumulada (DAP) nas raízes das duas cultivares é possível observar que na presença de Cd a cultivar TTO gera uma alteração mais significativa na amplitude do acúmulo e no número de proteínas. Estes resultados sugerem que a cultivar, que apresenta um maior grau de tolerância, tem alguma forma de tornar o Cd indisponível ou um mecanismo que dificulte o transporte de Cd para as folhas.
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Ureia estabilizada na adubação nitrogenada de cana-de-açúcar / Stabilized urea in nitrogen fertilization of sugarcane

Moreira, Lílian Angélica 08 February 2017 (has links)
A adubação nitrogenada de soqueira de cana-de-açúcar no Brasil normalmente é feita no período seco do ano e a principal fonte de N é o nitrato de amônio, apesar de a ureia ser o principal fertilizante nitrogenado consumido no Brasil e no mundo. Para viabilizar o uso de ureia em áreas de cana-de-açúcar colhida sem queima, com grande quantidade de palha recobrindo o solo, devem ser adotadas estratégias que reduzam as perdas de amônia por volatilização, como uso de ureia estabilizada com inibidores de urease. Trabalhos prévios indicaram a necessidade de aumentar a concentração do inibidor de urease NBPT na ureia para reduzir perdas de amônia por volatilização em áreas de cana-crua, porém os efeitos na produtividade da cultura ainda não foram estudados. A hipótese deste trabalho é de que o aumento da concentração do inibidor de urease NBPT na ureia irá proporcionar ganhos de produtividade comparado à ureia convencional, demonstrando a viabilidade do uso de ureia estabilizada para adubação de soqueira de cana-crua. O presente trabalho foi executado em dois locais (Experimento 1, Latossolo Vermelho-Amarelo distrófico de textura muito argilosa e Experimento 2, Latossolo Vermelho-Amarelo eutrófico de textura média) para avaliar o comportamento produtivo de soqueiras de cana-de-açúcar em função de doses de N nas formas de nitrato de amônio, ureia e ureia estabilizada com diferentes concentrações de NBPT. O delineamento experiemental foi de blocos inteiramente casualizados no esquema fatorial 6 x 2 + 1, sendo seis fontes de N (nitrato de amônio, ureia e ureia estabilizada com quatro doses de NBPT variando de 530 a 2000 mg kg-1), duas doses de N (50 e 100 kg ha-1 de N) e um tratamento adicional (Controle, sem adubação nitrogenada). Foram avaliados o perfilhamento, teor foliar de N, índice SPAD, produtividade de colmos, acúmulo de N na parte aérea e os atributos tecnológicos. Também foi avaliada a atividade enzimática da glutamina sintetase (GS) e nitrato redutase (NR) no Experimento 2. Os dados foram submetidos a análise de variância ao nível de 10 % de significância pelo teste F, e os fatores significativos foram comparados pelo teste Tukey a 10 % de significância. Os teores foliares de N não foram alterados pela interação dos fatores, sendo mais importante o aumento da dose de N, o que também ocorreu para atividade das enzimas GS e NR e para o índice SPAD. A produtividade de colmos foi influenciada distintamente entre as áreas. No Experimento 1, houve resposta significativa para as doses de N, independente da fonte de N . No Experimento 2 não houve diferença significativa na produtividade de colmos entre as doses e fontes de N. Os resultados deste trabalho indicam que não é necessário aumentar a concentração de NBPT na ureia e que, tanto a ureia convencional quanto a ureia estabilizada podem ser utilizadas para adubação nitrogenada de soqueira de cana-de- açúcar como fontes opcionais ao nitrato de amônio. / Nitrogen fertilization of sugarcane ratoon in Brazil is usually performed in the dry period of the year and the main source of N is ammonium nitrate, although urea is the main nitrogen fertilizer consumed in Brazil and in the world. In order to allow urea usage in green cane trash blanketing (GCTB) systems, with high amount of straw left on soil surface, strategies that reduce ammonia losses are required, such as the use of urea stabilized with urease inhibitors. Previous research indicated the need to increase the concentration of the urease inhibitor NBPT in urea to reduce ammonia losses in GCTB systems, but the effects on such increase on yield performance is unclear. This study was undertaken to test the hypothesis that increasing the concentration of NBPT in urea will provide yield gains when compared to untreated urea, demonstrating the feasibility of using stabilized urea in GCTB areas. Two field trials (Experiment 1, Oxisols of very clayey texture and Experiment 2, medium-texture Oxisols) were set up to evaluate the yield performance of sugarcane fertilized with N rates as ammonium nitrate, urea and urea stabilized with different concentrations of NBPT. The experimental design was a complete randomized blocks on factorial scheme 6 x 2 + 1, with six N sources (ammonium nitrate, urea and urea stabilized with NBPT concentration ranging from 530 to 2000 mg kg-1), two doses of N (50 and 100 kg ha-1 of N) and an additional control (no N fertilization). It was evaluated the tillering, foliar N content, SPAD index, crop yield, shoot N accumulation and the technological attributes. The enzymatic activity of glutamine synthetase (GS) and nitrate reductase (NR) was also evaluated in Experiment 2. Data were submitted to analysis of variance at the 10 % level of significance by the F test, and the significant factors were compared by the Tukey test at 10 % significance. Leaf N contents weren\'t affected by the interaction of the factors, being more important the increase of the dose of N, which also occurred for the activity of GS, NR and for the SPAD index. Sugarcane response to N fertilization varied among sites. In Experiment 1, there was a significant response to N rates, independently of N sources evaluted. In Experiment 2 there was no significant effect of N sources or rates on sugarcane yield. The results of this study indicate that increasing NBPT concentration in urea will not improve sugarcane yield. However, both urea and stabilized urea resulted in similar yield performance when compared to ammonium nitrate for fertilization of GCTB systems.
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Ureia estabilizada na adubação nitrogenada de cana-de-açúcar / Stabilized urea in nitrogen fertilization of sugarcane

Lílian Angélica Moreira 08 February 2017 (has links)
A adubação nitrogenada de soqueira de cana-de-açúcar no Brasil normalmente é feita no período seco do ano e a principal fonte de N é o nitrato de amônio, apesar de a ureia ser o principal fertilizante nitrogenado consumido no Brasil e no mundo. Para viabilizar o uso de ureia em áreas de cana-de-açúcar colhida sem queima, com grande quantidade de palha recobrindo o solo, devem ser adotadas estratégias que reduzam as perdas de amônia por volatilização, como uso de ureia estabilizada com inibidores de urease. Trabalhos prévios indicaram a necessidade de aumentar a concentração do inibidor de urease NBPT na ureia para reduzir perdas de amônia por volatilização em áreas de cana-crua, porém os efeitos na produtividade da cultura ainda não foram estudados. A hipótese deste trabalho é de que o aumento da concentração do inibidor de urease NBPT na ureia irá proporcionar ganhos de produtividade comparado à ureia convencional, demonstrando a viabilidade do uso de ureia estabilizada para adubação de soqueira de cana-crua. O presente trabalho foi executado em dois locais (Experimento 1, Latossolo Vermelho-Amarelo distrófico de textura muito argilosa e Experimento 2, Latossolo Vermelho-Amarelo eutrófico de textura média) para avaliar o comportamento produtivo de soqueiras de cana-de-açúcar em função de doses de N nas formas de nitrato de amônio, ureia e ureia estabilizada com diferentes concentrações de NBPT. O delineamento experiemental foi de blocos inteiramente casualizados no esquema fatorial 6 x 2 + 1, sendo seis fontes de N (nitrato de amônio, ureia e ureia estabilizada com quatro doses de NBPT variando de 530 a 2000 mg kg-1), duas doses de N (50 e 100 kg ha-1 de N) e um tratamento adicional (Controle, sem adubação nitrogenada). Foram avaliados o perfilhamento, teor foliar de N, índice SPAD, produtividade de colmos, acúmulo de N na parte aérea e os atributos tecnológicos. Também foi avaliada a atividade enzimática da glutamina sintetase (GS) e nitrato redutase (NR) no Experimento 2. Os dados foram submetidos a análise de variância ao nível de 10 % de significância pelo teste F, e os fatores significativos foram comparados pelo teste Tukey a 10 % de significância. Os teores foliares de N não foram alterados pela interação dos fatores, sendo mais importante o aumento da dose de N, o que também ocorreu para atividade das enzimas GS e NR e para o índice SPAD. A produtividade de colmos foi influenciada distintamente entre as áreas. No Experimento 1, houve resposta significativa para as doses de N, independente da fonte de N . No Experimento 2 não houve diferença significativa na produtividade de colmos entre as doses e fontes de N. Os resultados deste trabalho indicam que não é necessário aumentar a concentração de NBPT na ureia e que, tanto a ureia convencional quanto a ureia estabilizada podem ser utilizadas para adubação nitrogenada de soqueira de cana-de- açúcar como fontes opcionais ao nitrato de amônio. / Nitrogen fertilization of sugarcane ratoon in Brazil is usually performed in the dry period of the year and the main source of N is ammonium nitrate, although urea is the main nitrogen fertilizer consumed in Brazil and in the world. In order to allow urea usage in green cane trash blanketing (GCTB) systems, with high amount of straw left on soil surface, strategies that reduce ammonia losses are required, such as the use of urea stabilized with urease inhibitors. Previous research indicated the need to increase the concentration of the urease inhibitor NBPT in urea to reduce ammonia losses in GCTB systems, but the effects on such increase on yield performance is unclear. This study was undertaken to test the hypothesis that increasing the concentration of NBPT in urea will provide yield gains when compared to untreated urea, demonstrating the feasibility of using stabilized urea in GCTB areas. Two field trials (Experiment 1, Oxisols of very clayey texture and Experiment 2, medium-texture Oxisols) were set up to evaluate the yield performance of sugarcane fertilized with N rates as ammonium nitrate, urea and urea stabilized with different concentrations of NBPT. The experimental design was a complete randomized blocks on factorial scheme 6 x 2 + 1, with six N sources (ammonium nitrate, urea and urea stabilized with NBPT concentration ranging from 530 to 2000 mg kg-1), two doses of N (50 and 100 kg ha-1 of N) and an additional control (no N fertilization). It was evaluated the tillering, foliar N content, SPAD index, crop yield, shoot N accumulation and the technological attributes. The enzymatic activity of glutamine synthetase (GS) and nitrate reductase (NR) was also evaluated in Experiment 2. Data were submitted to analysis of variance at the 10 % level of significance by the F test, and the significant factors were compared by the Tukey test at 10 % significance. Leaf N contents weren\'t affected by the interaction of the factors, being more important the increase of the dose of N, which also occurred for the activity of GS, NR and for the SPAD index. Sugarcane response to N fertilization varied among sites. In Experiment 1, there was a significant response to N rates, independently of N sources evaluted. In Experiment 2 there was no significant effect of N sources or rates on sugarcane yield. The results of this study indicate that increasing NBPT concentration in urea will not improve sugarcane yield. However, both urea and stabilized urea resulted in similar yield performance when compared to ammonium nitrate for fertilization of GCTB systems.

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