L'Epoxide Hydrolase soluble (sEH) est une enzyme exprimée dans les vaisseaux. Elle possède un domaine hydrolase à l'extrémité COOH-term (sEH-H) qui métabolise des facteurs vasodilatateurs et anti-inflammatoires comme les acides époxyeicosatriénoïques (EETs). Elle possède également un domaine phosphatase à l'extrémité NH2-term (sEH-P) dont le rôle biologique n'est pas totalement élucidé. Afin de comprendre le rôle de sEH-H et sEH-P dans la calcification vasculaire, des anneaux aortiques de rats et des cellules musculaires lisses vasculaires humaines (CMLVh) ont été exposés à des conditions procalcifiantes pendant 7 et 14 jours respectivement. Le N-acétyl-S-farnesyl-L-cystéine (AFC), un inhibiteur de sEH-P, et le trans-4-(4-(3-adamantan-1-yl-ureido)-)cyclohexyloxy) acide benzoïque (t-AUCB), un inhibiteur de sEH-H, ont été utilisés entre 0,1 et 10 μM. En condition procalcifiante, l'AFC réduit de façon dose-dépendante la calcification vasculaire. Au contraire, le t-AUCB augmente de façon dose-dépendante la minéralisation au sein des anneaux aortiques. Une augmentation de l'activité TNAP a été observée dans les surnageants de culture des anneaux aortiques avec le t-AUCB. Sur les anneaux désendothélialisés ou sur les cultures de CMLVh, les inhibiteurs n'ont pas d'effet sur la calcification, soulignant le rôle crucial joué par les facteurs endothéliaux métabolisés par la sEH. L'ensemble de nos résultats montrent que l'inhibition pharmacologique de la sEH-H augmente la calcification vasculaire in vitro en augmentant la biodisponibilité des EETS. Au contraire, l'inhibition de la sEH-P protège contre la calcification vasculaire à travers un mécanisme dépendant de l'endothélium / Expressed in the vasculature, soluble epoxide hydrolase (sEH) exhibits a COOH-terminal hydrolase domain metabolizing endothelial vasodilator and anti-inflammatory factors like epoxyeicosatrienoic acids (EETs) and, a NH2-terminal phosphatase domain whose biological role remains unclear. To assess the role of sEH phosphatase and hydrolase domains in vascular calcification, rat aortic rings and hVSMCs were exposed to procalcifying culture media for 7 and 14 days, respectively. N-acetyl-S-farnesyl-L-cysteine (AFC), an inhibitor of the phosphatase domain, and trans-4-(4-(3-adamantan-1-yl-ureido)-cyclohexyloxy)-benzoic acid (t-AUCB), a hydrolase domain inhibitor, were used at concentrations ranging from 0.1 to 10 μM. Under procalcifying culture condition, AFC significantly and dose-dependently reduces aortic calcification. Conversely, addition of t-AUCB results in a significant and dose-dependent increase in aortic calcification in rats, without modification of tissue viability. A concomitant increase in TNAP activity was observed in supernatants of aortic rings cultured in the presence of t-AUCB. On de-endothelialized aortic rings or hVSMCs cultures, both inhibitors had no significant effect on the calcification process, pointing out the crucial role played by endothelial factors metabolized by sEH in the control of this biomineralization process. Together, our data demonstrates that pharmacological inhibition of sEH hydrolase increases vascular calcification in vitro by majoring the bioavailability of endothelium- derived EETs. Contrarily, the inhibition of sEH phosphatase is protective against vascular calcification through an endothelium-dependent mechanism.

Thèse (M.Sc.)--Université Laval, 2004. / Titre de l'écran-titre (visionné le 23 février 2006). Bibliogr.

Les bactéries se prêtent très bien aux analyses phylogénétiques en raison du fait que plusieurs génomes ont été entièrement séquencés -et leur nombre continue d'augmenter -et leurs génomes sont petits et ne contiennent que peu d'ADN répétitif en contraste avec les génomes des eucaryotes. La molécule d'ARNr 16S, l'ARN composant de la petite sous-unité du ribosome, a été établie comme la macromolécule de choix pour les analyses phylogénétiques et l'identification des espèces bactériennes. En dépit de sa position centrale, l'utilisation de l'ARNr 16S n'est pas sans inconvénients. En effet, l'évolution d'un seul gène n'est pas nécessairement représentative de l'évolution d'un génome entier, des hétérogénéités entre des copies du gène d'ARNr 16S -des allèles -ne sont pas exceptionnelles, et des copies paralogues peuvent suggérer des phylogénies différentes. De plus, au cours des dernières années, des analyses phylogénétiques basées sur des séquences codant pour des protéines conservées -telles des gènes de ménage (house-keeping genes) -ont donné des résultats discordants. Parmi les bactéries, les y-protéobactéries avec 33 génomes entièrement séquencés sont les plus étudiées, certainement en raison de leurs importances cliniques et biologiques. L'objectif de mon travail a été, d'une part d'étudier l'hétérogénéité des séquences des allèles de l'ARNr 16S chez 33 y-protéobactéries et de déterminer si un seul allèle par bactérie est suffisant pour établir une phylogénie, d'autre part de construire les arbres phylogénétiques de ces 33 y-protéobactéries à partir de l'analyse comparée des séquences de certains gènes de ménage à savoir: l'adénylate kinase (adk), la shikimate déshydrogénase (aroE), la glucose-6-phosphate déshydrogénase (gdh) et de leurs séquences concaténées. Ces phylogénies seront comparées entre elles et aussi à celle établie à partir du gène de l'ARNr 16S. Les analyses phylogénétiques ont démontré que la plupart des séquences alléliques d'une même souche sont identiques ou quasi identiques et sont regroupées à l'intérieur d'un même genre et d'une même espèce. À cause de leurs homogénéités, un seul allèle du gène de l'ARNr 16S est suffisant pour construire la phylogénie des y-protéobactéries au niveau du genre et de l'espèce. Les arbres phylogénétiques construits à partir de chacun des trois gènes de ménage -adk, aroE et gdh -et des séquences concaténées des trois gènes sont, en général, similaires à l'arbre construit à partir du gène de l'ARNr 16S, aux niveaux de la famille, du genre, de l'espèce et de la souche, avec certaines exceptions. Les gènes de ménage, cependant, montrent un plus haut taux de substitutions nucléotidiques que le gène de l'ARNr 16S. De plus, parce que les trois gènes de ménage ont chacun un pourcentage plus bas de similarité de séquences que le gène de l'ARNr 16S, ils ont montré une meilleure différenciation des neuf souches de bactéries entériques Escherichia-Shigella-Salmonella. Ils peuvent potentiellement révéler des relations sur des branches plus profondes d'un arbre phylogénétique que ne le peut le gène de l'ARNr 16S. De plus, puisque ces gènes de ménage sont utilisés dans les typages de séquence multi-locus "multilocus sequence typing (MLST)", nous pouvons nous attendre à ce que le nombre de séquences disponibles dans le domaine public pour ces trois gènes de ménage augmente rapidement les rendant ainsi d'autant plus utiles pour complémenter le gène de l'ARNr 16S dans des études phylogénétiques, ou pour certaines autres analyses phylogénétiques très ciblées. ______________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : y-protéobactéries, Gènes de ménage, Phylogénie, ARNr 16S.

Thèse doctorat : Biochimie : Villeurbanne, INSA : 1997. / Titre provenant de l'écran-titre. Bibliogr. p. 179-222.

Thèse de doctorat : Médecine. Physiologie digestive : Université de Nantes : 2004. / Bibliogr. f. 126-168.

Thèse de doctorat : Instrumentation et analyses avancées : Lille 1 : 2001. / N° d'ordre (Lille) : 3055. Résumé en français et en anglais. Bibliogr. f. 115-123.

Thèse doctorat : Biochimie : Villeurbanne, INSA : 2004. / Titre provenant de l'écran-titre. Bibliogr. p. 148-196.

Reproduction de : Thèse de doctorat : Sciences de l'éducation : Lyon 2 : 2004. / Titre provenant de l'écran-titre. Bibliogr.

Thèse doctorat : Sciences de la Vie et de la Terre : Strasbourg 1 : 2006. / Thèse soutenue sur un ensemble de travaux. Titre provenant de l'écran-titre. Bibliogr. 7 p.

Thèse de doctorat : Sciences du vivant. Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie : Strasbourg 1 : 2008. / Titre provenant de l'écran-titre. Notes bibliogr.