Memoria para optar al título profesional de Bioquímico / Los ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga omega-3 (AGPICL ω-3) son compuestos que están asociados a múltiples funciones fisiológicas, lo que sugiere que su administración puede prevenir varias enfermedades crónicas no transmisibles. Por lo tanto, en este trabajo se evaluó el efecto de la suplementación con AGPICL ω-3 en la prevención de la esteatosis hepática, resistencia a la insulina e inflamación sistémicas, en ratones alimentados con una dieta enriquecida en grasa. Para tales propósitos, ratones C57BL/6J machos recibieron (a) dieta control (10% grasa, 20% proteína, 70% carbohidrato), (b) dieta control más AGPICL ω-3 (108 mg/kg/día de ácido eicosapentaenoico más 92 mg/kg/día de ácido docosahexaenoico), (c) dieta alta en grasa (60% grasa, 20% proteína, 20% carbohidrato) y (d) dieta alta en grasa más AGPICL ω-3, durante períodos de 8 y 12 semanas. Se determinaron parámetros de peso corporal, resistencia a la insulina, inflamación sistémica, esteatosis hepática y composición hepática de ácidos grasos. La alimentación con dieta alta en grasa aumentó significativamente el peso corporal e indujo esteatosis hepática del tipo macrovesicular, junto con elevar los niveles plasmáticos de insulina y glucosa en ayuno, HOMA-IR (homeostasis model assessment) y los niveles plasmáticos de TNF-α. También se observó disminución en los niveles hepáticos de AGPICL ω-3 y un aumento en la relación ω-6/ω-3 al comparar con el grupo control. Estas alteraciones fueron reducidas o normalizadas a valores control en animales alimentados con dieta alta en grasa y suplementados con AGPICL ω-3, junto con aumentos significativos en los niveles hepáticos de AGPICL ω-3 y disminución en la relación de ácidos grasos ω-6/ω-3. Por lo tanto, el restablecimiento de los niveles de AGPICL ω-3 en ratones alimentados con dieta alta en grasa y suplementados con EPA y DHA reduce el contenido lipídico hepático, disminuye la inflamación sistémica y mejora la sensibilidad a la insulina. / Omega-3 (ω-3) long-chain polyunsaturated fatty acids (ω-3 LCPUFA) are associated with several physiological functions, suggesting that their administration may prevent many non transmissible chronic diseases. Therefore, prevention of liver steatosis, insulin resistance and systemic inflammation by LCPUFA supplementation in mice fed a high fat diet were evaluated. For these purposes, male C57BL/6J mice received (a) control diet (10% fat, 20% protein, 70% carbohydrate), (b) control diet plus ω-3 LCPUFA (108 mg/kg/day eicosapentaenoic acid plus 92 mg/kg/day docosahexaenoic acid), (c) high fat diet (60% fat, 20% protein, 20% carbohydrate), or (d) high fat diet plus ω-3 LCPUFA for 8 and 12 weeks. Parameters of body weight, insulin resistance, systemic inflammation, liver steatosis and fatty acid analysis were determined. High fat diet significantly increased body weight and induced macrovesicular steatosis, concomitantly with higher fasting serum glucose and insulin levels, HOMA-IR (homeostasis model assessment), and plasmatic TNF- levels. Hepatic ω-3 LCPUFA depletion and elevated ω-6/ω-3 ratio over control values were also observed. These changes were either reduced or normalized to control values in animals subjected to high fat diet and ω-3 LCPUFA supplementation, with significant increased hepatic total ω-3 LCPUFA content and reduced ω-6/ω-3 ratio. So, repletion of liver ω-3 LCPUFA levels by ω-3 LCPUFA dietary supplementation in high fat diet mice reduces hepatic lipid content, systemic inflammation and improves insulin sensitivity. / Fondecyt

Memoria para optar al Título Profesional de Químico Farmacéutico / Los fibroblastos cardiacos (FC) actúan como células centinelas del corazón, ya que responden ante cualquier elemento interno o externo que afecte la homeostasis del sistema. Entre ellos, uno de los más estudiados es el lipopolisacárido bacteriano (LPS), capaz de desencadenar una respuesta inflamatoria, caracterizada por: activación de vías proinflamatorias, producción de citoquinas y factores de crecimiento, expresión de proteínas de adhesión como ICAM-1 y VCAM-1, que permiten el reclutamiento e infiltración de células del sistema inmune, entre otros, con el fin de reparar el daño. La Resolvina E1 (RvE1) es un mediador pro-resolutivo especializado (SPM), proveniente del ácido eicosapentaenoico (EPA) al que recientemente se le han atribuido propiedades antiinflamatorias, provocando el cese o inhibición del reclutamiento de células del sistema inmune, sin embargo, en FC no existe evidencia de su actividad. El objetivo de este trabajo fue identificar los efectos que la RvE1 provocaba en FC, con el fin de esclarecer si era capaz de disminuir la adhesión de células mononucleares de bazo (SMC) al disminuir los niveles de expresión de ICAM-1 y VCAM-1, inducidas por LPS; no sin antes demostrar que por sí solas no modificaban las condiciones basales del organismo. Es decir, RvE1 no presenta citotoxicidad, pero disminuye la proliferación de FC, tampoco fue capaz de proteger frente a condiciones de isquemia/reperfusión. Sin embargo, no provocó cambios en los niveles de expresión basales de ICAM-1 y VCAM-1 por sí sola, pero al pre-incubar FC con RvE1 y luego estimularlos con LPS, los niveles de expresión de ICAM-1 y VCAM-1 mostraron una marcada tendencia a disminuir, y como consecuencia de ello, se observó una significativa disminución de la adhesión de SMC a FC. Estos resultados permiten deducir que RvE1 si posee propiedades resolutivas en FC, participando activamente en el cese del reclutamiento de células del sistema inmune / Cardiac fibroblasts (CF) act as sentinel cells of the heart, as they respond to any internal or external element that affects the homeostasis of the system. Among them, one of the most studied is the bacterial lipopolysaccharide (LPS), capable of triggering an inflammatory response, characterized by: activation of proinflammatory pathways, production of cytokines and growth factors, expression of adhesion proteins such as ICAM-1 and VCAM -1, which allow the recruitment and infiltration of cells of the immune system, among others, in order to repair the damage. Resolvin E1 (RvE1) is a specialized pro-resolutive mediator (SPM), derived from eicosapentaenoic acid (EPA), which has recently been attributed anti-inflammatory properties, causing the cessation or inhibition of the recruitment of cells of the immune system, however, in FC not there is evidence of its activity. The objective of this work was to identify the effects that the RvE1 caused in FC, in order to clarify if it was able to decrease the adhesion of spleen mononuclear cells (SMC) by decreasing the expression levels of ICAM-1 and VCAM-1, induced by LPS; not without first demonstrating that by themselves they did not modify the basal conditions of the organism. In other words, RvE1 does not present cytotoxicity, but decreases the proliferation of FC, nor was it able to protect against ischemia / reperfusion conditions. However, it did not cause changes in the basal expression levels of ICAM-1 and VCAM-1 by themselves, but by pre-incubating FC with RvE1 and then stimulating them with LPS, the expression levels of ICAM-1 and VCAM-1 showed a marked tendency to decrease, and as a consequence, a significant decrease in the adhesion of SMC to FC was observed. These results allow to deduce that RvE1 does have resolutive properties in FC, participating actively in the cessation of the recruitment of cells of the immune system / FONDECYT N° 1130300 y 1170425

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Los fibroblastos cardíacos (FC) son células capaces de mantener la homeostasis de la matriz extracelular (MEC), regulando la estructura tisular, así como también participan de la señalización química y eléctrica del tejido cardiaco. Además, los FC están en estrecha relación con el proceso inflamatorio, manteniendo un rol clave en la homeostasis del tejido posterior a una injuria o daño tisular. En el proceso inflamatorio, producido por daño celular o por invasión microbiana, las células del sistema inmune son atraídas desde la circulación sanguínea al sitio de injuria, siendo los neutrófilos la primera línea de defensa del organismo. La llegada de neutrófilos al sitio de daño genera gradientes quimiotáxicos que atraen células del sistema inmune, gatillando el reclutamiento leucocitario, el cual es dependiente de las proteínas de adhesión molecular VCAM-1 e ICAM-1, generando una respuesta inflamatoria sostenida. En ese contexto, evidencias sugieren que un nuevo tipo de mediador lipídico, la Resolvina D1 (RvD1), ha demostrado moderar la respuesta inflamatoria, promoviendo el cese de la infiltración leucocitaria, además de mejorar la fagocitosis en macrófagos para así permitir la remoción de células y tejido apoptótico en la zona de injuria, finalizando así el proceso de inflamación. Hasta la fecha, la RvD1 no ha sido utilizada en modelos cardíacos, y por lo mismo, se desconoce su utilidad como agente antiinflamatorio en el corazón, específicamente en el FC. El objetivo de este trabajo fue caracterizar los efectos de RvD1 en la viabilidad y proliferación celular de FC neonatos (FCN), para así estudiar el efecto de RvD1 sobre FCN bajo un contexto inflamatorio, inducido por estímulo con LPS, midiendo los niveles de expresión de proteínas de adhesión VCAM-1 e ICAM-1, y consecuentemente, la adhesión de leucocitos a FCN. Además, se estudió si la RvD1 es capaz de mostrar un efecto citoprotector frente al daño provocado por un estímulo de isquemia/reperfusión simulada (I/Rs). Los resultados mostraron que en FCN la presencia de RvD1 no afecta la proliferación ni viabilidad de éstos; sin embargo, no previnieron la muerte celular inducida por I/Rs. Se demostró además que el pre-tratamiento de FCN con RvD1 y posteriormente tratados por LPS, disminuyó la expresión de VCAM-1 e ICAM-1, y como consecuencia de ello, previno la adhesión de SMC a FCN. De esta forma, la RvD1 se transforma en una potencial y valiosa herramienta terapéutica capaz de disminuir la respuesta inflamatoria luego de algún evento de injuria cardiaca como lo puede ser una miocarditis, o bien, un infarto al miocardio / Cardiac fibroblasts (FC) are cells capable of maintaining the homeostasis of the extracellular matrix (ECM), regulating tissue structure, as well as participating in the chemical and electrical signaling of cardiac tissue. In addition, FCs are closely related to the inflammatory process, maintaining a key role in tissue homeostasis following injury or tissue damage. In the inflammatory process, presented by cellular damage or by microbial invasion, the cells of the immune system are attracted from the blood circulation to the site of the lesion, with neutrophils being the first line of defense of the organism. The arrival of neutrophils to the site of damage to genomes chemotactic gradients that attract cells of the immune system, triggering the leukocyte recruitment, which is dependent on molecular adhesion proteins VCAM-1 and ICAM-1, generating a sustained inflammatory response. In this context, evidence suggesting a new type of lipid mediator, Resolvin D1 (RvD1), has shown that the inflammatory response, the growth of leukocyte infiltration, in addition to improving phagocytosis in macrophages to allow a separation of cells and tissue apoptotic in the area of injury, thus ending the process of inflammation. To date, RvD1 has not been used in cardiac models, and therefore, is unknown as the anti-inflammatory agent in the heart, specifically in the FC. The objective of this work was to characterize the effects of RvD1 on the viability and cellular proliferation of neonatal FC (FCN), in order to study the effect of RvD1 on FCN under an inflammatory context, induced by stimulation with LPS, measuring the levels of expression of adhesion proteins VCAM-1 and ICAM-1, and consequently, the adhesion of leukocytes to FCN. In addition, we studied whether RvD1 is able to show a cytoprotective effect against damage caused by a simulated ischemia / reperfusion stimulus (I / Rs). The results show that in FCN the presence of RvD1 does not affect the proliferation or viability thereof; however, they did not prevent cell death induced by I/Rs. It was also demonstrated the previous treatment of FCN with RvD1 and subsequently treated by LPS, decreased the expression of VCAM-1 and ICAM-1, and as a consequence, prevented the adhesion of SMC to FCN. In this way, RvD1 becomes a potential and valuable therapeutic tool capable of decreasing the inflammatory response after some event of cardiac injury such as myocarditis or myocardial infarction / FONDECYT N° 1130300 y 1170425