Actinobactérias estão presentes nos mais diversos ambientes e são conhecidas por produzirem compostos com aplicabilidade, principalmente, na área médico-farmacológica e agronômica. Nos últimos anos, as pesquisas com microorganismos de ambientes pouco explorados têm aumentado significativamente, a fim de isolar novas espécies e novos compostos bioativos eficazes no controle de patógenos resistentes. Nesse contexto, a exploração de ilhas desponta como uma alternativa promissora. Ilhas oceânicas apresentam um habitat particular, com características diferentes do continente, muitas vezes abrigando organismos endêmicos. Neste estudo foram realizados o isolamento e o estudo químico e biológico de actinobactérias isoladas das ilhas de Alcatrazes e Palmas, localizadas no litoral norte de São Paulo. Amostras de solo rizosférico, folhas, raízes e pecíolo foram coletadas das plantas Anthurium alcatrazense e Anthurium urvilleanum. O material coletado foi inoculado em três meios de cultivo, resultando no isolamento de 23 actinobactérias, que foram identificadas majoritariamente como pertencentes ao gênero Streptomyces, com exceção de um isolado, pertencente ao gênero Amycolatopsis. Os isolados foram avaliados quanto à presença de genes de policetídeos (PKS-I) e peptídeos não ribossomais (NRPS), e foram também cultivados em quatro meios de cultivo, para explorar a produção de metabólitos secundários. Os extratos foram particionados e avaliados frente a bactérias patogênicas e fungos fitopatogênicos. Extratos de seis linhagens inibiram o crescimento de pelo menos um destes patógenos: Burkholderia cepacia, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Staphylococcus schleiferi, Rhizoctonia solani e Sclerotium rolfsii. Todos os isolados positivos no bioensaio, foram positivos para uma das vias biossintéticas (PKS-I ou NRPS). O isolado identificado como Streptomyces fulvissimus (A32), foi selecionado para investigação dos metabólitos secundários. Este é o primeiro relato do isolamento de actinobactérias das ilhas de Alcatrazes e Palmas, bem como do estudo do potencial antimicrobiano destes micro-organismos. / Actinobacteria are present in the most diverse environments and are known to produce compounds with applicability, mainly in the medical-pharmacological and agronomic area. In recent years, research with microorganisms from poorly explored environments has increased significantly in order to isolate new species and new bioactive compounds effective in the control of resistant pathogens. In this context, the exploration of islands emerges as a promising alternative. Oceanic islands have a particular habitat, with different characteristics of the continent, often harboring endemic organisms. In this study were carried out the isolation and chemical and biological study of actinobacteria isolated from the Palmas and Alcatrazes islands, north coast of São Paulo. Samples of rhizospheric soil, leaves, roots and petiole were collected from plants Anthurium alcatrazense and Anthurium urvilleanum. The collected material was inoculated in three culture media, resulting in the isolation of 23 actinobacteria, which were identified mainly as belonging to the genus Streptomyces, with the exception of one isolate belonging to the genus Amycolatopsis. The isolates were evaluated for the presence of polyketide (PKS-I) and non-ribosomal peptides (NRPS), in addition, were cultured in four culture media to explore the production of secondary metabolites. The extracts were partitioned and evaluated against pathogenic bacteria and phytopathogenic fungi. Extracts from six isolates inhibited the growth of at least one of these pathogens: Burkholderia cepacia, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Staphylococcus schleiferi, Rhizoctonia solani and Sclerotium rolfsii. All the positive isolates in the bioassay were positive for one of the biosynthetic pathways (PKS-I or NRPS). The isolate identified as Streptomyces fulvissimus (A32) was selected for investigation of secondary metabolites. This is the first report of the isolation of actinobacteria from the Alcatrazes and Palmas islands, as well as the study of the antimicrobial potential of these microorganisms.

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No. of bitstreams: 1 Dissertação - Nélly Mara Vinhote da Silva.pdf: 662011 bytes, checksum: 008fdae35511497291f0cd0b8ca08a91 (MD5) Previous issue date: 2008-03-11 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The study of habitats that have been few explored with purpose of obtaining composts with biotechnological interest that has been produced by the Amazonian’s biological diversity it’s a strategy that will allow the discovery of important bioactive principles. In microbial biodiversity, the actinomycetes represents the most important bacterial group. They have a filamentous organization that occur in great varieties of substrata and present a great application in pharmaceutical industry. The scope of this work was to analyze taxonomically the actinomycetes associated at lichens and to determine the capability of these bacteria for antibiotic producing. Ten samples of foliose lichens were collected in area Federal University of Amazonas (UFAM), South Section. For the isolation of actinomycetes were utilized the culture media Yeast Extract-Malt Extract Agar–Starch (ISP-2A), Casein-Starch Agar (CAA), Raffinose-Histidin Agar (RHA) and Water Agar (AA), added with antifungics. Were isolated 71 actinomycetes associated to foliose lichens. The isolated were tested for antimicrobial activity against eight microorganisms-test by the techniques with cultivation in solid medium and broth culture. Among the actinomycetes tested by solid medium 80% shown antimicrobial activity, mainly against Aspergillus niger, Candida albicans and Staphylococcus aureus. In assay by broth cultivation 79% of the actinomycetes inhibited the growth of microorganisms-test, although the higher activities were against Mycobacterium smegmatis and Staphylococcus aureus. The isolated antimicrobial activity varied from moderate (halo=13 at 18 mm) to high (halo=19 at 35 mm) activity. It was observed that 68% of isolated presented high antimicrobial activity. The identification of the actinomycetes was done by the macro and micromorphological determination, physiologic tests and by the determination of aminoacids from the cell wall, and most of them belonging to genus Streptomyces. The microorganisms were preserved by freezing at -20 oC and by preservation of actinomycetes colony directly in water (Castellani’s method). / O estudo de habitats pouco explorados com a finalidade de obter biocompostos de interesse biotecnológicos produzidos pela diversidade biológica da Amazônia é uma estratégia que permitirá a descoberta de importantes princípios bioativos. Dentre a biodiversidade microbiana, destacam-se os actinomicetos, que são um grupo de bactérias de organização filamentosa que ocorrem em uma grande variedade de substratos e apresentam múltiplas aplicações na indústria farmacêutica, principalmente no que tange a produção de antimicrobianos. Este trabalho teve como escopo analisar taxonomicamente os actinomicetos associados a liquens e determinar a capacidade destas bactérias em produzir antibióticos. Foram coletadas dez amostras de liquens folhosos das árvores presentes na área do Campus Universitário, Setor Sul, da Universidade Federal do Amazonas (UFAM). Para o isolamento dos actinomicetos foram utilizados os meios de cultivo: Ágar Extrato de Levedura-Extrato de Malte-Amido (ISP-2A), Ágar Caseína-Amido (CAA), Ágar Rafinose-Histidina (RHA) e Ágar-Água (AA), suplementados com antifúngicos. Como resultados foram isolados 71 actinomicetos associados aos liquens. Os isolados foram testados quanto à caracterização da atividade antimicrobiana contra oito microrganismos-teste, através de técnicas em meio sólido e em meio líquido. Das linhagens de actinomicetos testados, 80% apresentaram atividade antimicrobiana em meio sólido, principalmente contra Aspergillus niger, Candida albicans e Staphylococcus aureus. No ensaio em meio líquido, 79% das linhagens foram capazes de inibir o crescimento dos microrganismos-teste, sendo que as maiores atividades foram detectadas contra Mycobacterium smegmatis e Staphylococcus aureus. A atividade antimicrobiana dos isolados variou de moderada (halo=13 a 18 mm) a alta (halo=19 a 35 mm) atividade. Observou-se que 68% dos isolados em meio sólido apresentaram alta atividade antimicrobiana frente aos microrganismos-teste. A identificação dos actinomicetos se deu em nível de gênero, através da determinação da micromorfologia, testes fisiológicos e da determinação de aminoácidos da parede celular, sendo a grande maioria pertencente ao gênero Streptomyces. Os microrganismos foram preservados por congelamento a -20 oC e através da técnica de preservação em água (método de Castellani).