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Testes de microdiluição em caldo e diluição em ágar para avaliação da suscetibilidade in vitro de dermatófitos / Evaluation of agar dilution and broth microdilution methods for antifungal testing to dermathophytesARAUJO, Crystiane Rodrigues de 31 May 2007 (has links)
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Previous issue date: 2007-05-31 / Dermatophytes are keratinophilic fungi that colonize and invade the stratum
corneum of the skin, hair and nails causing the dermatophytosis. An increasing
number of antifungal agents has become available for the treatment of
dermatophytosis, however not all species have the same susceptibility pattern and
may occur relative or absolute resistance of some dermatophytes. The document
M38-A developed by Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) for
determining the minimal inhibitory concentration (MIC) of different antifungal agents
against filamentous fungi, has not included the dermatophytes. The broth
microdilution method has been evaluated by various researchers, and some
parameters as inoculum size, temperature and duration of incubation and endpoint
determination has been investigated. In this study, the in vitro activity of fluconazole,
itraconazole, ketoconazole, griseofulvin and terbinafine against 60 dermatophyte
isolates, belong to three species, using the broth microdilution technique, with
modifications at temperature and incubation time was used. Additionally, the MIC
values obtained by broth microdilution method were compared with those obtained
by the agar dilution technique. The results obtained by broth microdilution method
showed that all isolates produced clearly detectable growth at 28oC and the MIC
values could be determined after 4 days of incubation for the isolates of Trichophyton
mentagrophytes and 5 days for T. rubrum and Microsporum canis isolates.
Itraconazole, ketoconazole and terbinafine had the lowest MIC values (0.03 μg/ml)
for 33.3%, 31.6% and 15% of the isolates, respectively. A good concordance was
observed between the agar dilution and broth microdilution methods. The levels of
agreement were 91.6% with ketoconazole and griseofulvin, 83.3% with itraconazole,
81.6% with terbinafine and 73.3% with fluconazole for all the tested isolates. In
summary, the results of this study suggest that an incubation time of 5 days and
temperature at 28oC used in broth microdilution and agar dilution methods can
contribute to define and to better interpret the MIC values. Beside, until a reference
method for testing the susceptibilities of dermatophytes is standardized, the similar
results with broth microdilution method become the agar dilution useful for testing the
susceptibility of these fungi. / Os dermatófitos são fungos filamentosos queratinofílicos capazes de colonizar
e invadir o extrato córneo da pele, pêlo e unhas produzindo as dermatofitoses. Há
vários agentes antifúngicos disponíveis para o tratamento das dermatofitoses,
entretanto as espécies de dermatófitos possuem perfis de suscetibilidade diferentes,
podendo ocorrer resistência relativa ou absoluta. O documento M38-A desenvolvido
pelo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) para determinar a
concentração inibitória mínima (CIM) de diferentes agentes antifúngicos para fungos
filamentosos, não inclui os dermatófitos. O método de microdiluição em caldo tem
sido avaliado por vários pesquisadores, e alguns parâmetros como tamanho do
inóculo, temperatura e tempo de incubação e determinação das leituras de CIM são
investigados. Neste trabalho, foi avaliada a atividade in vitro de fluconazol,
itraconazol, cetoconazol, griseofulvina e terbinafina para 60 isolados de dermatófitos,
pertencentes a três espécies, através da técnica de microdiluição em caldo, com
modificações na temperatura e tempo de incubação. Adicionalmente, os valores de
CIM obtidos pelo método de microdiluição em caldo foram comparados com aqueles
obtidos pela técnica de diluição em ágar. Os resultados encontrados através do
método de microdiluição em caldo mostraram que todos os isolados produziram
crescimento claramente detectável a temperatura de 28oC e os valores de CIMs
foram determinados após 4 dias de incubação para os isolados de Trichophyton
mentagrophytes e 5 dias para os isolados de T. rubrum e Microsporum canis.
Itraconazol, cetoconazol e terbinafina mostraram os menores valores de CIM (0,03
μg/ml) para 33,3%, 31,6% e 15% dos isolados, respectivamente. Uma boa
concordância foi observada entre os métodos de diluição em ágar e microdiluição
em caldo. A concordância entre os dois métodos foi de 91,6% para cetoconazol e
griseofulvina, 83,3% para itraconazol, 81,6% para terbinafina e 73,3% para
fluconazol para todos os isolados analisados. Em conclusão, os resultados deste
estudo sugerem que uma incubação de 5 dias e temperatura de 28oC, utilizados no
método de microdiluição em caldo e diluição em ágar, podem contribuir para definir e
melhor interpretar os valores de CIM. Além disso, até que um método de referência
de teste de suscetibilidade para dermatófitos seja padronizado, os resultados
similares entre os métodos de microdiluição em caldo e diluição em ágar tornam
este último útil para testar a suscetibilidade in vitro destes fungos.
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