Made available in DSpace on 2016-05-11T12:56:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 leonardo_ruivo_ioc_mest_2016.pdf: 2337878 bytes, checksum: 69b7ee821ee7eed53dca00b82150fc69 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Alterações no perfil de glicosilação de proteínas, células e tecidos têm sido utilizadas como marcadores biológicos para processos fisiológicos e patológicos. Glicoconjugados contendo o ácido siálico (Neu5Ac) estão envolvidas em interações celulares e parasito-hospedeiro, tráfego de linfócitos e regulação do sistema imune. O Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas (DC), expressa em sua superfície e libera no plasma do hospedeiro, uma enzima restrita ao gênero Trypanosoma, a trans-sialidase (TS). Esta é capaz de transferir Neu5Ac de moléculas doadoras e realocá-las em moléculas na superfície do parasito ou sialilar glicoproteínas de células do hospedeiro. A molécula CD43 é um importante aceptor de Neu5Ac em células T e um provável sítio de ação da TS. Na infecção experimental pelo T. cruzi, as células T CD8+ apresentam, majoritariamente, perfis segregados (i) perforina+ (Pfn+), com ação citotóxica, ou (ii) interferon-gama+ (IFN\03B3+), com perfil inflamatório. Estas células estão diferencialmente compartimentalizadas e atuam de forma antagônica, enquanto as Pfn+ se acumulam na inflamação cardíaca e contribuem para a injúria tecidual, as IFN\03B3+ estão majoritariamente na periferia (sangue e baço) e atuam de forma benéfica. Neste trabalho, propomos que na infecção pelo T. cruzi há alterações de glicofenótipos em proteínas séricas e subpopulações de linfócitos T CD8+ funcionalmente segregadas. Camundongos C57BL/6 foram infectados pela cepa Colombiana do T. cruzi e analisados clinicamente. O glicofenótipo de proteínas séricas foi analisado por espectrometria de massas (MALDI-TOF) e o glicofenótipo de tecido cardíaco e de células do baço foi analisado usando lectinas por histoquímica e citometria de fluxo, respectivamente Não detectamos modificação no perfil glicosídico em proteínas séricas em animais infectados. Observamos, no tecido cardíaco, reduzida marcação para a lectina Peanut agglutinin (PNA), aumento para Sambucus nigra (SNA) e não alteração para Maackia amurensis (MAL) em células musculares e inflamatórias. Notamos nas fases aguda (42 dpi) e crônica (120 dpi) aumento na frequência de células PNA+ nas células T CD8+CD43+ e CD4+CD43+, redução no percentual de células SNA+ nas células T CD8+ e CD4+ e diminuição na proporção de células MAL+ nas células T CD4+ e CD8+CD4+. Células T CD8+ totais ou CD8+PNA+ apresentaram perfis semelhantes de ativação (CD44+CD62L-), migração (LFA-1+CCR5+ ou LFA-1+CCR1+) e funcionalidade (Pfn+, Pfn+IFN\03B3+ ou IFN\03B3+). Em 120 dpi, detectou-se enriquecimento de células CD8+PNA+IFN\03B3+ no baço. Assim, durante a DC experimental, células T CD8+PNA+ apresentam-se ativadas e com potencial de migrar e exercer atividade inflamatória (IFN\03B3+), contudo estas não foram detectadas em tecido cardíaco. Resta-nos esclarecer se estas células não migram para este tecido, acumulando-se na periferia, ou se ao entrarem no tecido cardíaco têm seu glicofenótipo alterado ou morrem de modo seletivo. Embora nossos achados não permitam a identificação de biomarcadores de natureza glicosídica de progressão e/ou gravidade da DC, abrem perspectivas para explorar outros modelos experimentais de infecção e para estudos sobre a compartimentalização de células fenotipicamente distintas e funcionalmente relacionadas à proteção contra a injúria cardíaca na infecção pelo T. cruzi / Changes in glycosylation profile of proteins, cells and tissues have been used as biological markers of physiological and pathological processes. Glicoconjugates containing sialic acid (Neu5Ac) are involved in cell and host-parasite interactions, lymphocyte traffic and regulation of the immune system. Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas disease (CD), expresses on the surface and releases in the host plasma, a restricted enzyme to the genus Trypanosoma, the trans-sialidase (TS). This enzyme transfers Neu5Ac from donor molecules and relocates them on parasite surface molecules or sialylates glycoproteins of the host cells. The CD43 molecule is a major acceptor of Neu5Ac on T cells and a target site for TS. In experimental T. cruzi infection, CD8+ T cells have, mostly, segregated profiles (i) perforin+ (Pfn+) with cytotoxic action, or (ii) interferon-gamma+ (IFN\03B3+), with inflammatory profile. These cells are differentially compartmentalized and play antagonistic roles, while the Pfn+ cells accumulate in cardiac inflammation and contribute to tissue injury, the IFN\03B3+ are, mostly, at the periphery (blood and spleen) and play a beneficial role. In the present study, we propose that in T. cruzi infection there are glycophenotype changes in serum proteins and subpopulations of functionally segregated CD8+ T lymphocytes. C57BL/6 mice were infected with the Colombian strain of T. cruzi and analyzed for clinical changes. The glycophenotype of serum proteins was analyzed by mass spectrometry (MALDI-TOF) and glycophenotypes of the cardiac tissue and splenic cells were analyzed using a lectin-based immunohistochemistry and flow cytometry, respectively In infected mice, we did not detect changes in glycoside profile of serum proteins. In the cardiac tissue, we observed reduced staining for the lectin Peanut agglutinin (PNA), increased for Sambucus nigra (SNA) and no alterations for Maackia amurensis (MAL) in muscle and inflammatory cells. In the acute (42 dpi) and chronic (120 dpi) phases, we noticed increased frequency of PNA+ cells among CD8+CD43+ and CD4+CD43+ T cells, reduced percentage of SNA+ cells among CD8+ and CD4+ T cells and decreased proportion of MAL+ cells among CD4+ and CD8+CD4+ T cells. Total and PNA+ CD8+ T cells showed similar profiles of activation (CD44+CD62L-), migration (LFA-1+CCR5+ cells or LFA-1+CCR1+) and functionality (Pfn+, Pfn+IFN\03B3+ or IFN\03B3+). At 120 dpi, there is an enrichment in IFN\03B3+ cells among splenic CD8+PNA+. Thus, in experimental CD PNA+ CD8+T cells are activated and potentially able to migrate towards heart tissue and show inflammatory profile (IFN\03B3+); however, PNA+ cells were not detected in this tissue. It remains to be clarified whether these cells do not migrate to this tissue, accumulating in peripheral tissues, or whether they enter the cardiac tissue but have their glycophenotype modified or selectively dye. Although, our finds do not allow identifying glycosidic biomarkers of progression and/or severity of CD, they open new pathways to be explored using other experimental models of infection and studying the compartmentalizationof phenotypically and functionally distinct cells associated with detrimental or protective role in heart injury in T. cruzi infection