Orientadores: Fumio Yokoya, Wilma Aparecida Spinosa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-12T23:38:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SantosJunior_Vitoriodos_D.pdf: 1117180 bytes, checksum: 0701207136023e01100a6834c8566c3b (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: As bacterias aceticas sao utilizadas na producao de vinagre. O requerimento nutricional das bacterias aceticas e pouco conhecido e a reproducao desses microrganismos e muito dificil. Os reatores de fermentacao acetica submersa promovem condicoes de estresse fisiologico: acidez (acima de 10% p/v), teor alcoolico (2% p/v) e oxigenacao (0,4 vvm). Esses parametros sao considerados extremos e indicam a necessidade de ativacao de rotas metabolicas especificas, para a manutencao da capacidade de conversao alcool-acido acetico e divisao celular. Este estudo tem como objetivo contribuir na avaliacao qualitativa e quantitativa do efeito de minerais sobre a produtividade de acido acetico, que e definida como a porcentagem de acido acetico produzido em 24 horas. Os experimentos foram conduzidos com linhagem de Acetobacter sp., proveniente de industria produtora de vinagre. As etapas do trabalho foram: ativacao do reator com nutriente padrao; teste de efeitos dos minerais, empregando como ferramenta estatistica um delineamento fatorial incompleto (2(5-1)), isolamento e identificação dos microrganismos, utilizando provas bioquimicas classicas e analise molecular da expressao de RNA mensageiro, por meio da tecnica do DDRT/PCR, com utilizacao de primers da enzima alcool desidrogenase (ADH). Com os resultados obtidos a partir de um ensaio fatorial incompleto para a linhagem estudada, foram selecionados como minerais que aumentam a produtividade, sao eles: o ferro, o molibdenio e o manganes e, ainda, como minerais que diminuem a produtividade, o zinco e o boro. A linhagem isolada do reator apresentou todas as características bioquimicas do genero Acetobacter e a analise molecular evidenciou a expressão do gene para a enzima alcool desidrogenase em todos os experimentos / Abstract: The acetical bacteria are used in vinegar production. The nutritional requirement of acetical bacteria is poorly known, and the maintenance of these microorganisms is too difficult. The reactors of submerged acetical fermentation promote conditions of physiologic stress: acidity (up to 10% p/v), alcohol (2%p/v) and oxygenation (0,4 vvm).These parameters are considerate extremes and indicate the necessity of the activation of specifics metabolic to the maintenance of alcohol-acetic acid transformation capacity and cell division. This research has in view to contribute to the qualitatively and quantitatively evaluation of minerals effects on the productivity of acetic acid, which is defined as the acetic acid percentage produced until 24 hours. These experiments were conducted with of Acetobacter sp. strain, proceeding from vinegar industries. The work steps were: activation of the reactor with standard nutrient; minerals effects tests using the fractional factorial design (25-1) as statistic tool; isolation and identification of the microorganisms, employing classical biochemistry proofs and molecular analysis of the RNA messenger expression, through DDRT/PCR techniques, applying alcohol dehydrogenase enzyme primers. With the results obtained from the fractional factorial design for the strains studied, were selected minerals as the iron, the molybdenum and the manganese that increase productivity and, yet, minerals as zinc and boron that decrease it. The reactor isolated strain presented all biochemical characteristics of Acetobacter genus and the molecular analysis evidenced the expression of the gene for the enzyme alcohol dehidrogenase in all experiments / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-07-07Bitstream added on 2014-06-13T19:09:26Z : No. of bitstreams: 1 reis_jpz_me_arafcf.pdf: 425057 bytes, checksum: 37bfdbfbb7c3c607942b9445950e32e0 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O presente trabalho descreve e compara duas metodologias enzimáticas de dosagem de etanol (métodos UV e colorimétrico), que utilizam desidrogenase alcoólica (álcool: NAD+: oxidoredutase EC 1.1.1.1) de fermento de panificação (Mauri Brasil Ind. Comp. e Imp. Ltda), adquirida no comércio na forma desidratada. A atividade da álcool desidrogenase (ADH) presente no extrato bruto de levedura de panificação, da ordem de 5,66 U/mL, foi utilizada nos ensaios colorimétricos, enquanto que nos ensaios no ultravioleta (UV), atividades ao redor de 30 U/mL foram obtidas através da otimização das condições de extração e purificação parcial da ADH. A estabilidade da ADH foi mantida durante 2 meses, na forma liofilizada a 4oC (retenção de 96,2% de sua atividade), na presença de 1 mM de azida de sódio. A mesma preparação enzimática, reconstituída em PEG 15% e armazenada durante 12 meses em freezer (-18oC), apresentou retenção de 50% de sua atividade até 2 meses. O método ultravioleta de dosagem de etanol (detecção na faixa de 2,3 x 10-4 g/L a 6,91 x 10-3 g/L ou 5 æM a 150 æM) baseia-se na conversão enzimática do etanol a acetaldeído, através de reação de óxido-redução, tendo o NAD+ como aceptor de elétrons. O NADH formado pela reação é quantificado com leituras espectrofométricas a 340 nm, conforme descrito por Gattás (2002). Uma preparação enzimática parcialmente purificada e diluída foi utilizada na quantificação de etanol em diferentes bebidas, mostrando desvios dos teores alcoólicos de no máximo 2,1% quando comparados às especificações do produtor. O ensaio de etanol em vinho foi realizado com recuperação da ordem de 99,25% em amostra contendo, originalmente, 249,65 g/L de etanol. O método colorimétrico de dosagem de etanol (detecção na faixa de 4,6 x 10-2 g/L a 23,0 x 10-2 g/L ou 1000 æM a 5000 æM)... / The present work describes and compares two enzymatic methodology of ethanol dosage (UV and colorimetric methods), that use alcohol dehydrogenase (alcohol: NAD+: oxidoredutase EC 1.1.1.1) of baker s yeast (Mauri Brasil Ind. Comp. e Imp. Ltda) acquired in the commerce in the dry form. The activity of the alcohol dehydrogenase (ADH) at around 5.66 U/mL present in the crude extract of baker s yeast was used in the colorimetric assay, whereas activities at around of 30 U/mL were obtained through the optimization of the extraction conditions and partial purification of ADH in the ultraviolet assay (UV). The stability of liophilized ADH at 4ºC was maintained for 2 months (retention of 96.2% of activity) in the presence of 1 mM sodium azide. The same enzymatic preparation reconstituted in PEG 15% and stored for 12 months in freezer (-18ºC) presented retention of 50% of your activity up to 2 months. The ultraviolet method of ethanol dosage (detection range of 2.3 x10-4 g/L to 6.91 x 10-3 g/L or 5 æM to 150 æM) is based on the enzymatic conversion of ethanol into acetaldehyde, through oxido-reduction reaction with NAD+ as the aceptor of electrons. The NADH formed by the reaction was quantified spectrophotometrically at 340 nm, as described by Gattás (2002). A partially purified and diluted enzymatic preparation was used for ethanol quantification in different beverages, showing alcoholic contents deviations up to 2.1% when compared to the specifications of the manufacturer. The ethanol assay in wine was accomplished with a recovery at around 99.25% in sample originally containing 249.65 g/L of ethanol. The colorimetric method of ethanol dosage (detection range of 4.6 x 10-2 g/L to 23.0 x 10-2 g/L or 1000 æM to 5000 æM) uses the color reagents system MTT/PMS dissolved in saline phosphate buffer (PBS), determined spectrophotometrically at 570-655 nm... (Complete abstract, click electronic address below)

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:25:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Juliana_Severo_Castelo_Branco.pdf: 7339681 bytes, checksum: 5c86995be26b0fd8b4d1fda6177461ec (MD5) Previous issue date: 2008-10-01 / Among the cereals, wheat (Triticum aestivum L.) is the most important crop reaching the third largest grain production in the world. Wheat is cultivated under many different environmental conditions, presenting high grain yield capacity, nutritional quality and high degree of adaptability. In the State of Rio Grande do Sul, Brazil, approximately 5.4 million hectares are considered hydromorphic soils and are mostly used for rice farming and cattle grazing, due to its low drainage capability. Annually, only one million hectares are cultivated with rice, leaving large amounts of land without cropping or cultivated with forage crops. Therefore, there is a strong challenge for breeding programs to develop genotypes capable of tolerating this environment, with a satisfactory cost/benefit ratio for farmers. In order to suppress the energy deficit provoked by hypoxic conditions, several species redirect their metabolic pathways in order to garantee the extra ATP production resulting from an increase in fermentation rates. In those species, a group of proteins that cathalyse glycolisis and phosphate sugar metabolism such as the enzyme alcohol dehydrogenase (ADH), is selectively synthesized. The objective of this work was to verify the possibility of selecting wheat genotypes tolerant to flooding stress, in the greenhouse, by using different periods of flooding conditions alterned with draining periods. Also, to estimate the degree of conservation of the ADH1 gene in some plant species. The results indicate that it is possible to detect genetic variability for the character flooding tolerance in greenhouse. The condition of eight days of flooding revealed that the genotypes BRS 120 and BRS 208 were the most tolerant and the genotypes CD 111 and BRS 194 were the most sensitive. The molecular phylogenetic analysis obtained for the alcohol dehydrogenase (ADH1), indicates that Poaceae members present a high degree of conservation. The closest species were Saccharum oficinarum and Zea mays, presenting higher nucleotide identity. The model species (Oryza sativa) presented a higher dissimilarity regarding the remaining species of the Poaceae, suggesting that this enzyme has acquired novel functions and or mutations that were selected under the flooding condition. / Entre os cereais, o trigo (Triticum aestivum L.) é a mais importante cultura, alcançando a terceira maior produção de grãos no mundo sobrepujado apenas pelo milho e arroz. O trigo é cultivado sob diversas condições ambientais, apresentando alta capacidade de produção de grãos, qualidade nutricional e alto grau de adaptabilidade. No Estado do Rio Grande do Sul, aproximadamente 5,4 milhões de hectares são considerados solos hidromórficos e são principalmente utilizados para cultivo de arroz e pastagem, devido a sua baixa capacidade de drenagem. Anualmente, apenas um milhão de hectares está sendo utilizado para o cultivo de arroz, deixando grandes quantidades de terras para o cultivo de culturas forrageiras. Portanto, existe um forte desafio para programas de melhoramento no desenvolvimento de genótipos capazes de tolerar esse ambiente, com uma boa relação custo/benefício para os agricultores. A fim de suprimir o déficit energético provocado pelas condições de hipoxia, várias espécies redirecionam suas vias metabólicas, a fim de garantir a produção extra ATP resultantes do aumento das taxas de fermentação. Nessas espécies, um grupo de proteínas que catalisam a glicólise e metabolismo de açúcares, como a enzima álcool desidrogenase (ADH), é sintetizada seletivamente. O objetivo deste trabalho foi verificar a possibilidade de seleção de genótipos de trigo tolerantes ao estresse por alagamento, em casa de vegetação, utilizando diferentes períodos de alagamento intercalados com drenagem. Além disso, estimar o grau de conservação do gene ADH1 em algumas espécies de plantas. Os resultados indicam que é possível a detecção de variabilidade genética para o caráter tolerância ao alagamento em casa de vegetação. A condição de oito dias de alagamento revelou que os genótipos BRS 120 e BRS 208 foram as mais tolerantes e os genótipos CD 111 e BRS 194 foram as mais sensíveis. A análise filogenética molecular obtida para o álcool desidrogenase (ADH1), indica que os membros Poaceae apresentaram um elevado grau de conservação. As espécies mais próximas foram Saccharum oficinarum e Zea mays, apresentando maior identidade de nucleotídeos. A espécie modelo para plantas monocotiledôneas (Oryza sativa) apresenta uma maior dissimilaridade quanto ao restante das espécies de Poaceae, sugerindo que esta enzima tenha adquirido níveis de funções ou mutações que foram selecionadas sob a condição alagamento.