Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-02T18:09:44Z No. of bitstreams: 1 2009_AlineCostaSantosNunes.pdf: 1959721 bytes, checksum: 0ae5815db05bd293b0dcc2f7cd9cc248 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-03-04T00:14:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_AlineCostaSantosNunes.pdf: 1959721 bytes, checksum: 0ae5815db05bd293b0dcc2f7cd9cc248 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-04T00:14:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_AlineCostaSantosNunes.pdf: 1959721 bytes, checksum: 0ae5815db05bd293b0dcc2f7cd9cc248 (MD5) Previous issue date: 2009-04-15 / O folato é uma vitamina do complexo B, solúvel em água, formada por pterina, ácido para-aminobenzóico (pABA) e uma a oito partes de glutamato. Estudos sugerem que sua deficiência em gestantes está relacionada ao aborto espontâneo, e no feto a defeitos do tubo neural, anencefalia, anacefalia, coluna bífida, lábio leporino e síndrome de Down, e estabelece uma relação entre dietas com níveis inadequados de folato e o surgimento de defeitos congênitos, problemas para o desenvolvimento cognitivo, aumento do risco de doenças cardiovascures, esquizofrenia, mal de Alzheimer, anemia megaloblástica e depressão. A alface foi escolhida para ter o seu teor de folato aumentado por ser uma hortaliça cultivada e consumida em todo o mundo, in natura, e ter seu protocolo de transformação estabelecido. Foram modificadas duas vias metabólicas do folato: a via das pterinas e a via do pABA. Para isso dois sistemas em paralelo foram usados: um sistema mediado por Agrobacterium tumefaciens em que foi transferida a região codificante do gene GTP ciclohidrolase I (gchI), que catalisa o primeiro passo na via metabólica das pterinas. O gene do gchI foi sintetizado baseado em uma seqüência de Gallus gallus com a otimização de códons para expressão em alface, sob o controle do promotor 35S de CaMV duplicado. Na via de síntese do pABA foi usado o sistema de bombardeamento, para inserir a região codificante do gene Corismato Sintase (lecs) de tomate (Solanum lycopersicum =Lycopercicon esculentum) no genoma cloroplasmático de alface. A LeCS catalisa o primeiro passo desta via. 29 linhagens de alface contendo o transgene gchI e 4 linhagens contendo o transgene lecs foram obtidas. Plantas da geração T1 foram analisadas para quantificação de folatos totais pelo método microbiológico com Lactobacillus rhamnosus (ATCC7469). Os resultados mostram que houve um aumento de até 8,5 vezes no teor de folato em linhagens transgênicas expressando gchI e de 1,8 vezes nas linhagens transgênicas transformadas com lecs, quando comparadas com plantas não transformadas. Essas linhagens serão utilizadas em experimentos para a determinação da biodisponibilidade de folato em animais. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Folate is a complex B vitamin, water-soluble, formed by pterine, para-aminonzoic acid (pABA) and one to eight parts of glutamate. Some studies suggest that its deficiency in pregnant women is related to miscarriage, and that in the foetus it is related to defects of the neural tube, anencephalia, anacephalia, spine bifide, leporine lip and Down syndrome, and establish a relation between diets with inadequate folate levels and the appearance of congenital defects, problems in the cognitive development, increase in the risk of cardiovascular diseases, schizophrenia, Alzheimer´s disease, megaloblastic anemia and depression. The lettuce plant was chosen to have its folate level increased because it is a vegetable cultivated and consumed throughout the world, in natura, and because it has its transformation protocol established. We have transformed two metabolic ways of folate: the way of pterines and the way of pABA. For such purpose two systems have been used in parallel: a system mediated by Agrobacterium tumefaciens in which we have transfered the codifying region of the gene GTP ciclohidrolase I (gchI), which catalizes the first step in the metabolic way of the pterines. The gene of the gchI was synthetized based on a sequence of Gallus gallus with the optimization of codons for the expression in lettuce, under control of the promoter 35S dCaMV. In the way of pABA we used the bombardment system, in which we inserted the codifying region of the gene corismato sintase (lecs) of tomato (Solanum lycopersicum =Lycopercicon esculentum) in the lettuce chloroplastic genome, which catalyses the first step of this pathway. We obtained 29 lineages of lettuce containing the transgene gchI and 4 lineages containing the transgene lecs. Plants of the generation T1 were analysed for the quantification of total folates by means of the microbiological method with Lactobacillus rhamnosus (ATCC7469). The results show there has been a increase in up to 8.5 times in the folate level in transgenic lineages expressing gchI and 1.8 times in transgenic lineages transformed with lecs, when compared to non transformed plants. These lineages will be used in experiments for the determination of the bioavailability of folate in animals.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-06-21T15:26:53Z No. of bitstreams: 1 2016_GilmaRosaNascimento.pdf: 1201176 bytes, checksum: 920fba038a2fb2a978830fc21904167e (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-06-22T15:14:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_GilmaRosaNascimento.pdf: 1201176 bytes, checksum: 920fba038a2fb2a978830fc21904167e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-22T15:14:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_GilmaRosaNascimento.pdf: 1201176 bytes, checksum: 920fba038a2fb2a978830fc21904167e (MD5) / Vários cultivares de alface são exigentes quanto ao ambiente, são sensíveis à temperatura, as chuvas e ao fotoperíodo, esses fatores ambientais alteram a qualidade final do produto, inviabilizando a comercialização, por perderem vigor, turgescência, e outros fatores desejáveis para uma boa aparência. Os experimentos foram conduzidos em campo com manejo convencional e orgânico na Embrapa Hortaliças no DF para avaliar cultivares de alface dos tipos Americana (Crisphead lettuce), Angelina, Lagunna, Laurel, Lucy Brown, Silvana, Tainá, TPC 18614; do tipo crespa (Leaf lettuce), CNPH 5060, Deisy, Lavinia, Malice, Milena, Solaris, Vanda e Veneranda, em três épocas de plantio. Foram delineamentos em blocos casualizados com quatro repetições com plantios realizados com dista de aproximadamente 20 dias, no período de abril a agosto de 2015, com ciclo de 50 dias após o transplante. Época 1: semeadura 27/04/2015, transplantio 26/05/2015; época 2: semeadura 18/05/2015, transplantio 19/06/2015; época 3: semeadura 08/06/2015, transplantio 10/07/2015. A produção média de massa fresca (g/planta) dos genótipos do tipo americana, nos tipos de cultivo convencional foi de 601,10 g/planta e de 581,67g/planta no cultivo orgânico. E no tipo crespa foi de 526,84 g/planta no convencional e de 551,56 g/planta no orgânico. Considerando todos os ambientes o genótipo que mais se sobressaiu foi Tainá. Analisando numericamente os genótipos, percebe-se que o genótipo Deisy apresenta maior média. No cultivo convencional, o genótipo com maior média, considerando os valores numéricos, foi Lagunna. Já no orgânico, foi a Laurel. O teste de médias, as cultivares com valores maiores foram Laguna e Tainá, tanto no cultivo convencional quanto no orgânico. Entre os tipos de alfaces comercializados foram positivos apenas os ambientes 1 e 6, ou seja, época 1 convencional e época 3 orgânico. Já para crespa, foram positivos os ambientes 4, 5 e 6. Índices positivos são considerados favoráveis ao cultivo. Já para as condições específicas destaca Laurel para condição desfavorável e Bálsamo para condição favorável. No tipo crespa, Milena e Vanda apresentaram adaptabilidade geral. Para as condições específicas, verifica-se CNPH 5060 para condição favorável e Deisy para condição desfavorável. Nenhum dos genótipos testados apresentou comportamento ideal, nas três épocas avaliadas, segundo metodologia de Hebehart e Russel, (1966), metodologia de Cruz et al, (1989) e metodologia proposta por Carneiro (1998). Todos adquirindo bom desempenho em cultivo orgânico e convencional. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Several lettuce cultivars are demanding on the environment, are sensitive to temperature, rainfall and photoperiod, these environmental factors affect the final quality of the product, preventing the marketing, by losing force, swelling, and other desirable factors to look good. The experiments were conducted in the field of conventional and organic management at Embrapa Vegetables in Brasilia City to evaluate lettuce cultivars of American types ( Crisphead lettuce ), Angelina, Lagunna, Laurel, Lucy Brown, Silvana, Taina, TPC 18614; the crinkly type ( Leaf lettuce ), CNPH 5060, Deisy, Lavinia, Malice, Milena, Solaris, Vanda and venerable in three growing seasons. They were randomized complete block with four replications with plantations made with dista about 18 days, from April to August 2015, with a cycle of 50 days after transplantation. Season 1: sowing 27.04.2015, 05.26.2015 transplanting; time 2: sowing 05.18.2015, 19.06.2015 transplanting: time 3: sowing 08.06.2015, 10.07.2015 transplanting. The average production of fresh mass (g / plant) genotype of the American type, the types of conventional cultivation was 601.10 g / plant and 581,67g / plant in organic farming, and the curly type was 526.84 g / plant in the conventional and 551.56 g / plant in organic. Considering all environments genotype that most stood out was Taina numerically analyzing the genotypes, Deisy, genotype has a higher average. In conventional farming, the genotype with the highest average considering the numerical values was Lagunna. In the organic, it was Laurel. Considering the mean test, cultivars with higher values were Laguna and Taina, both in conventional farming as the organic. Among the types of lettuce were positive only marketed locations 1 and 6, conventional time 1 to time 3 organic. As for frizzy, it was positive environments 4, 5 and 6, positive indices are considered favorable for cultivation. As for the specific conditions highlights Laurel to unfavorable and balm favorable condition condition. In crisped type, Milena and Vanda had high adaptability. For specific conditions, CNPH 5060 appears to favorable condition and Deisy to unfavorable condition. None of the tested genotypes showed optimal behavior in the three periods evaluated, according to the methodology of Hebehart and Russell (1966 ), methodology of Cruz et a, (1989) and methodology proposed by Carneiro (1998 ). All getting good performance in organic and conventional farming.