La leptospirosis es una enfermedad zoonótica, cuyo agente etiológico es la Leptospira interrogans, que afecta tanto a animales domésticos y silvestres, como al hombre. El objetivo del presente estudio fue estimar la seroprevalencia de leptospirosis en alpacas durante la época de lluvias. Con tal propósito se analizaron mediante la prueba de microaglutinación, sueros provenientes de 344 animales del C.I.P. Quimsachata perteneciente a la E. E. ILLPA - INIA - Puno, evaluando la asociación de las variables sexo y edad con la reacción a la prueba. Del total de sueros analizados el 44,77% (154/344) fueron positivos. Los serovares detectados fueron pomona, icterohaemorrhagiae, y canicola, no encontrándose ningún reactor a hardjo. Los serovares más frecuentes fueron pomona con 43,60% (150/344), icterohaemorrhagiae con 9,88% (34/344) y canicola con 1,45% (5/344). Al evaluar la variable edad, éste se analizó relacionado con el sexo; no habiendo ningún suero positivo en los tuis; mientras que para los adultos se encontró en hembras 60,98% y machos 74,36%. Al considerar la positividad de los sueros relacionados con la variable sexo, se observa ausencia de significación estadística (p > 0.05) indicando independencia de las variables analizadas; y considerando la variable edad se observa claramente la existencia de asociación (p menor a 0,05). Los altos títulos hallados para pomona e icterohaemorrhagiae en estos animales, sugieren una fuerte infección activa durante la época de lluvia. Palabras Claves: Leptospirosis, alpacas, seroprevalencia. / --- The Leptospirosis is a zoonotic infections disease, affecting wild and domestics animals and human beings, caused by the Leptospira interrogans. The objective of this study was to estimate the prevalence of leptospirosis in the alpacas during the period of rains. With such an intention were analyzed by means of microaglutination tests, serum of 344 animals of C.I.P. Quimsachata - E.E. ILLPA - INIA - Puno, evaluating the association of the sex and age with the reaction of the test. Of the serum samples analyzed, the 44,77% (154/344) was positive. The detected serovars were pomona, icterohaemorrhagiae, and canicola, not being antibodies against hardjo. Of the 4 studied serovars, pomona showed the highest prevalence 43,60% (150/344), followed by icterohaemorrhagiae with 9,88%(34/344) and canicola with 1,45%(5/344), not finding positive samples in the young animals, whereas for the adults was 60,98 % in males and 74,36 % in females. Relating the positive serum to the sex, there exists absence of statistical significance (p> 0.05) indicating independence, and considering the age, statistical association exists (p menor a 0,05). The high titles found for pomona and icterohaemorrhagiae in these animals, suggest a strong active infection during the period of rain. Key Words: leptospirosis, alpacas, seroprevalence.

La enterotoxetemia, enfermedad nfecciosa más importante en crías de alpaca, es causante de altas tasas de mortalidad y se caracteriza por ocasionar brotes con muerte súbita sin permitir la aplicación de tratamientos convencionales. El control está supeditado a la aplicación de medidas preventivas de manejo y a la aplicación de inmunoprofilaxis. En e presente trabajo se ensayaron tres programas de vacunación anticlostridial durante las tres campañas de parición ( 2001, 2002 y 2003) en una Unidad de Producción de una Empresa de Propiedad Social del departamento de Puno. Se empleó un anacultivo a base de cepas del Clostridium perfringes predominantemente de origen ovino ( cepas A,B;C y D) más una cepa tipo A aislada de alpaca. El efecto de la vacuna se realizó comparando tasas de mortalidad total y asociada a enterotoxemia ocurrida antes de la introducción de la vacuna(año 2000) con los 3 años con programa de vacunación (años 2001, 2002 y 2003). El programa # 1 (año 2000) con los 3 años con programa de vacunación (años 2001, 2002, 2003). El programa #1 (año 2001) administró la vacuna al 100% de las madres gestantes (dos dosis).y al 100% de las crías (una dosis). El programa #2 (año 2002) vacun´solamente al 100% de las crías (dos dosis) y en el programa #3(año 2003) se procedió a vacunar solamente al 100% de las madres gestantes (una dosis). El efecto de la vacuna fue evaluado comparando los índices de mortalidad neonatal total y asociadas a enterotoxemia, básicamente relizando diagnóstico de campo. La aplicación de la vacuna redujo lamortalidad neonatal total progresivamente, desde 33.41% (año 2000), hasta alcanzar el 25.17% (año 2001), 23.72% (año 2002) y el 9.38 % (año 2003). La 19.45% (año 2000) hasta 7.18%, 9.1% y 0.98% para los años vacunados (2001, 2002 y 2003). Comparando los diferentes programas de vacunación, el análisis de diferencia estadística de proporciones determinó que el anacultivo (vacuna) fue de progrma aplicado. Sin embargo, la reducción fue más palpable en aquellos programas que involucraron vacunar madres gestantes. / Enterotoxemia, the most mportant infectious disease in alpacas juvenile, is the cause og high mortaly and to present outbreaks with suden death that does not allow the application of conventional treatments. Cntrol depends on preventive handlng measures and the application of inmunoprofilaxis. The present work applied three programs of anticlostridial vaccnation during three campaigns of birth (2001, 2002 and 2003) in a Social propriety Enterprise´s Unite ofProduction in Puno. We employed an anacultivo with strains of Clostridium perfringens predominantly of ovine origin and a strain type A isolated enterotoxemia Mortality that occurred before the introduction of the vaccine (year 2000) with the three years with program of vaccination ( years 2001, 2002 AND 2003). In program #1 (year 2001) the vaccine was administered to 100# of pregnant mothers( two juveniles were vaccinated (100%) (two doss) and n program #3 (year 2003) only pregnant mothers were vaccinated (100%) ( a dose vaccinated). The application of the vaccine equally reduced the tital neonatal mortality associated with enterotoxemia from 19,45% (year 2000) to 25.17 % (year 2001), 23.72% (year 2002) and 9.38% (year 2003). The vaccine equally reduced the mortality associated wirh enterotoxemia from 19.45%(year 2000) to 7.18% ,9,1% and 0,98% in the years in wich vaccination was given (2001, 2002and 2003). Comparng the different programs of vaccination, the anlysis of statistical difference of proportions detrmined that the anaculativo (vaccine) was wffective for the control of enterotoxemia in alpacas independently of the type of application program. Nevertheless, the reduction in mortality was greater in the programs that involved vaccinating pregnant mothers.

La leptospirosis es una enfermedad zoonótica, cuyo agente etiológico es la Leptospira interrogans, que afecta tanto a animales domésticos y silvestres, como al hombre. El objetivo del presente estudio fue estimar la seroprevalencia de leptospirosis en alpacas durante la época de lluvias. Con tal propósito se analizaron mediante la prueba de microaglutinación, sueros provenientes de 344 animales del C.I.P. Quimsachata perteneciente a la E. E. ILLPA - INIA - Puno, evaluando la asociación de las variables sexo y edad con la reacción a la prueba. Del total de sueros analizados el 44,77% (154/344) fueron positivos. Los serovares detectados fueron pomona, icterohaemorrhagiae, y canicola, no encontrándose ningún reactor a hardjo. Los serovares más frecuentes fueron pomona con 43,60% (150/344), icterohaemorrhagiae con 9,88% (34/344) y canicola con 1,45% (5/344). Al evaluar la variable edad, éste se analizó relacionado con el sexo; no habiendo ningún suero positivo en los tuis; mientras que para los adultos se encontró en hembras 60,98% y machos 74,36%. Al considerar la positividad de los sueros relacionados con la variable sexo, se observa ausencia de significación estadística (p > 0.05) indicando independencia de las variables analizadas; y considerando la variable edad se observa claramente la existencia de asociación (p menor a 0,05). Los altos títulos hallados para pomona e icterohaemorrhagiae en estos animales, sugieren una fuerte infección activa durante la época de lluvia. Palabras Claves: Leptospirosis, alpacas, seroprevalencia. / The Leptospirosis is a zoonotic infections disease, affecting wild and domestics animals and human beings, caused by the Leptospira interrogans. The objective of this study was to estimate the prevalence of leptospirosis in the alpacas during the period of rains. With such an intention were analyzed by means of microaglutination tests, serum of 344 animals of C.I.P. Quimsachata - E.E. ILLPA - INIA - Puno, evaluating the association of the sex and age with the reaction of the test. Of the serum samples analyzed, the 44,77% (154/344) was positive. The detected serovars were pomona, icterohaemorrhagiae, and canicola, not being antibodies against hardjo. Of the 4 studied serovars, pomona showed the highest prevalence 43,60% (150/344), followed by icterohaemorrhagiae with 9,88%(34/344) and canicola with 1,45%(5/344), not finding positive samples in the young animals, whereas for the adults was 60,98 % in males and 74,36 % in females. Relating the positive serum to the sex, there exists absence of statistical significance (p> 0.05) indicating independence, and considering the age, statistical association exists (p menor a 0,05). The high titles found for pomona and icterohaemorrhagiae in these animals, suggest a strong active infection during the period of rain. Key Words: leptospirosis, alpacas, seroprevalence.

La enterotoxetemia, enfermedad nfecciosa más importante en crías de alpaca, es causante de altas tasas de mortalidad y se caracteriza por ocasionar brotes con muerte súbita sin permitir la aplicación de tratamientos convencionales. El control está supeditado a la aplicación de medidas preventivas de manejo y a la aplicación de inmunoprofilaxis. En e presente trabajo se ensayaron tres programas de vacunación anticlostridial durante las tres campañas de parición ( 2001, 2002 y 2003) en una Unidad de Producción de una Empresa de Propiedad Social del departamento de Puno. Se empleó un anacultivo a base de cepas del Clostridium perfringes predominantemente de origen ovino ( cepas A,B;C y D) más una cepa tipo A aislada de alpaca. El efecto de la vacuna se realizó comparando tasas de mortalidad total y asociada a enterotoxemia ocurrida antes de la introducción de la vacuna(año 2000) con los 3 años con programa de vacunación (años 2001, 2002 y 2003). El programa # 1 (año 2000) con los 3 años con programa de vacunación (años 2001, 2002, 2003). El programa #1 (año 2001) administró la vacuna al 100% de las madres gestantes (dos dosis).y al 100% de las crías (una dosis). El programa #2 (año 2002) vacun´solamente al 100% de las crías (dos dosis) y en el programa #3(año 2003) se procedió a vacunar solamente al 100% de las madres gestantes (una dosis). El efecto de la vacuna fue evaluado comparando los índices de mortalidad neonatal total y asociadas a enterotoxemia, básicamente relizando diagnóstico de campo. La aplicación de la vacuna redujo lamortalidad neonatal total progresivamente, desde 33.41% (año 2000), hasta alcanzar el 25.17% (año 2001), 23.72% (año 2002) y el 9.38 % (año 2003). La 19.45% (año 2000) hasta 7.18%, 9.1% y 0.98% para los años vacunados (2001, 2002 y 2003). Comparando los diferentes programas de vacunación, el análisis de diferencia estadística de proporciones determinó que el anacultivo (vacuna) fue de progrma aplicado. Sin embargo, la reducción fue más palpable en aquellos programas que involucraron vacunar madres gestantes. / Enterotoxemia, the most mportant infectious disease in alpacas juvenile, is the cause og high mortaly and to present outbreaks with suden death that does not allow the application of conventional treatments. Cntrol depends on preventive handlng measures and the application of inmunoprofilaxis. The present work applied three programs of anticlostridial vaccnation during three campaigns of birth (2001, 2002 and 2003) in a Social propriety Enterprise´s Unite ofProduction in Puno. We employed an anacultivo with strains of Clostridium perfringens predominantly of ovine origin and a strain type A isolated enterotoxemia Mortality that occurred before the introduction of the vaccine (year 2000) with the three years with program of vaccination ( years 2001, 2002 AND 2003). In program #1 (year 2001) the vaccine was administered to 100# of pregnant mothers( two juveniles were vaccinated (100%) (two doss) and n program #3 (year 2003) only pregnant mothers were vaccinated (100%) ( a dose vaccinated). The application of the vaccine equally reduced the tital neonatal mortality associated with enterotoxemia from 19,45% (year 2000) to 25.17 % (year 2001), 23.72% (year 2002) and 9.38% (year 2003). The vaccine equally reduced the mortality associated wirh enterotoxemia from 19.45%(year 2000) to 7.18% ,9,1% and 0,98% in the years in wich vaccination was given (2001, 2002and 2003). Comparng the different programs of vaccination, the anlysis of statistical difference of proportions detrmined that the anaculativo (vaccine) was wffective for the control of enterotoxemia in alpacas independently of the type of application program. Nevertheless, the reduction in mortality was greater in the programs that involved vaccinating pregnant mothers. / Tesis

Las neumonías son la segunda causa de mortalidad en crías de alpacas, esta es causada por agentes virales y bacterianos que coexisten en los procesos infecciosos generando cuadros de neumonías agudas. Pasteurella multocida es la principal bacteria involucrada en las infecciones neumónicas en alpacas, seguida de Mannhemia haemolytica, ambos agentes generan cuadros hiperagudos en crías en época de parición, y afectando a crías más grandes en épocas de estrés. Sin embargo se ha demostrado su asociación con la presencia de virus neumopatógenos como BRSV. Los receptores tipo Toll (TLR, por sus siglas en inglés) son proteínas transmembrana que se encuentran en diversos tipos celulares. Los genes que codifican esta proteína están altamente conservados a lo largo de las diferentes especies, siendo el TLR4 la proteína que reconoce al LPS, estructura que poseen todas las bacterias gram negativas (Pasteurella multocida y Mannhemia haemolytica) y a la proteína F del BRSV. En alpacas no se ha identificado la presencia de este gen, por lo que en el estudio se diseñaron cebadores para poder identificar la presencia del gen en esta especie. Al obtener la secuencia del gen en alpacas permitió analizar y comparar las secuencias obtenidas entre individuos y entre especies, observando el alto grado de conservación de la secuencia del gen tlr4 entre especies. No se logró detectar polimorfismos tipo SNP entre animales enfermos y sanos, pero se pudo determinar SNP en individuos mostrando genotipos GT y GC. Palabras Clave: alpacas, neumonías, Pasteurella multocida, Mannhemia haemolytica, BRSV, tlr4, polimorfismos. / --- Pneumonias are the second leading cause of mortality of babies’ alpacas; this is caused by viral and bacterial agents that coexist in infectious processes causing acute pneumonia. Pasteurella multocida is the main bacteria involved in pneumonia infections in alpacas, followed by Mannhemia haemolytica, both agents in hyperacute cases generate death of offspring during calving season and stressful times. However this association has the participation of differences virus likes BRSV. Toll-like receptors (TLR) are transmembrane proteins found in various cell types. The genes encoding this protein are highly conserved across different species. The protein TLR4 recognizes LPS, a structure which have all gram-negative bacteria (Pasteurella multocida and Mannhemia haemolytica) and the F protein of BRSV. In alpacas has not identified the presence of this gene, so that the study primers were designed to identify the presence of the gene in this species. We had obtained the sequence of the gene in alpacas allowed analyzing and comparing the sequences obtained between individuals and between species, noting the high degree of conservation of TLR4gene sequence between species. We could not to detect polymorphisms sort of SNP between sick and healthy animals, but we were able to determine SNP genotypes in individuals showing GT and GC. Key Words: alpacas, pneumonia, Pasteurella multocida, Mannhemia haemolytica, BRSV, tlr4, polymorphism.

Caracteriza molecularmente 24 aislados de P. multocida provenientes de alpacas con neumonía, identificados por pruebas bioquímicas y mediante la prueba de PCR a travez de la amplificando del gen kmt1 presente solo en esta especie. Posteriormente se realizó la tipificación capsular mediante la técnica de PCR múltiple obteniéndose que todos los aislados pertenecen al tipo capsular A. La tipificación en base al antígeno LPS, el cual permite la clasificación de P. multocida en 16 serovares agrupados en 8 genotipos, resultó en que los aislados de este estudio pertenecieron al genotipo LPS L6, correspondiente a los serovares 10, 11, 12 y 15. Además, se analizó la presencia de 4 genes codificantes de factores de virulencia (toxA, tbpA, pfhA y hgbB), detectándose en todos los aislados los genes toxA (100%) y tbpA (100%). Para evaluar la diversidad entre los aislados, se emplearon las técnicas BOX-PCR y ERIC-PCR, los cuales fueron analizados por el programa NTSYSpc 2.10 para el desarrollo de los dendogramas mostrando baja diversad entre los aislados de alpaca, corroborado por el agrupamiento de 23/24 aislados en un único cluster.

La enterotoxemia, causada por el Clostridium perfringens, es la enfermedad infecciosa más importante que afecta a las alpacas, debido a que ocasiona elevadas tasas de mortalidad neonatal de hasta 70%. Recientes estudios han sugerido la participación de la Cp-PLC (C. perfringens fosfolipasa C) como factor de virulencia responsable del cuadro enterotoxemico en alpacas y otras especies domesticas. El presente estudio evaluó las características toxigénicas de la Cp-PLC y de sobrenadantes de diferentes aislados de C. perfringens obtenidos de casos de enterotoxemia en alpacas relacionándolos con sus niveles de producción de Cp-PLC. El protocolo de purificación de Cp-PLC mostró ser exitoso, mostrando su comportamiento como una enterotoxina incapaz de generar lesiones entéricas. Asimismo, los aislados de C. perfringens analizados evidenciaron distintas características toxigénicas independientes de la presencia de Cp-PLC. Al parecer, la Cp-PLC no seria un factor esencial del C. perfringens en la producción de lesiones entéricas en casos de enterotoxemias en alpacas. Palabras Claves: Cp-PLC, Clostridium perfringens, enterotoxigenico / --- Enterotoxemia caused by Clostridium perfringens, causes a mortality neonatal rate up to 70%, this is why it is considered as the most important infections disease. Recent studies has suggested that Cp-PLC (Clostridium perfringens phospholipase C) is a main virulence factor responsible of the enterotoxemic lesions found in alpacas and other domestic animals. This study evaluated the toxigenic characteristics of Cp-PLC and of supercultures of C. perfringens isolates from enterotoxemia in alpacas associated with their levels of Cp-PLC production. The Cp-PLC purification protocol used was successful, showing that Cp-PLC as an enterotoxin enteric unable to cause injury. Similarly, C. perfringens isolates analyzed showed different toxigenic characteristics independently of the Cp-PLC production. Apparently, Cp-PLC does not be a essential factor from C. perfringens in the production of enteric lesions in cases of enterotoxemia in alpacas. Key Word: Cp-PLC, Clostridium perfringens, enterotoxigenic.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Compara los genomas de las cepas que infectan bovinos y alpacas (36950 y UNMSM, respectivamente) para conocer la genómica estructural de la cepa aislada de alpacas y dilucidar qué proteínas podrían estar relacionadas en la patogénesis en ambos hospederos (bovinos y alpacas). Por ello se secuencia el genoma de P. multocida que infecta alpaca; se realiza el análisis genómico estructural y funcional y posteriormente el análisis comparativo con P. multocida 36950. / Tesis

La enterotoxemia, causada por el Clostridium perfringens, es la enfermedad infecciosa más importante que afecta a las alpacas, debido a que ocasiona elevadas tasas de mortalidad neonatal de hasta 70%. Recientes estudios han sugerido la participación de la Cp-PLC (C. perfringens fosfolipasa C) como factor de virulencia responsable del cuadro enterotoxemico en alpacas y otras especies domesticas. El presente estudio evaluó las características toxigénicas de la Cp-PLC y de sobrenadantes de diferentes aislados de C. perfringens obtenidos de casos de enterotoxemia en alpacas relacionándolos con sus niveles de producción de Cp-PLC. El protocolo de purificación de Cp-PLC mostró ser exitoso, mostrando su comportamiento como una enterotoxina incapaz de generar lesiones entéricas. Asimismo, los aislados de C. perfringens analizados evidenciaron distintas características toxigénicas independientes de la presencia de Cp-PLC. Al parecer, la Cp-PLC no seria un factor esencial del C. perfringens en la producción de lesiones entéricas en casos de enterotoxemias en alpacas. Palabras Claves: Cp-PLC, Clostridium perfringens, enterotoxigenico / Enterotoxemia caused by Clostridium perfringens, causes a mortality neonatal rate up to 70%, this is why it is considered as the most important infections disease. Recent studies has suggested that Cp-PLC (Clostridium perfringens phospholipase C) is a main virulence factor responsible of the enterotoxemic lesions found in alpacas and other domestic animals. This study evaluated the toxigenic characteristics of Cp-PLC and of supercultures of C. perfringens isolates from enterotoxemia in alpacas associated with their levels of Cp-PLC production. The Cp-PLC purification protocol used was successful, showing that Cp-PLC as an enterotoxin enteric unable to cause injury. Similarly, C. perfringens isolates analyzed showed different toxigenic characteristics independently of the Cp-PLC production. Apparently, Cp-PLC does not be a essential factor from C. perfringens in the production of enteric lesions in cases of enterotoxemia in alpacas. Key Word: Cp-PLC, Clostridium perfringens, enterotoxigenic.

Busca determinar el perfil inmunogénico Th1 y Th2 de una proteína de membrana externa P6-like recombinante de P. multocida aislada de casos neumónicos fatales en alpacas obtenida mediante tecnología recombinante, donde fue seleccionada la proteína in silico, clonada, expresada y purificada, para luego ser enfrentados con PBMC de alpaca en una concentración de 10ηg por cultivo. Estos cultivos fueron colocados a 38°C durante las 3, 6, 9, 12, 18, 24, 48 y 72 horas. Posteriormente se extrajeron el ARNm de cada cultivo y mediante la prueba de RT-PCR en Tiempo Real se observaron los niveles de expresión de citoquinas de perfil Th1 y Th2. Este estudio tiene como objetivo observar el perfil citocínico que estimula la P6-Like recombinante. Esta evaluación in vitro forma parte de la elaboración de una vacuna de última generación para la prevención de neumonías pasteurelósicas en crías de alpacas. / Tesis