Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-21Bitstream added on 2014-06-13T18:38:49Z : No. of bitstreams: 1 ruy_mrs_me_araiq.pdf: 774298 bytes, checksum: f4cf28b55c14f53039b0a2672cb4fbf9 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho propõe um método analítico simples, rápido e de baixo custo para screening (qualitativo/semi-quantitativo) de sulfonamidas em amostras complexas, tais como leite bovino e urina. Para o screening de sulfonamidas em urina e leite bovino foi empregado um procedimento de análise por injeção em fluxo em meio micelar com detecção espectrofotométrica (λ = 555 nm), o qual está baseado na reação entre sulfonamidas e p-dimetilaminocinamaldeído em meio ácido. O uso de meio micelar conferiu ao método grande sensibilidade analítica possibilitando sua aplicação no screening dos analitos alvos de acordo com o valor de limite máximo de resíduo permitido (LMRsulfonamidas = 100 ppb). As condições experimentais para o desenvolvimento do método proposto foram otimizadas com auxílio de planejamento de experimentos. Para validação do método desenvolvido foram avaliados os seguintes parâmetros: exatidão, precisão, limite de detecção (LOD = 3 SDBranco / inclinação da curva analítica), limite de quantificação (LOQ = 10 SDBranco / inclinação da curva analítica) e robustez. O método desenvolvido foi aplicado na análise de sulfonamidas em leite bovino, empregando-se no pré-tratamento das amostras a metodologia QuEChERS. Uma outra aplicação realizada foi a determinação de sulfonamidas em amostras de urina sintética após prévia hidrólise da uréia (interferente) na qual uma leguminosa foi usada como fonte da enzima urease. Em ambas as aplicações, os resultados obtidos foram satisfatórios. O método desenvolvido representa uma alternativa vantajosa em relação a outros métodos disponíveis, pois apresenta baixo custo relativo, além de ser simples, rápido, ambientalmente mais amigável (envolve o baixo consumo de reagentes e amostras) e não requerer procedimentos específicos ou complicados para o preparo das amostras / This work proposes a simple, fast and low cost analytical method for the screening (qualitative / quantitative) of sulfonamides in complex samples, such as urine and bovine milk. The screening of sulfonamides in those samples was proceeded by flow injection analysis in, micellar medium, with spectrophotometric detection (λ = 555 nm). The method is based on the reaction between sulfonamide and p- dimethylaminocinnamaldehyde in acidic medium. The use of micellar media increased the sensitivity of the analytical method allowing its application in the screening of target analytes according to the permitted value of maximum residue level (LMRsulfonamides = 100 ppb). Experimental design methodologies were used to optimize the proposed method. The following parameters were assessed in order to validate the method: accuracy, precision, limit of detection (LOD = 3 SD Blank / inclination of the analytical curve), limit of quantification (LOQ = 10 SD Blank / inclination of the analytical curve) and robustness. The method was applied to the analysis of sulfonamides in bovine milk. Pre-treatment of samples was proceeded by QuEChERS methodology. The method was also applied to the determination of sulfonamides in samples of synthetic urine after previous hydrolysis of urea (interferent); a legume was used as the source of the enzyme urease. In both applications, the results were satisfactory. The method represents an advantageous alternative over other available methods, since it has relatively low cost, besides being simple, rapid, environmentally friendly (it involves a low consumption of reagents and samples) and does not require specific or complicated procedures to prepare the samples

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-25Bitstream added on 2014-06-13T20:59:13Z : No. of bitstreams: 1 zamariola_n_me_araiq_parcial.pdf: 202304 bytes, checksum: baf1ade8777cf9a8c8c71cec7991c0da (MD5) Bitstreams deleted on 2015-02-04T11:39:23Z: zamariola_n_me_araiq_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-02-04T11:40:10Z : No. of bitstreams: 1 000691562.pdf: 2454617 bytes, checksum: 52dd8fbd4c9505bde0982bd8ee28522f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os pesticidas, quando utilizados de forma adequada, protegem as culturas agrícolas contra danos excessivos causados por pragas e doenças. No entanto, segundo a ANVISA, aproximadamente 29% dos alimentos hortifrutícolas consumidos pela população brasileira apresenta alguma irregularidade quanto aos níveis de resíduos de pesticidas, indicando um uso abusivo e indiscriminado. Tendo em vista a preocupação com a saúde humana, foi proposto um estudo com animais de experimentação (ratos Lewis, Wistar e Sprague-Dawley) para avaliar os efeitos da exposição a misturas de pesticidas em baixas doses, simulando o que ocorre com humanos. Para isso foram escolhidos os pesticidas dicofol, dieldrin, endossulfam e permetrina, que foram encontrados em amostras de alimentos de origem vegetal, coletadas em diversas regiões do país pelo Programa de Análise de Resíduos de Agrotóxicos em Alimentos (PARA) da ANVISA. Dentre os efeitos estudados está a alteração endócrina em fêmeas, que pode afetar o sistema reprodutivo, e como estas moléculas apresentam bioacumulação, o tecido alvo é o adiposo. Considerando-se as baixas concentrações previstas para os analitos, a complexidade da matriz (45% de lipídios) e a pequena massa de amostra disponível (cerca de 2 g por animal), houve a necessidade de desenvolver um método que apresentasse confiabilidade para aplicação a este estudo. O método desenvolvido para extração dos analitos é uma modificação do método QuEChERS. O método consiste basicamente de extração com acetonitrila e posterior extração em fase sólida dispersiva (d-SPE) com PSA e C18. Na avaliação da confiabilidade analítica do método foram incluídos os seguintes parâmetros: seletividade, linearidade, sensibilidade limite de detecção, limite de quantificação, exatidão, precisão e efeito matriz. Todas as amostras... / Os pesticidas, quando utilizados de forma adequada, protegem as culturas agrícolas contra danos excessivos causados por pragas e doenças. No entanto, segundo a ANVISA, aproximadamente 29% dos alimentos hortifrutícolas consumidos pela população brasileira apresenta alguma irregularidade quanto aos níveis de resíduos de pesticidas, indicando um uso abusivo e indiscriminado. Tendo em vista a preocupação com a saúde humana, foi proposto um estudo com animais de experimentação (ratos Lewis, Wistar e Sprague-Dawley) para avaliar os efeitos da exposição a misturas de pesticidas em baixas doses, simulando o que ocorre com humanos. Para isso foram escolhidos os pesticidas dicofol, dieldrin, endossulfam e permetrina, que foram encontrados em amostras de alimentos de origem vegetal, coletadas em diversas regiões do país pelo Programa de Análise de Resíduos de Agrotóxicos em Alimentos (PARA) da ANVISA. Dentre os efeitos estudados está a alteração endócrina em fêmeas, que pode afetar o sistema reprodutivo, e como estas moléculas apresentam bioacumulação, o tecido alvo é o adiposo. Considerando-se as baixas concentrações previstas para os analitos, a complexidade da matriz (45% de lipídios) e a pequena massa de amostra disponível (cerca de 2 g por animal), houve a necessidade de desenvolver um método que apresentasse confiabilidade para aplicação a este estudo. O método desenvolvido para extração dos analitos é uma modificação do método QuEChERS. O método consiste basicamente de extração com acetonitrila e posterior extração em fase sólida dispersiva (d-SPE) com PSA e C18. Na avaliação da confiabilidade analítica do método foram incluídos os seguintes parâmetros: seletividade, linearidade, sensibilidade limite de detecção, limite de quantificação, exatidão, precisão e efeito matriz. Todas as amostras... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-01Bitstream added on 2014-06-13T19:17:21Z : No. of bitstreams: 1 caetano_lg_me_araiq.pdf: 535139 bytes, checksum: dfa523aa2ad66ac5d94e1130451f59ff (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A crise global de 1970 desencadeou a sensibilização dos muitos países da sua vulnerabilidade à escassez de petróleo, alertando-os a busca outras fontes de energia. Surgiu então no Brasil em 1975, o Programa Nacional do Álcool (Proálcool), que diversificou a atuação da indústria açucareira e possibilitou a ampliação da plantação cana-de-açúcar e a implantação de destilarias de álcool. Uma grande vantagem da utilização do etanol como fonte de energia renovável é a vasta opção de matérias primas para a obtenção do mesmo, onde pode ser proveniente da cana de açúcar, de outros vegetais ricos em açúcar, ricos em amido, ou até mesmo de celulose, como madeira – principalmente dos eucaliptos. Além do foco ambiental, o etanol provoca em países como o Brasil, impactos econômico-sociais de primeira grandeza. Diante da importância do etanol como biocombustível no mundo, tem-se a necessidade de implementação de uma regulamentação mais rigorosa que atenda as especificações do mercado mundial. Sabendo-se da presença do acetato de etila neste combustível como contaminante e considerando-se que o método oficial para determinação do mesmo é bastante dispendioso, neste trabalho desenvolveu-se um método de determinação rápido, sensível e não dispendioso, utilizando sensores para determinação de acetato de etila em álcool combustível hidratado (ACH). Os sensores serão preparados com a deposição de um filme de Nafion® modificado com ferro sobre a superfície de um eletrodo de carbono vítreo. Os íons Fe3+ do filme de Nafion® complexaram com o ácido acetohidroxâmico, proveniente do acetato de etila. Estudou-se as técnicas de voltametria cíclica, de varredura linear, onda quadrada e de pulso diferencial para a aplicação do EQM. A técnica de... / A crise global de 1970 desencadeou a sensibilização dos muitos países da sua vulnerabilidade à escassez de petróleo, alertando-os a busca outras fontes de energia. Surgiu então no Brasil em 1975, o Programa Nacional do Álcool (Proálcool), que diversificou a atuação da indústria açucareira e possibilitou a ampliação da plantação cana-de-açúcar e a implantação de destilarias de álcool. Uma grande vantagem da utilização do etanol como fonte de energia renovável é a vasta opção de matérias primas para a obtenção do mesmo, onde pode ser proveniente da cana de açúcar, de outros vegetais ricos em açúcar, ricos em amido, ou até mesmo de celulose, como madeira – principalmente dos eucaliptos. Além do foco ambiental, o etanol provoca em países como o Brasil, impactos econômico-sociais de primeira grandeza. Diante da importância do etanol como biocombustível no mundo, tem-se a necessidade de implementação de uma regulamentação mais rigorosa que atenda as especificações do mercado mundial. Sabendo-se da presença do acetato de etila neste combustível como contaminante e considerando-se que o método oficial para determinação do mesmo é bastante dispendioso, neste trabalho desenvolveu-se um método de determinação rápido, sensível e não dispendioso, utilizando sensores para determinação de acetato de etila em álcool combustível hidratado (ACH). Os sensores serão preparados com a deposição de um filme de Nafion® modificado com ferro sobre a superfície de um eletrodo de carbono vítreo. Os íons Fe3+ do filme de Nafion® complexaram com o ácido acetohidroxâmico, proveniente do acetato de etila. Estudou-se as técnicas de voltametria cíclica, de varredura linear, onda quadrada e de pulso diferencial para a aplicação do EQM. A técnica de voltametria de onda quadrada foi a... (Complete abstract click electronic access below)

Estudou-se o comportamento de íons de cobre (II) em soluções de tiocianato de sódio por via espectrofotométrica e polarográfica. O estudo espectrofotométrico em força iônica 2,0M, a 25°C, levou a determinação da constante de formação da primeira espécie, Cu SCN+, com máximo de absorção a 342 nm, sendo β1 = 56 M-1 e ε1,max = 495?.mol-1 cm-1. Tentativas de estudar a formação sucessiva dos outros três complexos não levaram a resultado satisfatório devido à instabilidade de cor do sistema cobre(II/SCN-. Extenso estudo levou ao esclarecimento do comportamento polarográfico do cobre (II) em tiocianato, onde havia sérias discordâncias na literatura. Comprovou-se que parte do cobre (II) oxida o ligante, passando a cobre (I), havendo formação de SO=4 e HCN. Há três ondas polarográficas: a primeira, catódica, mas sem descontinuidade com o componente anódico de dissolução de mercúrio pelo eletrólito suporte, devido ao cobre (II) remanescente; a segunda trata da redução do cobre (I) ao amálgama de cobre; a terceira é a onda de redução dos íons de hidrogenia liberados pela oxidação do ligante. Fizeram-se estudos de medidas de potencial no sistema (SCN)2/SCN- com tiocianogênio gerado coulometricamente, ou por agentes químicos oxidantes. Novas perspectivas de trabalho são discutidas. Polarogramas no sistema cobre(I)/SCN-, em força iônica 4,0M, a 25°C, levaram ao primeiro estudo completo de equilíbrio do sistema, caracterizado pelas seguintes constantes de equilíbrio: (Ver no arquivo em PDF) Para o cobre (II) foi estimado o seguinte valor de constante: (Ver no arquivo em PDF) / The behavior of copper (II) in sodium thiocyanate solutions was examined by polarography and spectrophotometry. The spectrophotometric study performed in an ionic strength 2.0M at 25°C, lead to the determination of the formation constant β1 = 56 M-1, referred to Cu SCN+ specie. Its absorption maximum is 342 nm and ε1,max = 495?.mol-1 cm-1. Attempts to study the formation of the others successive complexes were unsuccess full due to color instability in the copper(II)/SCN system. Extensive study lead to the elucidation of the polarographic behavior of copper (II) in thiocyanate supporting electrolite. Severe disagreement was found in the literature about this subject. It has been found that copper (II) oxidises partially the ligand to SO=4 and HCN, with partial formation of copper (I). Three waves were well characterized: the first one is cathodic, but with no discontinuity with the anodic wave of mercury dissolution by thiocyanate, resulting from the presente of the remaining copper (II); the second one is referred to the reduction of copper (I) to copper a malgam; the third wave in the reduction of hydrogen ion released during the oxidation of the ligande. Potential measurement were carried out in the (SCN)2/SCN- system, with thiocyanogen generated by coulometry, or by the action of chemical oxidising agents. New prospects and ideas to be worked were discussed. Polarograms from the copper(I)/SCN- system, were obtained in 4,0M ionic strength and 25°C. They lead to the first complete equilibrium study of this system, with the determination of the following equilibrium constants: (See in PDF file) With regard to copper (II) the foliowing formation constant was estimated: (See in PDF file)

Ce travail décrit la mise au point de onze nouvelles méthodes analytiques répondant aux exigences règlementaires REACh et à la protection des consommateurs. La première méthode permet de doser des substances dangereuses dans l’eau (RSDE) et en milieu polaire. Un protocole d’extraction unique du milieu aqueux qui permet de doser 75 substances prioritaires dans les eaux douces et résiduaires. Six méthodes instrumentales différentes sur des appareils aux caractéristiques diverses ont été associées pour obtenir des résultats beaucoup plus précis que ce qui se faisait auparavant et près des deux tiers des substances du groupe RSDE ont été analysées pour la première fois. Toutes les limites de quantification sont conformes aux exigences de la Directive Cadre Eaux ou d'autres normes Européennes. L'une des six méthodes permet d'établir précisément l’indice d’hydro– carbures volatils dans les eaux. Ce calcul n’était pas possible au laboratoire auparavant. Il s'appuie sur la méthode par espace de tête statique couplée à une analyse GC-FID/MS . La limite de quantification à 30 μg/L remplit facilement les exigences des normes françaises et européennes. Une autre nouvelle méthode analyse les résidus médicamenteux dans les eaux. Un couplage LCMS/ MS a été initié et une grande partie du travail de développement a été réalisé sans permettre une finalisation complète de la méthode en termes de fiabilité et robustesse. La septième méthode s'intéresse à 27 substances préoccupantes issues de l’annexe XIV de REACh qui peuvent maintenant être quantifiées de façon robuste et fiable et aux teneurs réglementaires de 0,1% en masse, soit 1000 mg/kg ou moins, par couplage de la GC à la spectrométrie de masse (MS). C'est encore la technique GC qui a été mise en oeuvre pour quantifier les composés organiques volatils (COV) dans les cuirs et les textiles. Certains de ces COV figurent dans le règlement REACh ou dans la norme sur la sécurité des jouets. La méthode originale développée couple la technique d’introduction des composés dite espace de tête ou headspace (HS) en anglais à un appareil HS-GC couplé à la MS. 28 molécules volatiles membres des COV préoccupants peuvent être quantifiées à 2,5 mg/kg. La chromatographie en phase liquide (HPLC) est utilisée pour les neuf et dixième méthodes mises au point. L'une traite des retardateurs de flamme phosphatés analysables dans les cuirs et textiles. Neuf de ces composés sont maintenant analysable par le laboratoire par HPLC-MS /MS avec validation avec une limite de quantification à 5 mg/kg, exception faite de l’oxyde de triaziridinyl phosphine (TEPA) dans le cuir. L'autre méthode est une amélioration d’une méthode existante HPLC-DAD pour la détermination des agents de conservation biocides dans le cuir. La récente technique UHPLC-DAD a permis une analyse de qualité équivalente dans un temps réduit trois fois et utilisant beaucoup moins de solvants. La limite de quantification associée est conforme : à 20 mg/kg pour les quatre biocides étudiés. La onzième et dernière méthode développée permet de déterminer des polluants halogénes par GC-MS/MS / Pas de résumé anglais

<p> Cytochrome P450s (P450s) are a superfamily of enzymes that catalyze oxidation of unactivated hydrocarbons. However, the means by which P450s control (1) regioselectivity of their activity and (2) specificity in their molecular recognition remain largely elusive. Toward investigation of the role of dynamics in the regioselectivity of the archetypal cytochrome P450cam (P450cam), two-dimensional infrared spectroscopy has been applied with heme-bound carbon monoxide (CO) as an infrared probe of the active site. The data support a model for P450cam regioselectivity in which binding of different substrates to P450cam variably stabilizes the active site into two distinct states, each associated with different dynamics linked to different levels of regioselectivity. To investigate the role of conformational heterogeneity in P450cam substrate specificity, infrared spectoscopy was combined with the site-specific incorporation of nitrile probes at distinct P450cam microenvironments. This approach enabled differentiation of changes experienced at each of those environments when <i> d</i>-camphor and/or CO binds to the active site. Finally, the impact of conformational heterogeneity on the affinity of substrate molecular recognition by wild-type and mutant P450cam was evaluated using both CO and nitrile probes. This study suggests that the nature of the conformations populated in the unbound states influences the affinity for different substrates. Collectively, these studies provide new insight into the roles of conformational heterogeneity and dynamics in P450cam activity. Furthermore, these studies help to lay the foundation for efforts toward understanding the roles of conformational heterogeneity and dynamics in the function of human P450s, for which unraveling the mechanisms involved in Phase I metabolism is a topic of great pharmacological concern. </p><p>

The analysis of white latex paint is a problem for forensic laboratories because of difficulty in differentiation between samples. Current methods provide limited information that is not suitable for discrimination. Elemental analysis of white latex paints has resulted in 99% discriminating power when using LA-ICP-MS; however, mass spectrometers can be prohibitively expensive and require a skilled operator. A quick, inexpensive, effective method is needed for the differentiation of white latex paints. In this study, LIBS is used to analyze 24 white latex paint samples. LIBS is fast, easy to operate, and has a low cost. Results show that 98.1% of variation can be accounted for via principle component analysis, while Tukey pairwise comparisons differentiated 95.6% with potassium as the elemental ratio, showing that the discrimination capabilities of LIBS are comparable to those of LA-ICP-MS. Due to the many advantages of LIBS, this instrument should be considered a necessity for forensic laboratories.

Paints mostly consist of three major components which are binder, pigment/filler andsolvent. Many other components are added in smaller amount and these are calledadditives. One of these additives is defoamers which are added to the paint todecrease foam which can cause defects in the dried paint for example as pores. Thisstudy was about investigating if the defoamers can be identified and quantified withhigh performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry. This includessample preparation, chromatographic separation and detector settings. Calibrationcurves where constructed for paints containing different concentrations of defoamerand for a paint with 0% defoamer where different concentration of defoamer whereadded. Standard addition was done for a paint. Matrix effects were investigated bycomparing signal from defoamer in MeOH compared in paint. This study showed thatthe sample preparation of paints should involve dilution in MeOH or water followedby adding of formic acid and centrifugation and filtration to avoid problems in theinstrument. It is possible to identify if a defoamer is present in paint. Quantificationhas not been achieved, due to possible matrix effects and different response whendefoamer is added to the paint before analysis compared to when the defoamer isadded in the manufacturing process.

Flow injection and liquid chromatographic sample introduction techniques have been coupled to inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS) and inductively coupled plasma optical emission spectrometry (ICP-OES). The analytical performances of these combinations have been evaluated. Several applications have also been developed. The fundamental FI parameter, response dispersion coefficient (D$\rm\sb{r}),$ has been studied for various elements with FI-ICP-MS in multi-element detection mode. Some interesting phenomena were observed and possible explanations have been made. A recirculating loop FI manifold which provides on-line successive dilutions has been coupled to ICP-MS. The analytical performance of the manifold was evaluated. The dilution behavior of various elements was examined. The manifold was successfully applied to the recovery study of cerium in wine. Factors affecting the speed of the dilution process were also investigated. High performance liquid chromatography including ion exchange chromatography (IC) and reverse phase liquid chromatography have also been coupled to ICP-MS for selenium speciation in selenium-enriched vegetables. The methods developed efficiently identified and semi-quantified several biologically important selenium species. The advantages and disadvantages of these methods were addressed as well. Flow injection sample introduction has also been coupled to an axially viewed ICP-OES with a segmented - array charge - coupled device detector. Various traditional pneumatic nebulizer-spray chamber systems have been examined. The best nebulizer-spray chamber combination has been identified for FI-ICP-OES. Some experiments and data treatments have been conducted under the guidance of simulation in order to achieve better analytical figures of merit.

The high efficiency of capillary electrophoresis (CE) coupled with universality of direct UV absorbance detection allowed the quantification of the following matrices: (1) oxalate in numerous biological systems such as: human albumin, urine, parental nutrition solutions (intralipid infusion, multi-vitamin infusion), fifteen premature baby formulas produced by the two leading baby food companies, commercial skim and 1% fat milk emulsions; (2) histidine-containing antioxidants, carnosine and anserine, in pork and chicken muscle tissue extracts; (3) melatonin in the presence of the products of tryptophan metabolism and (4) taxol in the presence of such interferents as cephalomannine and baccatine III. The importance of accurate oxalate quantification in various biological systems is directly connected to the formation of kidney and, possibly, gall bladder stones in premature babies and adults, since oxalate is a direct precursor in the formation of calcium oxalate, the final product of metabolism of oxalic acid. The method developed allowed quantification of underivatized samples with a 6 ppb detection limit for oxalate using direct photometric detection. The naturally occurring histidine-containing dipeptides, carnosine and anserine, are directly responsible for the following properties of muscle tissues of pork, chicken, fish, etc.: freshness, color, texture, and flavor. The present methods of antioxidant quantification based on HPLC with fluorescence detection lack sensitivity, specificity and reproducibility. A reliable CE method using direct UV absorbance detection was developed for fast, accurate, reproducible, sensitive and selective quantification of the analytes at ppm levels in the muscle extracts and at ppb levels in aqueous standards without derivatization of the muscle extracts. Much attention has been focused lately on the healing properties of the naturally occurring hormone melatonin. The analyte is currently quantified by HPLC with fluorescence and/or electrochemical detection, which, unfortunately, lacks specificity and sensitivity for melatonin in the presence of tryptophan and its products of metabolism. An attempt was made to develop a specific, sensitive, fast and simple method of analyte quantification without any kind of sample derivatization, solid phase and/or liquid phase extraction, and/or preconcentration. This allowed the separation and quantification of melatonin in the presence of major HPLC interferents such as tryptophan, hydroxytryptophan, and seratonin. Taxol, a highly functionalized taxane diterpene amide, has recently emerged as an effective chemotherapeutic agent for treatment of ovarian tumors, breast carcinomas and malignant melanoma. Micellar electrokinetic chromatography was successfully applied to separate several taxanes in about 11 minutes using minute amounts of sample and minimal amounts of buffer to decrease the solvent waste. (Abstract shortened by UMI.)