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Testes de elisa e vírus-neutralização na detecção de anticorpos contra o vírus da diarréia viral bovina no soro e leite / Performance of virus neutralizing test and elisa for detection of antibodies and identification of herds with bovine viral diarrhea virus infection

Sturza, Diego Artemio Franco 02 June 2011 (has links)
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The success of control/eradication programs of bovine viral diarrhea virus (BVDV) infection necessarily includes the identification and elimination of persistently infected (PI) animals. Since these animals continuously shed virus, the prevalence and titers of antibodies in herds with PI animals are often high. Hence, bulk milk and serum samples were subjected to two serological tests in order to establish the most appropriate for herd screening. For this, 767 samples of bulk milk and 701 serum samples were analyzed by a commercial ELISA kit and by virus-neutralization test (VNT). The toxic effects of milk for cell cultures on VNT was abolished by increasing the final volume of medium during the incubation. Among the tested milk samples, 177 and 139 were positive in VNT and ELISA, respectively. Thus, the VNT showed a sensitivity (Se) of 76.8% and a specificity (Sp) of 99.5%. The Kappa index (k) was 0.82, demonstrating an excellent agreement between the two techniques. The analysis of the correlation coefficient between the absorbance values in ELISA (OD) and antibody titers in positive samples in VNT showed a moderate positivity (r = 0.57) with p<0.05. In serum samples, 442 and 602 were positive in ELISA and VNT, respectively. This resulted in a VNT sensitivity (Se) of 92.7% and specificity (Sp) of 27.1%, with (k) of 0.23, reflecting a weak agreement between the two techniques. The correlation coefficient between OD and antibody titers showed a moderate positivity (r = 0.54) with p<0.05. Testing of both milk and serum revealed a considerable number of samples with high VN titers and low ODs. On the other side, many samples with low VN titers showed high ODs in the ELISA. Based on the above mentioned results, and assuming that the presence of PI animals usually results in VN titers ≥ 80, we conclude that the VNT is more appropriate to conduct herd screening in bulk milk when the objective is to detect herds with high titers of neutralizing antibodies, potentially harboring PI animals. / O sucesso nas estratégias de controle e erradicação do vírus da diarréia viral bovina (BVDV), passa pela identificação e eliminação dos animais persistentemente infectados (PI). Como esses animais excretam continuamente o vírus, a prevalência e os títulos de anticorpos nos rebanhos que os possuem são geralmente altos. Por isso, amostras de tanques coletivos de leite são frequentemente utilizadas na triagem de rebanhos. No presente trabalho, amostras coletivas de leite e amostras de soro foram submetidas a duas técnicas sorológicas, a fim de estabelecer a mais adequada para esta finalidade. Para tal, 767 amostras coletivas de leite e 701 amostras de soro bovino foram testadas com um kit ELISA indireto (teste padrão) e pela técnica de vírus-neutralização (VNT). Devido aos efeitos tóxicos do leite sobre o cultivo celular, a VNT foi adaptada, o que consistiu no aumento do volume final na etapa de incubação com os cultivos celulares. No teste do leite, foram positivas 177 e 139 amostras, no ELISA e na VNT, respectivamente. Com isso, a VNT adaptada apresentou uma sensibilidade (Se) de 76,8% e uma especificidade (Sp) de 99,5%. O índice Kappa (k) foi de 0,82, demonstrando uma ótima concordância entre as duas técnicas. A análise do coeficiente de correlação entre os valores de absorbância no ELISA (OD) e os títulos de anticorpos na VNT nas amostras positivas, demonstrou uma correlação moderada positiva (r = 0,57) com p<0,05. No teste do soro, foram positivas 442 e 602 amostras no ELISA (teste padrão) e na VNT, respectivamente. Observou-se uma (Se) de 92,7% e (Sp) de 27,1%, com (k) de 0,23, demonstrando uma fraca concordância entre as duas técnicas. O coeficiente de correlação entre OD e os títulos de anticorpos demonstrou uma correlação moderada positiva (r = 0,54) com p<0,05. Observaram-se nos testes do leite e do soro, várias amostras com títulos altos na VNT apresentando ODs baixas a medianas. Por outro lado, várias amostras com títulos neutralizantes baixos apresentaram ODs altas. Baseado nos resultados, e partindo do pressuposto que a presença de animais PI reflete-se em títulos neutralizantes geralmente ≥ 80, conclui-se que a VNT é mais adequada para a realização de triagem em amostras coletivas de leite quando objetiva-se detectar rebanhos com altos títulos de anticorpos neutralizantes, possíveis portadores de animais PI.

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