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Taxonomia integrada de nematóides anisaquídeos parasitos de cetáceos da costa do nordeste do Brasil

Di Azevedo, Maria Isabel Nogueira January 2012 (has links)
Made available in DSpace on 2015-10-21T12:19:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 maria_azevedo_ioc_mest_2012.pdf: 3920589 bytes, checksum: 4c33d4d2ace8f5e6b7d0c7c657da00d3 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-05-21 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Nematóides da família Anisakidae tem como principais representantes espécies dos gêneros AnisakisDujardin, 1845, PseudoterranovaKrabbe, 1878 e Contracaecum Railliet e Henry, 1913. Apresentam um ciclo de vida indireto em ecossistemas aquáticos, tendo mamíferos marinhos como hospedeiros definitivos e peixes e crustáceos como hospedeiros intermediários, estando relacionado a quadros patológicos em ambos. O homem pode infectar-se ao ingerir o pescado de forma crua ou mal-cozida, e desenvolver uma patologia gastrointestinal denominada anisaquidose. A identificação acurada de anisaquídeos em qualquer estágio do ciclo de vida é crucial para o melhor entendimento da ecologia e epidemiologia destes nematódeos, assim como para o diagnóstico e controle da anisaquíase humana e monitoramento da qualidade do pescado. A identificação em nível de espécie baseado na morfologia é difícil, devido aos limitados caracteres de importância taxonômica. Abordagens moleculares e genéticas são capazes de fornecer uma identificação precisa dos anisaquídeos, possibilitando um melhor entendimento de sua sistemática. O objetivo deste trabalho é identificar, através da taxonomia integrada com base em análises morfológica e genética, as espécies de nematódeos da família Anisakidae parasitos de mamíferos marinhos provenientes do litoral do nordeste brasileiro. Os parasitos (n=195) foram coletados de 54 cetáceos encalhados ao longo do litoral de seis estados do nordeste do Brasil A análise morfológica revelou 60 espécimes como sendo Anisakis sp. clado I, 24 Anisakissp. clado II e 4 como Pseudoterranovasp. A espécie A. paggiaefoi identificada em Kogiabreviceps, constituindo a pimeira descrição austral da espécie. O gênero Pseudoterranova é identificado pela primeira vez infectando o golfinho-rotator, Stenella longirostris.Devido à natureza do material, fixado em formalina, etanol, ou AFA, diferentes métodos e kits de extração de DNA foram empregados, e a metodologia de pré-tratamento com CTAB e extração com o kit comercial QIAamp® DNA Investigator(Qiagen) apresentou o melhor desempenho. Para amplificação do DNA, a técnica de Polimerização Reconstrutora se mostrou eficaz na optimização da PCR. O gene mtDNA cox2 foi avaliado comobarcodeda família Anisakidae e se mostrou eficiente. Dezesseis espécimes, de hospedeiros distintos, foram geneticamente identificados como A. typica, confirmando esta espécie como a mais circulante no Brasil. Em Stenella frontalis, Lagenodelphis hosei e Globicephala macrorhyncus, a espécie é relatada pela primeira vez em águas do litoral brasileiro. A espécie A. nascettiifoi identificada em um hospedeiro ainda não relatado, Mesoplodon europaus, a baleia bicuda de Gervais, e sua distribuição também expandida para águas do Atlântico sudoeste / Anisakids are mainly represented by species of the genus Anisakis Dujardin, 1845, Pseudoterranova Krabbe, 1878 e Contracaecum Railliet and Henry, 1913. They display indirect life cycles in aquatic ecosystems. Marine mammals act as definitive hosts and fishes as intermediate hosts, being anisakids associated to pathological conditions on both. Human can become infected when ingesting raw or undercooked seafood, acquiring anisakidosis. The accurate identification of anisakids at any life cycle stage is crucial for better understanding the ecology and epidemiology of these nematodes, as well for diagnosis and control of human anisakidosis and monitoring the seafood quality. Identification at species level based on morphology is difficulty, due to limited characters of taxonomic importance. Molecular and genetic approaches are able to provide a precise identification of anisakids, enabling a better knowledge about their systematics. The objective of the present study was to identify, through the integrated taxonomy based on morphological and genetic data, the nematodes species of the Anisakidae family, parasites of marine mammals caught on the northeastern coast off Brazil. Parasites (n=195) were collected from 57 cetaceans stranded along the coast of six states of the Northeastern of Brazil. Morphological analysis revealed 60 specimens as Anisakis sp. clade I , 24 as Anisakis sp. clade II e 4 as Pseudoterranova sp. The species A. paggiae was identified in K. breviceps , constituting the first austral description of the species. The genera Pseudoterranova was identified for the first time infecting the spinner-dolphin, Stenella longirostris. Due to material conditions, fixed in formalin, ethanol or AFA, different methods and extractions kits were applied, and the pre-treatment with CTAB solution and posterior extraction with the commercial kit comercial QIAamp® DNA Investigator (Qiagen) , showed the best performance. For DNA amplification, the Reconstructive Polymerization method was efficient in PCR optimization. The gene mtDNA cox 2 was evaluated as barcode to Anisakidae and it was effective. Sixteen specimens, from different hosts, were genetically identified as A. typica , confirming this species as the most circulating in Brazil. In Stenella frontalis , Lagenodelphis hosei and Globicephala macrorhyncus, the species was reported for the first time in Brazilian waters. The species A. nascettii was identified in an unreported host, Mesoplodon europaus, the Gervais beaked whale, expanding its distribution to Southwest Atlantic waters

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