Submitted by Haroudo Xavier Filho (haroudo.xavierfo@ufpe.br) on 2016-02-25T17:28:13Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação versão correta_Erika Trindade.pdf: 2153375 bytes, checksum: 27828150a490aba6be042d8498b9068e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-25T17:28:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação versão correta_Erika Trindade.pdf: 2153375 bytes, checksum: 27828150a490aba6be042d8498b9068e (MD5) Previous issue date: 2015-02-26 / FACEPE / A infecção com o Vírus da Hepatite B (HBV) é uma das principais causas de morbidade e mortalidade em todo o mundo. Estima-se que 350 milhões de pessoas no mundo têm infecção crônica pelo HBV, o que representa aproximadamente 5% da população mundial. Levando-se em conta que a transmissão do HBV ocorre principalmente pelas vias parenteral e sexual, bolsas de sangue devem ser rigorosamente controladas. Um teste rápido antes da doação para identificar o marcador do HBV é desejável para reduzir os custos com o descarte desnecessário de bolsas de sangue. Atualmente, os anticorpos produzidos contra os antígenos do core do vírus da hepatite B (anti-HBc IgG) têm sido relatados como o marcador mais prevalente para o HBV devido a persistir por toda a vida e indicam infecção passada. Imunossensores são dispositivos analíticos que utilizam antígenos ou anticorpos e um transdutor para detecção rápida e quantificação de analitos e também podem ser portáteis. Diferentes tipos de transdutores para imunossensores são utilizados, tais como eletroquímico, óptico e piezoeléctrico. As técnicas eletroquímicas têm como princípio básico a detecção de espécies eletroativas presentes no processo de interação do elemento biológico com o transdutor. Transdutores eletroquímicos amperométricos estão entre os mais utilizados, devido à sua facilidade para portabilização. Os nanomateriais e os polímeros funcionalizados têm atraído grande interesse no desenvolvimento de matrizes de imobilização para biossensores devido a proporcionarem maior estabilidade e maior área para ancoramento de biomoléculas. Quando os nanotubos de carbono carboxilados são associados com politiramina, eles formam ligações amida que permitem que esta superfície seja muito mais estável, aumentando a precisão analítica. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um imunossensor para detecção do anti-HBc através da imobilização do antígeno do HBc (HBcAg) em um eletrodo de ouro nanoestruturado formado por nanotubos de carbono carboxilados e politiramina. As modificações no eletrodo foram acompanhadas por voltametria cíclica e voltametria de onda quadrada. Foi obtida uma matriz estável, com processo de interação reversível e com possibilidade de portabilização. A faixa linear de resposta foi de 1,0 a 5,0 ng/mL, com limite inferior de detecção de 0,1ng/mL, mostrando grande sensibilidade para o anticorpo. Para uso clínico, o protótipo precisa ser validado em mais amostras sorológicas. / Infection with Hepatitis B Virus (HBV) is a major cause of morbidity and mortality worldwide. An estimated 350 million people have chronic HBV infection, which represents approximately 5% of the world population. Taking into account that transmission of HBV occurs mostly by via parenteral and sexual, blood bags should be tightly controlled. A quick test before donating to identify the marker of HBV is desirable to reduce unnecessary costs to dispose of blood bags. Currently, antibodies against the core antigen of hepatitis B (anti-HBc IgG) have been reported as the most prevalent marker for HBV virus due to persist throughout life, indicating past infection. Immunosensors are analytical devices that use antigens or antibodies, and a transducer for rapid detection and quantification of analytes and can also be portable. Different types of transducers for immunosensors are used, such as electrochemical, optical and piezoelectric. Electrochemical techniques have as basic principle the detection of electroactive species present in the interaction process of the biological element with the transducer. Amperometric electrochemical transducers are among the most widely used due to be easily portabilized. And nanomaterials functionalized polymers have attracted great interest in the development of immobilization matrices for biosensors owing to provide greater stability and larger area for biomolecule anchoring. When the carboxylated carbon nanotubes are associated with polytyramine they form amide bonds that allow the surface to be much more stable, enhancing the analytical precision. This work aimed at the development of an immunosensor for the detection of anti-HBc by immobilizing the HBc antigen (HBcAg) in a nanostructured gold electrode formed by carboxylated carbon nanotubes and polytyramine. The changes in the electrode were followed by cyclic voltammetry and square wave voltammetry. A stable matrix was obtained, with reversible interaction process and the possibility of portabilization. The linear response range was 1.0 to 5.0 ng/ml, with a lower detection limit of 0.1 ng/mL, showing great sensitivity to the antibody. For clinical use, the prototype must be validated in more serum samples.

Introdução. A infecção causada pelo vírus da hepatite B (HBV) é um dos agravos de maior prevalência no mundial. Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS) existem mais de 350 milhões de portadores crônicos da doença. A infecção pelo HBV é rotineiramente identificada quando há a presença do HBsAg circulante. Entretanto, em alguns casos o HBV-DNA tem sido detectado em indivíduos HBsAg negativos, positivos ou negativos para anti-HBc e anti-HBs. Essa apresentação sorológica e molecular é denominada infecção oculta pelo HBV (OBI). Geralmente a concentração do HBV-DNA no soro será abaixo de 200 UI/mL. Objetivo: Determinar a prevalência da OBI, em doadores de sangue do Estado do Amapá no ano de 2014. Material e Métodos. Foram analisadas um total de 62 amostras de doadores de sangue do estado do Amapá, no ano de 2014, que apresentavam o perfil sorológico: HBsAg negativo, anti-HBc positivo e com anti-HBs negativo ou positivo. Os marcadores sorológicos HBsAg e anti-HBc foram determinados através do imunoensaio quimioluminescente. As amostras selecionadas para a detecção do HBV-DNA foram testadas utilizando as metodologias de Real-Time PCR Kit NAT HIV/HCV/HBV (Bio-Manguinhos®) e PCR \"in house\". Resultados. Do total de 13.261 doadores triados para infecções transmissíveis pelo sangue, 283 apresentaram resultados reagentes para os marcadores da hepatite B, nos quais: 35 (0,3%) foram HBsAg e 248 (1,9%) para anti-HBc reagentes. Um total de 62 amostras foram testadas pelos métodos moleculares. Todas as amostras apresentaram resultado HBV-DNA não-detectável. Conclusão: O índice de inaptidão sorológica no ano de 2014 no HEMOAP foi de 1,9% para anti-HBc e 0,3% para HBsAg. A população estudada foi constituída predominantemente por adultos com idade entre 29-65 anos, do sexo masculino, casados e naturais de municípios do estado do Amapá / Introduction. The infection caused by the hepatitis B virus (HBV) is one of the most prevalent diseases in the world. According to the World Health Organization (WHO) there are more than 350 million chronic carriers of the disease. HBV infection is routinely identified when there is presence of circulating HBsAg. However, in some cases HBV-DNA has been detected in HBsAg negative individuals, positive or negative for anti-HBc and anti-HBs. This serological and molecular presentation is termed HBV-occult infection (OBI). Usually the concentration of HBV-DNA in serum will be below 200 IU / mL.Objective: To determine the prevalence of OBI in blood donors, in the State of Amapá, in the 2014. Material and methods. A total of 62 samples of blood donors from the State of Amapá in the year 2014 were analyzed, presenting the serological profile: HBsAg negative, anti-HBc positive and with negative or positive anti-HBs. Serum markers HBsAg and anti-HBc were determined by the chemiluminescent immunoassay. Samples selected for HBV-DNA detection were tested using the Real-Time PCR Kit Kit HIV / HCV / HBV (Bio-Manguinhos®) and in-house PCR. Results. Of the total of 13,261 donors screened for blood-borne infections, 283 presented reactive results for hepatitis B markers, in which: 35 (0.3%) were HBsAg and 248 (1.9%) for anti-HBc reagents. All samples showed nondetectable HBV-DNA result. Conclusion: The serological disability index in the year 2014 in HEMOAP was 1.9% for anti-HBc and 0.3% for HBsAg. The studied population consisted predominantly of adults aged 29-65 years, males, married and natural of cities of the state of Amapá

Introdução. A infecção causada pelo vírus da hepatite B (HBV) é um dos agravos de maior prevalência no mundial. Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS) existem mais de 350 milhões de portadores crônicos da doença. A infecção pelo HBV é rotineiramente identificada quando há a presença do HBsAg circulante. Entretanto, em alguns casos o HBV-DNA tem sido detectado em indivíduos HBsAg negativos, positivos ou negativos para anti-HBc e anti-HBs. Essa apresentação sorológica e molecular é denominada infecção oculta pelo HBV (OBI). Geralmente a concentração do HBV-DNA no soro será abaixo de 200 UI/mL. Objetivo: Determinar a prevalência da OBI, em doadores de sangue do Estado do Amapá no ano de 2014. Material e Métodos. Foram analisadas um total de 62 amostras de doadores de sangue do estado do Amapá, no ano de 2014, que apresentavam o perfil sorológico: HBsAg negativo, anti-HBc positivo e com anti-HBs negativo ou positivo. Os marcadores sorológicos HBsAg e anti-HBc foram determinados através do imunoensaio quimioluminescente. As amostras selecionadas para a detecção do HBV-DNA foram testadas utilizando as metodologias de Real-Time PCR Kit NAT HIV/HCV/HBV (Bio-Manguinhos®) e PCR \"in house\". Resultados. Do total de 13.261 doadores triados para infecções transmissíveis pelo sangue, 283 apresentaram resultados reagentes para os marcadores da hepatite B, nos quais: 35 (0,3%) foram HBsAg e 248 (1,9%) para anti-HBc reagentes. Um total de 62 amostras foram testadas pelos métodos moleculares. Todas as amostras apresentaram resultado HBV-DNA não-detectável. Conclusão: O índice de inaptidão sorológica no ano de 2014 no HEMOAP foi de 1,9% para anti-HBc e 0,3% para HBsAg. A população estudada foi constituída predominantemente por adultos com idade entre 29-65 anos, do sexo masculino, casados e naturais de municípios do estado do Amapá / Introduction. The infection caused by the hepatitis B virus (HBV) is one of the most prevalent diseases in the world. According to the World Health Organization (WHO) there are more than 350 million chronic carriers of the disease. HBV infection is routinely identified when there is presence of circulating HBsAg. However, in some cases HBV-DNA has been detected in HBsAg negative individuals, positive or negative for anti-HBc and anti-HBs. This serological and molecular presentation is termed HBV-occult infection (OBI). Usually the concentration of HBV-DNA in serum will be below 200 IU / mL.Objective: To determine the prevalence of OBI in blood donors, in the State of Amapá, in the 2014. Material and methods. A total of 62 samples of blood donors from the State of Amapá in the year 2014 were analyzed, presenting the serological profile: HBsAg negative, anti-HBc positive and with negative or positive anti-HBs. Serum markers HBsAg and anti-HBc were determined by the chemiluminescent immunoassay. Samples selected for HBV-DNA detection were tested using the Real-Time PCR Kit Kit HIV / HCV / HBV (Bio-Manguinhos®) and in-house PCR. Results. Of the total of 13,261 donors screened for blood-borne infections, 283 presented reactive results for hepatitis B markers, in which: 35 (0.3%) were HBsAg and 248 (1.9%) for anti-HBc reagents. All samples showed nondetectable HBV-DNA result. Conclusion: The serological disability index in the year 2014 in HEMOAP was 1.9% for anti-HBc and 0.3% for HBsAg. The studied population consisted predominantly of adults aged 29-65 years, males, married and natural of cities of the state of Amapá

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:28:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1040_1.pdf: 1325892 bytes, checksum: f61dd605358bbaccfa20b61c802941a3 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Testes sorológicos para detecção do HBsAg e anti-HBc são realizados em doadores de sangue para evitar a transmissão da hepatite B. No entanto, a maior causa de rejeição nos hemocentros é a detecção do anti-HBc, que provoca ausência de doadores e descarte de bolsas de sangue, o que aumenta os custos nos bancos de sangue. Mas, pesquisas mostram que doadores anti-HBc positivo com ou sem o anti-HBs, podem continuar replicando o vírus e transmitir a infecção aos receptores dos hemocomponentes. Outros estudos mostram que doadores HBsAg/anti-HBc positivos na fase crônica podem conter quantidades de HBV-DNA muito baixas e não ser detectado por testes moleculares. Ainda existe um risco de transmissão que ocorre se o doador estiver na fase inicial da infecção, antes da detecção do HBsAg e que pode ser evitado pesquisando-se o HBV-DNA. Testes para detecção de ácidos nucleicos (NAT) do HIV, HCV e HBV em doadores de sangue já ocorre em alguns países, e no Brasil, está em fase de implantação para o HIV e HCV. Os objetivos deste estudo foram: pesquisar o HBV-DNA em doadores de sangue anti-HBc positivo da Fundação HEMOPE com e sem o anti-HBs, determinar a carga viral nos doadores HBsAg/anti-HBc positivo e estimar a frequência de positividade do HBV-DNA nos diferentes perfis sorológicos no período de junho de 2009 a fevereiro de 2010. Trezentos e vinte doadores anti-HBc/anti-HBs positivos, 39 HBsAg/anti-HBc positivos e 41 anti-HBc positivo isolado participaram do estudo. A pesquisa do HBV-DNA foi realizada pelo teste qualitativo de nested-PCR e a quantificação pelo teste AMPLICOR HBV MONITOR (ROCHE). Os resultados mostraram que o HBV-DNA não foi detectado em nenhum doador anti-HBc/anti-HBs positivos e anti-HBc positivo isolado, sendo quantificado em 64% dos HBsAg/anti-HBc positivos. Esses resultados sugerem que com a utilização de uma técnica mais sensível, aumentaria a possibilidade de se detectar o HBV-DNA em um número maior de doadores. Além disso, a substituição do teste do HBsAg pela detecção do HBV-DNA, requer cautela e novos estudos. No entanto, o HBV-DNA é um marcador útil para detectar a infecção na fase de janela imunológica

京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(医学) / 甲第19593号 / 医博第4100号 / 新制||医||1014(附属図書館) / 32629 / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 松岡 雅雄, 教授 朝長 啓造, 教授 西渕 光昭 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM

Made available in DSpace on 2015-02-04T21:42:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Heloiza.pdf: 504743 bytes, checksum: 4fde6c28fc11e48070d8c696d00b78e9 (MD5) Previous issue date: 2009-10-23 / Este estudo epidemiológico foi realizado com o objetivo de definir a soroprevalência das hepatites virais B e C em escolares que freqüentavam regularmente as escolas municipais de Ensino Fundamental no município de Santos, no período de novembro de 2008 a março de 2009,. Foram analisadas 98 amostras de sangue de escolares com idade entre 4 e 14 anos, através da técnica de ELISA, para detecção da presença de anticorpos anti-HVC, anti-HBc anti-HBs e HBsAg, Setenta e duas amostras foram positivas para a detecção do anti-HBs, mostrando uma eficácia na vacinação contra hepatite B de 75%. Em duas crianças foi detectada a presença do HVC, demonstrando uma prevalência de 2,8%. A pesquisa do anti-HBc foi positiva em duas crianças (prevalência de 2,8%) e o HBs-Ag foi detectado em uma criança (prevalência de 1,3%).

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:31:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8085_1.pdf: 956174 bytes, checksum: 81cf93e65ab504a80ac0e917913226bf (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / O anticorpo contra o antígeno do centro (ou do core), o anti-HBc, do vírus da hepatite B (VHB) é considerado o mais sensível e duradouro marcador sérico da infecção pelo VHB. Algumas vezes o anti-HBc é encontrado na ausência de outros marcadores como por exemplo o anti-HBs ou o HBsAg. O significado clínico do encontro isolado do anti-HBc permanece incerto. Existem algumas explicações para este achado: primeiro, o encontro do anti-HBc pode ser um resultado apenas falso-positivo. Segundo, o indivíduo pode ter ficado imune após contato com o VHB, porém não possui anti-HBs detectável. Terceiro, estes indivíduos com anti-HBc isolado podem ser portadores crônicos do VHB com ausência ou não detecção de HBsAg. Além do que o encontro isolado do anti-HBc pode ser pelo fato do indivíduo se encontrar na fase de janela imunológica quando o HBsAg desapareceu mas o anti-HBs ainda não está detectável. Uma última hipótese menos provável é que a presença do anti-HBc possa ter sido devida a uma passagem passiva deste anticorpo. Exceto a situação de janela imunológica todas as outras explicações hipotéticas teriam teoricamente esclarecimento com o uso de técnicas de biologia molecular. Porém, como é cara e laboriosa não é utilizada de rotina. Haja vista a importância tanto do ponto de vista do indivíduo como para os serviços de saúde de elucidar se o anti-HBc isolado é falso-positividade do teste ou contato prévio com o VHB alguns serviços de saúde têm utilizado a vacinação contra o VHB nestes indivíduos para distinguir entre estas duas situações. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta contra vacina recombinante para VHB em doadores sanguíneos portadores de anti-HBc e negativos para HBsAg e anti-HBs. O modelo do estudo foi do tipo quasi-experimental sem grupo controle, não randomizado. Vinte e quatro doadores entre 22 e 76 anos receberam três doses de 20 mcg de Engerix®-B nos meses 0, 1 e 6. Amostras sanguíneas foram coletadas 30 dias após primeira e terceira dose de vacina e testadas para anti-HBs pela técnica imunoenzimática por fluorescência. Os resultados mostraram que após a primeira e terceira dose de vacina a taxa de soroproteção (anti-HBs >10 miliUI/ml) foi de 61,9% e 87,5%, respectivamente. A taxa de resposta tipo anamnéstica com produção rápida de anticorpos foi de 38% e tipo primária ou lenta foi de 47,6%. A taxa de não respondedores ao final do esquema vacinal foi de 12,5%. Doadores estes potencialmente suspeitos de serem portadores inativos de VHB e que foram submetidos à pesquisa de DNA do VHB pela PCR sendo todos negativos para este teste. O uso da vacina recombinante contra VHB ajudou a elucidar a situação imunológica da maioria dos indivíduos do presente estudo. Portanto, a estratégia da vacinação parece ser prática e pouco laboriosa para esclarecimento diagnóstico neste grupo de doadores