Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-11-28T19:21:24Z No. of bitstreams: 1 rodrigo-muller.pdf: 1238864 bytes, checksum: 6c267fda3ccb992508b5424e77147783 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-28T19:21:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rodrigo-muller.pdf: 1238864 bytes, checksum: 6c267fda3ccb992508b5424e77147783 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / As infecções causadas por Staphylococcus aureusresistentes à meticilina (MRSA) são temidas em virtude da dificuldade de seu tratamentoe da elevada morbidade associada. A PBP2a (penicillin binding protein 2a), enzima responsável pela síntese da parede celular em MRSA, apresenta baixíssima afinidade porbeta-lactâmicos. Pelo fato de a PBP2a estar localizada na superfície externa, a mesma seria acessível ao sistema imune. Durante as infecções causadas por MRSA, pouco se sabe se o hospedeiro infectado ou colonizado desenvolve anticorpos anti-PBP2a e se osmesmos seriam protetores ou não. O presente projeto tem por finalidade avaliar a presença e níveis de anticorpos anti-PBP2a em um grupo de 56 pacientes colonizados por MRSA e investigar se estes anticorpos seriam protetores ou não. Os resultados gerados permitiram observar que 71% das amostras analisadas apresentaram anticorposanti-PBP2a pelo teste ELISA. Estas amostras foram submetidas à Western blot paraconfirmação, demonstrando que 46% das amostras possuíram anticorpos anti-PBP2a. Após estes resultados, as amostras positivas foram submetidas à purificação para avaliar a cinética de crescimento de MRSA. Foi observado que houve ligeira redução do crescimento bacteriano entre amostras de soro com anticorpos MRSA comparadas comas de soro com anticorpos anti-MSSA (PBP2a negativos). Por conseguinte avaliamos a curva de crescimento de MRSA em presença de imunoglobulinas purificadas de soro de pacientes colonizados por MRSA, (quantificação bacteriana). Observamos que houve uma redução drástica do crescimento bacteriano em presença destas imunoglobulinas. Os resultados obtidos indicaram que: (i) pacientes colonizados por MRSA podem produzir anticorpos anti-PBP2a e (ii) estes anticorpos podem conferir proteção contra MRSA. Estes dados parecem indicar que uma potencial vacina anti-PBP2apoderia ser efetiva para prevenção de infecções causadas por MRSA, como também para o emprego de imunoterapia passiva para o tratamento de pacientesinfectados por este patógeno. / Infections caused by methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) are feared because of the difficulty of their treatment and the high associated morbidity. The PBP2a (penicillin binding protein 2a), the enzyme responsible for cell wall synthesis in MRSA, presents low affinity for beta-lactams. Because of the PBP2a is located on the external surface, it would be accessible to the immune system. During the MRSA infections, little is known whether the infected orcolonized host can produce antibodies anti-PBP2a and whether these antibodies would be protective or not. This project aims to assess the presence and levels of anti-PBP2a in a group of 56 patients colonized by MRSA and investigate whether these antibodies wouldbe protective or not. The results showed that 71% of the samples presented anti-PBP2aantibodies in ELISA. These samples which were subjected to Western blot for confirmation, it was demonstrated that 46% of the samples presented antibodies anti-PBP2a. After these results, the positive samples were subjected to purification to assess the MRSA growth kinetics. It was observed that there was a slight reduction in bacterial growth between serum samples with antibodies and MRSA compared to those of the serum with anti-MSSA (PBP2a negative). Therefore, the curve of growth ofMRSA was evaluated in the presence of purified immunoglobulins from the serumof patients colonized by MRSA (bacterial quantification). We observed that there was a drastic reduction in bacterial growth in the presence of immunoglobulins, thus demonstrating that these antibodies could have a protective action. These results indicated that: (i) MRSA colonized patients can produce antibodies against PBP2a and (ii) these antibodies can be protective against MRSA. These data suggest that a potential vaccine anti-PBP2a could be effective for prevention of infections caused byMRSA and for the use of passive immunotherapy in the treatment of patients infectedby this pathogen.