Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Temproromandibular disfunction (TMD) is related to a masticatory system disfunction which can include the temporomandibular joint (TMJ), the masticatory muscles and/or other related structures. TMJ inflammatory disorders are one of the major pathology of TMD afecting a great number of patients. Although TMJÂs inflammation and pain are important cinical entities, their mechanisms are poorly understood. The purpose of the study is to propose an experimetnal model of TMJÂs arthritis to study its patophysiological mechanisms and inflammatory mediators such as nitric oxide (NO). Female Wistar rats (160-220 g) were used to the study. To induct TMJÂs arthritis, zymosan 40 microL (Zy: 0,25; 0,5; 1 ou 2 mg) was injected into left TMJ. The animals were sacrified in times 3 h, 6 h, 1, 2, 3, 5, 7, 10 e 21 days. Nitric oxide syntase inhibitors L-NAME (10, 30 e 100 mg/kg i.p.) or 1400W (0,5 e 1 mg/kg s.c.) were administered 30 min before TMJÂs arthritis induction. Leucocyte influx count in the sinovial fluid, vascular permability study using Evans blue dye extravasation, myeloperoxidase assay (MPO), NO production determination using Griess reaction, histopatological analyisis and imunohystochemical for induced NO synthase (iNOS) were utilized as parameters of this sutudy. It was observed that Zy (2 mg) induced significantly increase in leucocyte influx count (p<0,05), Evans blue dyeÂs extravasation (p<0,05), myeloperoxidase activity (p<0,05) and NO dosage (p<0,05) compared with control group 6 h after TMJ arthritis induction. Histopatological analysis of TMJ of Zy injected animals showed inflammatory cell infiltration in synovial membrane (SM), in conective periarticular tissue, in squeletic muscle tissue and thickness of SM in 6 h after TMJ arthritis. On the 10th day after TMJ arthritis, the TMJ remain showing leucocyte infiltration to synovial membrane (SM), to conective periarticular tissue, to squeletic muscle tissue and thickness of SM, as well as fibrosis of SM and articular disc. On the 21st d after TMJ arthritis, it was observed cell influx only to SM, showing, however, thickness of SM and the major fibrosis of SM, articular cartilage, conective periarticular tissue and articular disc. TMJÂs imunohistochemistry reaction for iNOS showed increase iNOSÂs expression in animals with TMJÂs arthritis compared to the control group. L-NAME 100 mg/kg and 1400W 1 mg/kg reduced the increase in leucocyte count in the synovial fluid, the Evans blue dye extravasation, the histopatological alterations, and reduced the iNOS expression after imunohistochemistry reaction for iNOS 6 h after TMJ arthritis. These results sugest that this experimental model can be used to study TMJ arthritis, and that NO can participate in the physiopathological mechanisms of TMD. / DisfunÃÃo temporomandibular (DTM) à um distÃrbio relacionado à funÃÃo do sistema mastigatÃrio que acomete as articulaÃÃes temporomandibulares (ATM), os mÃsculos mastigatÃrios e/ou estruturas associadas. As desordens inflamatÃrias na ATM classificam-se como uma das quatro classes de DTM, estando presente em um grande nÃmero de pacientes. Embora a inflamaÃÃo e a dor nas estruturas articulares sejam entidades clÃnicas importantes, seus mecanismos sÃo pouco compreendidos. Objetivamos montar modelo experimental de artrite na ATM para estudar a fisiopatologia da doenÃa e a participaÃÃo de mediadores inflamatÃrios como Ãxido nÃtrico (NO). Foram utilizados ratos Wistar fÃmeas (160-220 g) nos quais se injetou 40 microlitros de zymosan (Zy: 0,25; 0,5; 1 ou 2 mg) na ATM esquerda dos animais para induÃÃo de artrite. Esses animais foram sacrificados nos tempos de 3 h, 6 h, 1, 2, 3, 5, 7, 10 e 21 dias. Utilizaram-se inibidores da sÃntese de Ãxido nÃtrico L-NAME (10, 30 e 100 mg/kg i.p.) ou 1400W (0,5 e 1 mg/kg s.c.) os quais foram injetados 30 min antes da induÃÃo da artrite. ParÃmetros de contagem do influxo celular no lÃquido sinovial, estudo da permeabilidade vascular pelo extravasamento de azul de Evans, estudo do ensaio de mieloperoxidase (MPO), determinaÃÃo da produÃÃo de Ãxido nÃtrico atravÃs da dosagem de nitrito pelo mÃtodo de Griess, anÃlise histopatolÃgica e imunohistoquÃmica para NO sintase induzida (NOSi) foram avaliados. Observamos que Zy (2 mg) induziu aumento significativo do influxo celular no lÃquido sinovial (p<0,05), do extravasamento de azul de Evans (p<0,05), da atividade de mieloperoxidase (p<0,05) e da dosagem de nitrito/nitrato (p<0,05) na 6 h apÃs induÃÃo da artrite em relaÃÃo ao grupo controle. A anÃlise histopatolÃgica mostrou que Zy (2 mg) induziu, de forma significativa, infiltrado celular na membrana sinovial, no tecido conjuntivo periarticular, no tecido muscular esquelÃtico e espessamento da MS na 6 h apÃs induÃÃo da artrite. No 10 d apÃs induÃÃo da artrite, continua a apresentar infiltrado celular na MS, no tecido conjuntivo periarticular, no tecido muscular esquelÃtico e espessamento da MS, assim como passa a apresentar fibrose da MS e do disco articular. No 21 dia apÃs induÃÃo da artrite, foram observados infiltrado celular apenas na MS, com espessamento da mesma, e aumento da fibrose da membrana sinovial, da cartilagem articular, do tecido periarticular e do disco articular, significativamente diferentes em relaÃÃo ao grupo controle. à anÃlise da reaÃÃo de imunohistoquÃmica para NOSi, observou-se aumento da expressÃo de NOSi no animais com Zy (2 mg). Tanto L-NAME 100 mg/kg quanto 1400W 1 mg/kg (p<0,05) foram capazes de reverter o aumento do influxo celular no lÃquido sinovial da ATM (p<0,05), o extravasamento plasmÃtico (p<0,05), as alteraÃÃes histopatolÃgicas e a expressÃo de NOSi pelo estudo da reaÃÃo de imunohistoquÃmica para NOSi observadas na 6 h apÃs induÃÃo da artrite. Esses resultados sugerem que o modelo experimental proposto se presta ao estudo da artrite na ATM, e que NO participa na fisiopatologia do processo inflamatÃrio da DTM.

Os distÃrbios na articulaÃÃo temporomandibular (ATM) estÃo associados com dor inflamatÃria. O ranelato de estrÃncio à utilizado no tratamento da osteoporose. Embora o mecanismo de aÃÃo de ranelato nÃo esteja elucidado, hà provas de seu efeito analgÃsico. Investigamos a eficÃcia do Ranelato na hipernocicepÃÃo inflamatÃria induzido pelo zymosan na ATM de ratos, avaliando o envolvimento TNF-&#945;, IL-1&#946;, e hemeoxygenase-1. Ratos Wistar foram tratados previamente com Ranelato (0,5, 5 ou 50 mg / kg) antes da injeÃÃo de zymosan na ATM. O Teste de Von Frey foi utilizado para avaliar hipernocicepÃÃo. ApÃs a injeÃÃo de zymosan o lavado sinovial foi recolhido para a contagem de leucÃcitos e dosagem de mieloperoxidase; tecido periarticular e no gÃnglio trigeminal foram retirados para anÃlise histopatolÃgica (H & E), e dosagem dos nÃveis de TNF-&#945; e IL-1&#946; (ELISA). Para imuno-histoquÃmica, secÃÃes da ATM foram submetidas ao anticorpo de TNF-&#945; e IL-1&#946;. AlÃm disso, os ratos foram tratados com ZnPP-IX (3 mg / kg), um inibidor especÃfico da enzima hemeoxigenase-1 (HO-1), antes do Ranelato (0,5 mg / kg). AlÃm disso, Azul de Evans (5 mg / kg) foi administrado para avaliar o extravasamento plasmÃtico. Ranelato aumentou o limiar nociceptivo. Embora Ranelato nÃo foi capaz de reduzir a contagem de leucÃcitos, a atividade da mieloperoxidase, o extravasamento de azul de Evans, os nÃveis de IL-1&#946;, imunomarcaÃÃo de IL-1&#946;, foi eficaz na reduÃÃo dos nÃveis de TNF-&#945;. AlÃm disso, ZnPP-IX nÃo alterou a eficÃcia do Ranelato. Ranelato parece exercer seus efeitos de reduzir nociceptivos por meio da reduÃÃo de TNF-&#945; no gÃnglio trigeminal. AlÃm disso, o efeito anti-nociceptivo do ranelato independe de IL-1&#946; e HO-1. / Temporomandibular joint (TMJ) disorders are associated with inflammatory pain. Strontium ranelate is used in osteoporosis. Though the mechanism of action of Ranelate is unclear, there is evidence of its analgesic effect. We investigate Ranelate efficacy in zymosan-induced TMJ hypernociception in rats evaluating TNF-&#61537;, IL-1&#946;, and hemeoxygenase-1 involvement. Wistar rats were pretreated with Ranelate (0.5, 5 or 50mg/kg) before zymosan injection in TMJ. Von Frey test was used to evaluate hypernociception. After zymosan injection synovial lavage was collected for leukocyte counting and myeloperoxidase measurement; joint tissue and trigeminal ganglion for histopathological analysis (H&E), and TNF-&#61537;/IL-1&#946; levels dosage (ELISA). To immunohistochemistry, TMJ sections were subjected to both TNF-&#61537;/IL-1&#946; antibody. Also, rats were treated with ZnPP-IX (3 mg/kg), a specific HO-1 inhibitor, before Ranelate (0.5 mg/kg). Further, Evans Blue (5 mg/kg) was administered to assess plasma extravasation. Ranelate increased the nociceptive threshold. Although Ranelate was not able to reduce leukocyte counting, myeloperoxidase activity, Evans Blue extravasation, IL-1&#946; levels, and TNF-&#61537;/IL-1&#61538; immunolabeling, it was effective in reducing TNF-&#61537; levels. Further, ZnPP-IX did not changed Ranelate efficacy. Ranelate may achieve its nociceptive-alleviating effects through reducing TNF-&#61537; levels in trigeminal ganglion. Further, the Ranelate anti-nociceptive effect is IL-1&#61538; and HO-1-independent.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Estudos de comportamentos espontÃneos, atividade farmacolÃgica sobre os comportamentos alterados, avaliaÃÃo histopatolÃgica e alteraÃÃo de peso corporal foram realizados em ratos (180-300g), atravÃs da administraÃÃo de Adjuvante completo de Freund (CFA) na regiÃo da articulaÃÃo temporomandibular de ratos, a fim de investigar se um estÃmulo inflamatÃrio crÃnico promove alteraÃÃo de comportamento espontÃneo comparado a estÃmulo agudo ou subagudo como a formalina 2,5%. Os animais apÃs a injeÃÃo de CFA, formalina 2,5% e soluÃÃo salina fisiolÃgica 0,9% foram observados diariamente durante 30 minutos por 7 dias onde foram sacrificados para a remoÃÃo da regiÃo articular e periarticular para avaliaÃÃo de alteraÃÃo de parÃmetros inflamatÃrios frente a um estÃmulo pelo CFA e pela formalina 2,5% comparando com o grupo controle. As principais alteraÃÃes promovidas pelo CFA ocorreram no tempo de execuÃÃo de alguns comportamentos como movimento de rotaÃÃo da mandÃbula ou mastigaÃÃo (chewing like), tempo de descanso e sono (rest/sleeping), aparente congelamento (freezing) e auto cuidado como coÃar a face se pata anterior (grooming ou rubbing), enquanto que no grupo de animais da formalina 2,5%, os comportamentos alterados formam grooming e scratching. Os estudos comportamentais demonstram que o CFA possui uma atividade tempo dependente sobre comportamentos, pois essas alteraÃÃes ocorreram a partir do 2Âdia e persistiu atà o 7Âdia apÃs a administraÃÃo do CFA, ao passo que a formalina apresentou uma atividade principal no 1 dia de injeÃÃo. A administraÃÃo de drogas analgÃsicas (Morfina 4mg/Kg; Indometacina, 5mg/Kg e LidocaÃna com fenilefrina) demonstrou que o comportamento chewing like foi sensÃvel à aÃÃo da morfina e indometacina, o sleeping foi aumentado por administraÃÃo de lidocaÃna e indometacina, o tempo de execuÃÃo do comportamento grooming foi reduzido por atividade da morfina e lidocaÃna e o comportamento freezing nÃo foi alterado por aÃÃo de nenhuma das drogas administradas. Comparativamente, os comportamentos alterados pela atividade nociceptiva da formalina 2,5% na regiÃo orofacial dos animais foram grooming e scratching. A morfina e a lidocaÃna foram efetivas em reduzir o grooming e o scratching desenvolvidos pela formalina. A atividade de drogas classicamente analgÃsicas testadas sobre esses comportamentos pode caracterizÃ-los como nociceptivos. Foi observado tambÃm que o peso corporal dos animais nÃo foi alterado pela induÃÃo inflamatÃria do CFA. Comparando sessÃes histolÃgicas da regiÃo articular e periarticular da ATM dos ratos, observamos que no grupo do CFA hà presenÃa de infiltrado inflamatÃrio linfocitÃrio intenso comparado ao grupo da formalina, alÃm de alteraÃÃes degenerativas e pequeno infiltrado inflamatÃrio periarticular. NÃs sugerimos que o fenÃmeno da neuroplasticidade està relacionado Ãs alteraÃÃes comportamentais desenvolvidas pelo CFA e a identificaÃÃo de comportamentos relacionados a sua atividade inflamatÃria pode fornecer subsÃdios para a avaliaÃÃo de novos e melhores agentes terapÃuticos para o tratamento da dor orofacial como tambÃm avaliaÃÃo dos benefÃcios dos tratamentos jà existentes, em consonÃncia com os avanÃos no estudo de dor experimental. / Studies on rats spontaneous behaviors and pharmacological effects of drugs on them, as well as their body weight and histopathological analysis of their joints were carried out to investigate the effect of chronic inflammation of the temporomandibular articulation induced by the administration of Complete Freund Adjuvant (CFA) compared with the acute and subacute stimulus of 2.5% formalin. After CFA, 2.5% formalin and 0.9% saline injection, the animals were daily observed during 30 minutes for 7 days; thereafter, they were killed for removal of the articular and periarticular region for evaluation of inflammatory changes induced by CFA and formalin compared with control rats. The main behavioral changes induced by CFA concerned chewing-like, rest/sleeping, freezing, grooming or rubbing whereas those induced by formalin were grooming and scratching. The CFA-induced behavioral changes were time-dependent from the 2nd up to the 7th day, while the formalin-induced changes occurred in the 1st day only. For pharmacological testing, morphine (4 mg/kg), indomethacin (5 mg/kg) and lidocaine with phenilephrine were used. In the CFA rats, morphine reduced significantly chewing-like and grooming, indomethacin decreased grooming and increased sleeping. Freezing was not changed by any drugs. In the formalin rats, grooming and scratching towards the orofacial region were increased and those behaviors were significantly decreased by morphine and formalin. The effects of the drugs on the different behaviors shown above show their nociceptive meaning. Moreover, the body weight of the animals was not changed. In both CFA and formalin groups, the histological analysis evidenced degenerative and small periarticular inflammatory infiltration. Neuroplasticity changes may be related to the CFA induction and the nociceptive meaning of the behaviors may be useful for experimental therapeutic studies.