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Desenvolvimento e validação de metodologia analítica por clae em fase reversa para a determinação do perfil cromatográfico do extrato etanólico das cascas do caule de aspidosperma nitidum benth (apocynaceae)

Simpson, Daniel Cardoso 14 August 2013 (has links)
Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniel Cardoso Simpson.pdf: 1614019 bytes, checksum: 97affc7d9fbf89b128a926dd2754b01b (MD5) Previous issue date: 2013-08-14 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Aspidosperma nitidum Benth belonging to the Apocynaceae, popularly known as carapanaúba or peroba, widely used in the Amazon region, especially in the relief of symptoms of malaria, having as striking feature of the gener the great presence of indol alkaloids. Despite the widespread use of herbal folk medicine, problems as identification and standardization of the species are quite common. In this context, the present study aimed at the development and validation of an analytical method using high performance liquid chromatography, in order to determine the chromatographic profile of the ethanol extract of the stem bark of Aspidosperma nitidum. The ethanol extract was obtained by maceration and dried extract by freeze. A qualitative evaluation of chemically ethanol extract species showed the presence of alkaloids. The methodology was developed in a liquid chromatograph with high efficiency photodiode array detector, using reverse phase separation system. The validation procedure was carried out by the method of internal standardization, using the 1.8-dihidroxiantraquinona as standard. The calibration curves showed linearity (r ²> 0.99) in a wide range of concentration of the extract and standard, 62.5 to 2000 μg / mL and 15 to 500 μg / mL respectively. The test presented repeatability and reproducibility above 95%, since the coefficient of variation obtained from both assays are below 5%. The method showed good accuracy, which was shown by average recovery of 106% with a coefficient of variation of 2,2%. For all that, the chromatographic method developed and validated proved simple, linear, reproducible and accurate, It can be used therefore for determining the chromatographic profile of the ethanol extract of the stem bark Aspidosperma nitidum. / Aspidosperma nitidum Benth pertencente à Apocynaceae, conhecida popularmente como carapanaúba ou peroba, amplamente utilizada na região Amazônica, principalmente no alívio dos sintomas da malária, tendo como característica marcante do gênero a presença maciça de alcaloides indólicos. Apesar do uso em grande escala de plantas medicinais na medicina popular, problemas como identificação e padronização das espécies são bastante comuns. Nesse contexto, o presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento e a validação do método analítico utilizando a cromatografia líquida de alta eficiência, com o objetivo de determinar o perfil cromatográfico do extrato etanólico das cascas do caule de Aspidosperma nitidum. O extrato etanólico foi obtido por maceração, e o extrato seco por liofilização. A avaliação da constituição química qualitativa do extrato etanólico de espécie demonstrou a presença de alcaloides. O método analítico foi desenvolvido em um cromatógrafo a líquido de alta eficiência com detector por arranjo de fotodiodos, utilizando sistema de separação em fase reversa. A validação do método analítico foi realizada por método de padronização interna, utilizando a 1,8-dihidroxiantraquinona como padrão, com as curvas de calibração apresentando linearidade (r² > 0,99) em uma ampla faixa de concentração do extrato e do padrão, de 62,5 a 2000 μg/mL e de 15 a 500 μg/mL respectivamente. Na validação observou-se repetibilidade e reprodutibilidade acima de 95%, já que os valores de coeficiente de variação obtidos de ambos os testes estão abaixo de 5%. O método apresentou boa exatidão, a qual foi demonstrada pela recuperação média de 106% com o coeficiente de variação de 2,2%. Por tudo isso, o método cromatográfico desenvolvido e validado se mostrou simples, linear, preciso, reprodutível e exato, podendo ser utilizado, portanto, para a determinação do perfil cromatográfico do extrato etanólico das cascas do caule Aspidosperma nitidum.

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