Orientador: Valdir Augusto / Banca: Valdir Augusto Neves / Banca: José Paschoal Batistuti / Banca: Jonas Contiero / Resumo: A família das anonáceas é composta por muitos gêneros e espécies; dentre essas, a atemóia (Annona cherimola Mill. X Annona squamosa L.), resultante do cruzamento entre a fruta-do-conde (Annona squamosa L.) e a cherimóia (Annona cherimola Mill.). No Brasil, a atemóia vem despertando grande interesse na produção/comercialização dos seus frutos; no entanto um dos obstáculos enfrentados é a facilidade de escurecimento enzimático que a fruta apresenta. Esse tem como responsável a polifenoloxidase (PPO, E.C. 1.14.18.1); que sob diferentes condições de armazenamento e processamento de vegetais na sua fase póscolheita pode atuar sob substratos naturais e resultar na formação de compostos escuros, acarretando diminuição do valor nutricional, modificação das propriedades organolépticas e sensoriais, com consequente rejeição. Os objetivos desse trabalho foram isolar, purificar e caracterizar algumas propriedades da polifenoloxidase de atemóia. Condições de extração para a PPO foram estabelecidas e a enzima foi isolada por precipitação com sulfato de amônio e eluição em Sephadex G-100. Somente um pico de atividade foi eluído no processo de purificação com um fator de purificação de 7,12. O peso molecular determinado foi 82 kDa com valores ótimos de pH 6,0 e 7,0 para 4-metil catecol e catecol, respectivamente; sendo estável por 12 e 24 horas à incubação na faixa de pH 4,0-8,0. A temperatura ótima de atividade foi 35°C e 28°C para 4-metil catecol e catecol, respectivamente. Os valores calculados de energia de ativação (Ea) para esses substratos foram 87,29 cal/mol-1 e 180,97 cal/mol-1. As constantes cinéticas Km e Vmax foram 5,52mmol/L e 1428,57 UA/mL, para 4-metil catecol, e 79,3 mmol/L e 5000 UA/mL, para catecol. A relação Km/Vmax determinou uma maior afinidade da enzima pelo primeiro substrato. A enzima mostrou desprezível atividade... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The family of annonaceae is composed of many genus and species, among these, the atemoya (Annona cherimola Mill. X Annona squamosa L.), resulting from a cross between custard apple (Annona squamosa L.) and cherimoya (Annona cherimola Mill.). In Brazil, the atemoya is attracting great interest in the production / marketing of its fruits, however one of the obstacles faced is the ease of enzymatic browning that gives the fruit. This is as responsible for polyphenoloxidase (PPO, EC 1.14.18.1), which under different conditions of storage and processing plant in its post-harvest can act on natural substrates and result in the formation of dark compounds, causing decrease in nutritional value, modification of the organoleptic and sensory properties, with consequent rejection. The objectives of this study were to isolate, purify and characterize some properties of polyphenoloxidase from atemoya. Conditions for the extraction of PPO were established and the enzyme was isolated by precipitation with ammonium sulfate and elution on Sephadex G-100. Only one peak of activity was eluted in the process of purification with a purification factor of 7.12. The molecular weight of 82 kDa was determined with the optimum values of pH 6.0 and 7.0 for 4-methylcatechol and catechol, respectively. The enzyme was stable for 12 and 24 hours incubation in the pH range 4.0-8.0. The optimum temperatures for activity were 35 °C and 28 °C for 4-methylcatechol and catechol, respectively. The values of activation energy (Ea) for these substrates cal/mol-1 were 87.29 and 180.97 cal/mol-1. The kinetic constants Km and Vmax were 5.52 mmol/L and 1428.57 UA/mL for 4-methylcatechol, and 79.3 mmol/L and 5000 AU / mL for catechol. The Km/Vmax determined a higher affinity of the enzyme by the first substrate. The enzyme showed negligible activity for caffeic acid and chlorogenic as any for L-DOPA, catechin... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Edson Luiz Furtado / Banca: Sarita Leonel / Banca: César Junior Bueno / Resumo: A família das anonáceas possui cerca de 40 gêneros e mais de 2.000 espécies, a maioria de regiões de clima tropical ou subtropical. Dessas, muitas possuem características importantes e são de interesse comercial, sendo que o consumo tem apresentado um franco crescimento. As anonáceas têm como característica o sabor adocicado pronunciado e perfume bem característico dos frutos, sendo seu uso voltado para o consumo in natura ou na forma de polpas processadas pela indústria. A antracnose, causada por Colletotrichum spp., tem se destacado como umas das principais doenças na cultura da atemóia (Annona cherimola x Annona squamosa), ocasionando danos em várias partes da planta e em frutos jovens, e também na pós-colheita, o que tem preocupado produtores da região devido a agressividade apresentada no campo. O presente trabalho teve como objetivo a identificação das espécies de Colletotrichum spp., de isolados do fungo coletados de atemóia da região de Botucatu, por meio de estudos de caracterização patogênica, cultural e morfológica. Para auxiliar, espécies de Colletotrichum, devidamente identificadas, foram obtidas e inclusas também nos estudos de caracterização. O teste de patogenicidade e a inoculação cruzada dos isolados em diferentes frutos foi efetuada utilizando-se discos de 5mm de diâmetro de BDA contendo micélio de Colletotrichum gloeosporioides, C. musae, C. acutatum e Colletotrichum spp. e procedendose com a utilização de diferentes frutas tropicais e subtropicais. Foram também realizadas a caracterização enzimática, onde avaliou-se a produção das enzimas proteases, celulases, amilases e lipases através da mensuração do diâmetro do halo formado em torno das colônias, comparou-se a morfologia das colônias e largura de conídios, sua forma e a presença ou não de microescleródios. Culturalmente estudou-se a coloração das colônias assim ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Annonaceae family has approximately 40 genera and more than 2,000 species; most of which are from tropical and subtropical regions. Many of these plants are commercially important and have been increasingly consumed. They present highly sweet taste and their fruits have a typical aroma. The fruits are consumed in natura or as industrially processed pulps. Anthracnose, caused by Colletotrichum sp., has been one of the main diseases that affects atemoya (Annona cherimola x Annona squamosa) crop, leading to injuries in several plant parts, as well as in young and post-harvested fruits. This is a worrying fact for producers of Botucatu region due to the severity of this disease in the field. The present study aimed at identifying anthracnose causal agent through pathogenic and enzymatic assays, besides cultural and morphological characterization of isolates collected from Annonaceae plants in Botucatu region. In addition, fruit cross-infection potential of Colletotrichum gloeosporioides isolates, already identified, from different tropical and subtropical species was evaluated to help in this identification. Enzymatic characterization consisted of analyzing the production of proteases, cellulases, amylases and lipases. The diameter of the halos formed around the colonies was measured in order to compare colony morphology and conidium width, shape and presence or absence of microsclerotia. Colonies were assessed as to coloration, growth rate at different temperatures, and growth in medium supplemented with Benomyl fungicide. Isolates were collected in the producing region of Botucatu. For the pathogenicity test, crossed inoculation was carried out in different ...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre