Darbo tikslas - ištirti augimo hormono geno įvairovę kiaulių tarpe ir nustatyti polimorfizmo įtaką kiaulių produktyvumo savybėms. Darbo uždaviniai: 1. Surinkti ir išanalizuoti mokslinę literatūrą apie kiaulių augimo hormoną bei jo genetinį pagrindimą. 2. Įdiegti kiaulių augimo hormono geno tyrimo metodiką LVA K.Janušausko Gyvūnų genetikos laboratorijoje. 3. Ištirti augimo hormono geno (GH) įvairovę kiaulių tarpe, naudojant sumodeliuotus pradmenis pagal geno seką. 4. Suformuoti fenotipinių požymių duomenų bazę. 5. Ištirti augimo hormono geno įvairovės įtaką kiaulių produktyvumo savybėms LVA Gyvūnų genetikos laboratorijoje įdiegta kiaulių augimo hormono geno, ištyrimo metodika. Pirmą kartą ištirtas augimo hormono geno polimorfizmas bei jo variantų įtaka kiaulių produktyvumo savybėms. Įdiegta metodika leidžia ištirti kiaulių genome augimo hormono geną, nustatyti alelių polimorfizmą ir įvertinti jo poveikį kiaulių fenotipinėms savybėms. Siūloma atsižvelgti į kiaulių genome esančio augimo hormono geno polimorfizmą, atrenkant ir parenkant gyvulius, turinčius ekonomiškai naudingus alelius, kad būtų galima pagerinti produktyviąsias savybes. / Object and tasks of work. 1. Analyse and summarize literature about growth hormone and it genetic background. 2. Introduce pig GH and GHR genes research methodology at K. Janušauskas Laboratory of Animal Genetics, LVA. 3. Investigate GH and GHR genes polymorphism and distribution of different alleles at Lithuanian pig population by PCR-RFLP method. 4. Create datebase of pig phenothypical traits 5. Determine correlation between restriction fragment length polymorphism (RFLP) in GH and GHR genes and pig phenothypical traits. Research methodology. 1. DNA extraction from hair roots. 2. PCR to amplify GH and GHR genes. 3. RFLP method. 3. Electrophoresis in agarose gel. 4. Staining with Etidium bromide. 5. Genotyping. 6. Stasitical analysis of data. Results and conclutions. Growth hormone and growth hormone receptor genes have been found to be polymorphic in tested pig population what gives possibility to use them as genetic markers. According to agregated GHRH/GHR1/GHR2 genotype the largest carcass and bacon half length had pigs with genotype ABG1G1G3G3, the lowest fat thickness with genotype BBG1G1G4G4, the largest muscularity with genotype BBG1G1G4G4, the largest makeweight had pigs with genotype ABG1G1G3G3, the smallest feed intake for 1 kg makeweigth had pigs with AAG2G2G3G4 genotype. Unifactorial analysis showed that the largest percent of meat traits variation explains agregated genotype GHRH/GHR1/GHR2 – from 10,8 percent to warm carcass weight to 29,2 percent to fat... [to full text]

Šio darbo tikslas – įvertinti žmogaus rekombinantinio augimo hormono Biosoma (UAB „Biotechna“, Vilnius, Lietuva) įtaką eksperimentinių gyvūnų (žiurkių) odos paviršinės mechaninės, visos odos mechaninės ir visos odos nudegimo žaizdos gijimui. Tyrimo uždaviniai: mechaniškai sukėlus eksperimentiniams gyvūnams odos paviršiaus iki tinklinio sluoksnio defektą, įvertinti Biosoma poveikį žaizdos gijimui, atliekant žaizdos dugno kolageno tinklo histomorfometrinius matavimus; eksperimento su gyvūnais metu mechaniškai sukėlus visos odos storio defektą, nustatyti Biosoma poveikį žaizdos gijimo greičiui, pagal jos kontūro kitimą; nustatyti temperatūros ir ekspozicijos parametrus siekiant sukelti standartizuotą visos odos nudegimo žaizdos sąlyčio modelį; įvertinti Biosoma įtaką eksperimentinių gyvūnų visos odos nudegimo žaizdos gijimui bei palyginti jį su visos odos mechanines žaizdos gijimu; įvertinti Biosoma įtaką gyvūnų visos odos nudegimo gijimui atliekant žaizdos dugno kolageno tinklo histomorfometrinius matavimus. Mūsų tyrimo duomenimis, eksperimentinių gyvūn���� (žiurkių), gavusių sisteminį anabolinį preparatą – žmogaus rekombinantinį augimo hormoną Biosoma 5,6 TV (2,0 mg/kg per parą injekcijas) visų tipų žaizdos – odos paviršinė mechaninė, visos odos mechaninė ir visos odos nudegimo – gijo greičiau, jos dugno vienas pagrindinių struktūrinių komponentų – fibrilinio kolageno tinklas buvo sintetinamas ir „brendo“ greičiau. / The aim of this study is to estimate the influence of recombinant human growth hormone Biosoma (UAB „Biotechna“, Vilnius, Lietuva) on different types of rats skin wound healing. We examined part and full thickness skin mechanical lesions and full thickness skin burns. The objectives: to estimate recombinant human growth hormone Biosoma impact on mechanically inflicted animal part thickness cutaneous wound healing according to histomorphometrical evaluation of the wound bed collagen; to evaluate recombinant human growth hormone Biosoma influence on full thickness skin mechanical wound healing in accordance with the wound contour changing; to choose the thermal exposition parameters for inflicting standard full thickness contact skin burn in animal; to evaluate the influence of recombinant human growth hormone Biosoma on animal full thickness skin burn healing and to compare it with the full thickness skin mechanical wound healing; to estimate the influence of recombinant human growth hormone Biosoma on animal full thickness burn ECM synthesis according to histomorphometrical wound bed collagen measurements. According to the research data, all types skin wounds (part and full thickness skin mechanical and full thickness burn) healed faster, their wound bed collagen fibers synthesis and maturation were faster in the experimental animals (rats) treated with rhGH Biosoma 5.6 IU (2.0 mg/kg a day) injections.

Abbrevations t – fluorescence lifetime j – rotational correlational time ([Ru(bpy)2(phen-ITC)]2+) – Bis-(bipyridine)-5-(isotiocyanatophenantrolin)-Ru(PF6-)2 Ab – antibody AF – Alexa Fluor 660 AF-hGH – with Alexa Fluor 660 labelled human growth hormone FITC – fluorescein isothiocyanate FITC-Ab – FITC labelled antibody FP – fluorescence polarization FRET – fluorescence resonance energy transfer hGH – human growth hormone PMI – N-(3-pyrene)maleimide PMI-hGH – human growth hormone labelled N-(3-pyrene)maleimide PVPPB – poly(N-vinyl-2-pyrolidone) with phenylboronic acid copolymer r – anisotropy RITC – rodamine B isothiocyanate RITC-hGH – with RITC labeled human growth hormone SDS-PAGE – sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis INTRODUCTION Relevance of the study. Human growth hormone (hGH) is a heterogeneous protein with several molecular forms (isoforms). Human growth hormone measurements are complicated because of the heterogeneous nature of hGH. Specific assays for each isoform are currently unavailable. Because the different antibodies used in immunoassays bind to a different spectrum of hGH isoforms, hGH concentrations measured by immunoassay are likely to depend on the particular antibody used. Moreover, because the distribution of the different hGH isoforms varies among individuals, the results from different immunoassays cannot be interrelated easily by using a single conversion factor. Fluorescence is by far the most important optical... [to full text]

Šioje daktaro disertacijoje buvo nagrinėjami paviršiaus plazmonų rezonanso (PPR) ir elektrocheminiai imuniniai jutikliai žmogaus augimo hormonui (ŽAH) ir antikūnams prieš žmogaus augimo hormoną (anti-ŽAH) nustatyti bei pritaikyti juos realių mėginių analizei. Šiame darbe buvo nagrinėjami nekryptingas ir kryptingas antikūnų imobilizavimo būdai PPR jutiklio lusto paviršiuje ir tirtas antikūno-antigeno komplekso formavimasis. Buvo nustatyta, kad tinkamiausias iš tirtų anti-ŽAH imobilizavimo PPR jutiklio lusto paviršiuje būdų yra kryptingas anti-ŽAH fragmentų gautų redukuojant anti-ŽAH 2-merkatoetilaminu (2-MEA) imobilizavimas. Atominės jėgos mikroskopijos pagalba buvo stebėti įvairiais būdais modifikuotų PPR jutiklio lusto paviršių skirtumai, kurie parodė, ar fragmentai gauti redukuojant anti-ŽAH buvo tinkamai prijungti prie auksinio PPR jutiklio lusto paviršiaus, o imuninis kompleksas susiformavo dėl specifinės antikūno-antigeno sąveikos. PPR ŽAH imuninis jutiklis pasižymi maža aptikimo riba (3,4 nmol/L), stabilumu, atrankamu. Aktyvus PPR jutiklio lusto paviršius visiškai regeneruojamas, o tai leidžia imuninio jutiklio daugkartinį panaudojimą. Tiesioginio ir netiesioginio tipo PPR anti-ŽAH imuniniai jutikliai buvo tiriami kombinuojant du analizinius metodus – PPR ir elektrocheminius (impulsinė amperometrija (PA) ir ciklinė voltamperometrija (CV)). Anti-ŽAH imuniniai jutikliai pasižymi maža aptikimo riba (0,056, 0,051 ir 0,027 nmol/L, atitinkamai CV, PPR ir PA), stabilumu... [toliau žr. visą tekstą] / In this doctoral thesis the development of surface plasmon resonance (SPR) and electrochemical (EL) immunosensors has been examined and used for the detection of human growth hormone (HGH) and antibodies against human growth hormone (anti-HGH). The designed immunosensors were applied for the real sample analysis. In this research work random and oriented techniques of anti-HGH immobilization on the SPR sensor chip were compared and the interaction between immobilized anti-HGH and HGH was evaluated. Fragments of anti-HGH immobilization via their native thiol-groups directly coupled to the SPR chip is the most suitable technique for the development of an SPR immunosensor for the HGH detection. Fragments of antibody were obtained by chemical reduction of 2-mercaptoethylamine (2-MEA). In our study atomic force microscopy has been successfully applied for the imaging of the the differently modified surfaces. The achieved results indicate how much adequately the fragments of anti-HGH molecules bound onto the gold substrate and how immune complexes were formed. SPR HGH immunosensor is suitable for HGH detection with a limit of detection (3.4 nmol/L), good stability and selectivity. Furthermore, active SPR-chip surface is fully regenerated that allows multiply usage of designed immunosensor. Direct and indirect anti-HGH immunosensor was studied by combining two analytical methods – SPR and EL (pulsedamperometry (PA) and cyclic voltammetry (CV)). The limit of detection values of... [to full text]

Šioje daktaro disertacijoje buvo nagrinėjami paviršiaus plazmonų rezonanso (PPR) ir elektrocheminiai imuniniai jutikliai žmogaus augimo hormonui (ŽAH) ir antikūnams prieš žmogaus augimo hormoną (anti-ŽAH) nustatyti bei pritaikyti juos realių mėginių analizei. Šiame darbe buvo nagrinėjami nekryptingas ir kryptingas antikūnų imobilizavimo būdai PPR jutiklio lusto paviršiuje ir tirtas antikūno-antigeno komplekso formavimasis. Buvo nustatyta, kad tinkamiausias iš tirtų anti-ŽAH imobilizavimo PPR jutiklio lusto paviršiuje būdų yra kryptingas anti-ŽAH fragmentų gautų redukuojant anti-ŽAH 2-merkatoetilaminu (2-MEA) imobilizavimas. Atominės jėgos mikroskopijos pagalba buvo stebėti įvairiais būdais modifikuotų PPR jutiklio lusto paviršių skirtumai, kurie parodė, ar fragmentai gauti redukuojant anti-ŽAH buvo tinkamai prijungti prie auksinio PPR jutiklio lusto paviršiaus, o imuninis kompleksas susiformavo dėl specifinės antikūno-antigeno sąveikos. PPR ŽAH imuninis jutiklis pasižymi maža aptikimo riba (3,4 nmol/L), stabilumu, atrankamu. Aktyvus PPR jutiklio lusto paviršius visiškai regeneruojamas, o tai leidžia imuninio jutiklio daugkartinį panaudojimą. Tiesioginio ir netiesioginio tipo PPR anti-ŽAH imuniniai jutikliai buvo tiriami kombinuojant du analizinius metodus – PPR ir elektrocheminius (impulsinė amperometrija (PA) ir ciklinė voltamperometrija (CV)). Anti-ŽAH imuniniai jutikliai pasižymi maža aptikimo riba (0,056, 0,051 ir 0,027 nmol/L, atitinkamai CV, PPR ir PA), stabilumu... [toliau žr. visą tekstą] / In this doctoral thesis the development of surface plasmon resonance (SPR) and electrochemical (EL) immunosensors has been examined and used for the detection of human growth hormone (HGH) and antibodies against human growth hormone (anti-HGH). The designed immunosensors were applied for the real sample analysis. In this research work random and oriented techniques of anti-HGH immobilization on the SPR sensor chip were compared and the interaction between immobilized anti-HGH and HGH was evaluated. Fragments of anti-HGH immobilization via their native thiol-groups directly coupled to the SPR chip is the most suitable technique for the development of an SPR immunosensor for the HGH detection. Fragments of antibody were obtained by chemical reduction of 2-mercaptoethylamine (2-MEA). In our study atomic force microscopy has been successfully applied for the imaging of the the differently modified surfaces. The achieved results indicate how much adequately the fragments of anti-HGH molecules bound onto the gold substrate and how immune complexes were formed. SPR HGH immunosensor is suitable for HGH detection with a limit of detection (3.4 nmol/L), good stability and selectivity. Furthermore, active SPR-chip surface is fully regenerated that allows multiply usage of designed immunosensor. Direct and indirect anti-HGH immunosensor was studied by combining two analytical methods – SPR and EL (pulsedamperometry (PA) and cyclic voltammetry (CV)). The limit of detection values of... [to full text]