Orientadores: Humberto Santo Neto, Maria Julia Marques / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-19T06:25:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Somazz_MarcoCesar_D.pdf: 2572857 bytes, checksum: a0a440a913033721ce0839d773014b1f (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: Foram realizados autotransplantes de retalhos musculares em 19 ratos wistar fêmeas com 6 a 7 semanas de idade. Em um grupo de 6 animais utilizou-se o músculo tibial anterior; um segundo grupo formado por S ratos recebeu retalho obtido através do músculo sóleo e, o terceiro com 5 animais serviu para análise da morfologia normal do nervo ciático. Os músculos a serem enxertados receberam unia injeção de cloridrato de lidocaína (xilocaínaR) a BX, sendo que nos casos do músculo tibial anterior o volume foi de 0,3 ml e no grupo do músculo sóleo foi de 0,1 ml. Estes procedimentos -Foram realizados sob anestesia induzida por inalação de éter etílico e executados na perna direita dos animais. Após vinte e quatro horas, os ratos foram novamente anestesiados com uma mistura de cloridrato de cetamina (Ketalar1*5) e cloridrato de tiazina (RumpumR) na dose de 0,3 ml/i00 de peso corporal. A seguir a região glútea e posterior da coxa esquerda foram depiladas. Procedeu-se, então, a retirada do Fragmento museu1 ar com auxilio do microscópio cirúrgico e realizada uma fina dissecção do retalho, deixando-o com um diâmetro ligeiramente superior ao do nervo ciático e comprimento de 5 mm nos casos do tibial anterior e de 3-4 mm nos casas do músculo sóleo. Ainda sob lupa, a pele da região glútea e posterior da coxa esquerda foi aberta e o nervo ciático exposto. Com uma tesoura microcirúrgica seccionou-se o nervo e retirou-se um fragmento de í mm de comprimento. Suturou-se, então, o implante entre os cotos nervosos com uni ponto em cada extremidade com -Fio monafilamento nylon 10.0 Dermalon. Após um período de sobrevida de 50 dias, os ratos Foram anestesiados e, com o auxílio do microscópio cirúrgico o nervo ciático -Foi exposto e fixado in situ com fixador Karnovsky (Í965). 0 fixador a A°C foi deixado banhando o nervo por i0 minutos. A seguir, o nervo foi retirado e seccionado em dois fragmentos, um correspondendo à região do implante e o outro ao coto distai. Estes foram então processados para microscopia eletrônica. Observamos que, o tratamento empregado na preparação dos retalhos musculares permitiu o crescimento axortal a partir do coto proximal. Estes atravessaram a região do implante e colonizaram o coto distai. Isto foi possível uma vês que, o cloridrato de lidocaína provocou intensa mionecrose tendo como resultado a formação de tubos de membrana basal muscular "vazios", através do qual ocorreu a regeneração dos axônios / Abstract: Evacuated muscle is a possible substitute for nerve autografts in the repair of damage peripheral nerves. Previous experiments have shown that killed or evacuated muscle grafts are as effective as nerve autografts for briding gaps of up to A mm between proximal and distal nerve stumps. Evacuated muscle rafts are made of extracellular matrix components, which are good substrates for axon growth in vitro. However there are some difficults to obtain the muscle autografts. In the present we have studied the possibility of a new method to obstain this graft. In forty adult female mice the tibialis anterior muscle (8 animals) and soleus muscle (6 animals) were injected by 0,3 ml and 0,1 ml of the lidocaine hydrochloride respectively. Twenty¿ for hours later each animal receveid a muscle autograft. There the ciatic nerve left was seccionated and the graft was inserid by a 10.0 their mononylon surgical under microscopic. Fifty days after, the animals that received the muscle graft, were anest het ised by ket amine hydrochloride and xyl&;£ine and the graft region and the distal end as well, were processed by eletronic microscopic methods. Our results showed the fifty days after implants both region graft and distal end were recolonised by mielinic and amielinic axons. The ultrastructural aspects, remind that ones observed by others methods of nerve repair by muscle graft / Doutorado / Anatomia / Doutor em Ciências

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-05T11:46:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_AnaliseImunohistologicaDesenvolvimento.PDF: 2859553 bytes, checksum: 2230002045f35242ef2d2c221a773945 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-09T21:47:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_AnaliseImunohistologicaDesenvolvimento.PDF: 2859553 bytes, checksum: 2230002045f35242ef2d2c221a773945 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-09T21:47:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_AnaliseImunohistologicaDesenvolvimento.PDF: 2859553 bytes, checksum: 2230002045f35242ef2d2c221a773945 (MD5) Previous issue date: 2014-12-11 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste trabalho foi estudar a foliculogênese ovariana de Saimiri sciureus. Para tanto, foi avaliada a expressão de fatores intra-ovarianos ligados ao desenvolvimento, inibição folicular e proliferação celular, além da investigação dos efeitos do pré-tratamento com o análogo da vitamina E, Trolox®, sobre a viabilidade e funcionalidade folicular, índice de apoptose, proliferação celular, vascularização e fibrose, após o auto-transplante do tecido ovariano fresco. Foi possível imunolocalizar pela primeira vez a expressão das proteínas: fator crescimento e diferenciação-9 (GDF-9), c-Kit/Kit Ligante e Ki-67 e confirmar a expressão do hormônio anti-mülleriano (AMH) em diferentes fases do desenvolvimento folicular de macaco de cheiro. No que diz respeito a pré-incubação com o antioxidante Trolox®, pôde-se observar uma melhora na sobrevivência folicular após o autotransplante, diminuição da taxa de apoptose em células do estroma, porém, aumento nas áreas de fibrose no tecido. Os nossos resultados sugerem que o tecido ovariano fresco pode ser incubado e enxertado sem grande impacto sobre o crescimento folicular precoce e a morfologia após auto-transplante subcutâneo por curto período. Acreditamos que nossos resultados oferecem uma contribuição importante para a compreensão do processo de foliculogênese em macacos neotropicais. Este conhecimento é uma ferramenta importante para avaliar a viabilidade folicular e funcionalidade após a criopreservação, transplante de tecido ovariano e cultivo in vitro de folículos pré-antrais, em especial para os animais com risco de extinção e às mulheres com risco de perda de fertilidade devido à quimioterapia e radioterapia. / The main objective of the present work was to study ovarian folliculogenesis in Saimiri sciureus. Therefore, we evaluated the expression of intra-ovarian factors related with the follicular development, inhibition and cell proliferation, as well as investigation the effects of pretreatment with vitamin E analogue, Trolox, on the viability and follicular function, apoptosis index, cell proliferation, vascularization and fibrosis after auto-transplanted of fresh ovarian tissue. It was possible for the first time imuno localize proteins expressed as: growth and differentiation factor -9 (GDF -9), c- kit/Kit Ligand and Ki-67 and confirm the expression of anti-Mullerian Hormone (AMH) in different stages of follicular development in squirrel monkey ovary. Regarding pre-incubation with the Trolox antioxidant, it can improves follicular survival after autotransplantation, decrease apoptosis rates in stromal cells, although increase areas of fibrosis after graft. Our results suggest that fresh ovarian tissue can be grafted and incubated without major impact on early follicular growth and morphology after subcutaneous autotransplantation for a short-term. We believe that our results provide an important contribution to understanding the process of folliculogenesis in neotropical monkeys. This knowledge is an important tool to evaluate follicular viability and functionality after cryopreservation of ovarian tissue transplantation and in vitro culture of early follicles, especially for animals at risk of extinction and women that are undergoing to chemotherapy and radiation with risk of loss fertility.

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 NayaraAC_DISSERT.pdf: 1401697 bytes, checksum: 483ad3e8e94846f136ca4ca2f701d984 (MD5) Previous issue date: 2013-08-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / At birth , domestic animals exhibit a large stock of oocytes which only a minimum reaches meiotic maturation. These oocytes contained in primordial follicles are used for the development of studies in order to clarify issues related to the activation of primordial follicles and growth as well as promote the development of new contraceptive methods and new techniques for the recovery of fertility through its cultivation. Among the ovarian culture stands out in vivo , also known as transplantation, has as main objectives to promote the return of fertility in women undergoing treatment gonadotoxic and the preservation of genetic diversity of endangered animals. In this sense the research with the in vivo culture aims to determine which methodology seems more feasible and allows better maintenance and development of the transplanted tissue. Thus , this study aimed to assess the quality of ovarian follicles after transplantation under the kidney capsule of mice. For this, we used 10 female mice ( Mus musculus ) , divided into two groups , Group 1 : transplants removed after 15 days from the insertion of the fragment , group 2 after 30 days. It has been established the control group which are the ovarian cortical fragments removed directly for histological processing. Through evaluation by light microscopy , it was observed that there was a progressive reduction in the number of morphological normal follicles with progression of duration to 15 for 30 days of transplants. Regarding the number of normal preantral, only group 2 did not differ statistically from the control. The normal antral follicles in groups 1 and 2 did not differ but were significantly lower than the control group. Regarding the evaluation of apoptotic, we obtained a higher reaction to Caspase -3 in antral follicles in the three groups. According to the results obtained in this study, subcapsular renal autotransplantation technique has proved satisfactory for maintenance and study of preantral follicles / Ao nascerem, os animais domésticos apresentam uma grande reserva de oócitos dos quais apenas um número mínimo atinge a maturação meiótica. Estes oócitos contidos em folículos pré-antrais são utilizados para o desenvolvimento de estudos com o intuito tanto de esclarecer questões relacionadas à ativação e crescimento de folículos primordiais quanto promover o desenvolvimento de novos métodos de contracepção e novas técnicas de recuperação da fertilidade através do seu cultivo. Dentre os tipos de cultivo ovariano destaca-se o in vivo, também conhecido por transplante, tem como principais objetivos promover o retorno da fertilidade em mulheres submetidas a tratamento gonadotóxico e a preservação da diversidade genética de animais ameaçados de extinção. Neste sentido, as pesquisas com o com cultivo in vivo, almejam determinar qual metodologia mostra-se mais viável e permite uma melhor manutenção e desenvolvimento do tecido transplantado. Desta forma, o presente estudo objetivou avaliar a qualidade dos folículos ovarianos após o autotransplante sob a cápsula renal de camundongas. Para isso, foram utilizadas 10 camundongas (Mus musculus), divididas em dois grupos, Grupo 1: remoção dos transplantes após 15 dias a partir da inserção do fragmento, grupo 2: após 30 dias. Ainda foi estabelecido o grupo controle que corresponde a fragmentos corticais removidos do ovário destinados diretamente para o processamento histológico. Através da avaliação por microscopia ótica, observou-se que houve uma redução no número de folículos morfologicamente normais com a progressão do tempo de duração dos transplantes de 15 para 30 dias. Com relação ao número folículos pré-antrais normais apenas o grupo 2 não diferiu estatisticamente do controle. Os folículos antrais normais dos grupos 1 e 2 não diferiram entre si mas apresentaram-se significativamente inferiores ao grupo controle. Quanto à avaliação da ocorrência de apoptose, obteve-se uma maior reação à Caspase-3 em folículos antrais nos três grupos. De acordo com os resultados obtidos no presente estudo, o autotransplante subcapsular renal demonstrou ser uma técnica satisfatória para manutenção e estudo de foliculos pré-antrais

Os estudos abordando a regeneração dos tecidos dentários ganharam uma nova perspectiva com a utilização das células-tronco. E novas perspectivas têm surgido com a bioengenharia tecidual e as terapias periodontais e pulpares regeneradoras. O objetivo deste trabalho foi desenvolver o modelo experimental de autotransplante em ratos visando compará-lo à técnica de reimplante e estudar a capacidade terapêutica das células da medula óssea em diferentes biomateriais utilizados como matriz para a terapia de células-tronco no reparo dos tecidos dentais. Foram utilizados 23 ratos Wistar divididos em grupos de 1, 3, 15 e 60 dias para as técnicas de reimplante e autotransplante. Os grupos com injeção de células-tronco (CT) foram: (1) grupo de 3 dias, combinado à técnica de reimplante; (2) grupo de 15 dias com ambas as técnicas. Blocos contendo os três dentes molares superiores de cada lado dos ratos foram removidos, feitas radiografias periapicais e as peças foram processadas para inclusão em parafina. Foram avaliadas a espessura do ligamento periodontal (LPD) comparada entre os diferentes grupos e a morfologia celular e matriz extracelular relacionadas à superfície radicular, ao osso alveolar e à porção média do LPD, além das células da polpa dental de cada grupo. As células isoladas a partir da medula-óssea foram incubadas por 24h, 48h, e 72h em placas de cultura contendo membranas de colágeno bovino tipo I - CollaTape (Integra LifeSciences Corporation, Plainsboro, NJ, USA), enxerto ósseo - Extra Graft XG-13 (Silvestre Labs Quimica e Farmaceutica LTDA, RJ, Brazil) ou um dente molar de rato. Os espécimes foram observados em um microscópio invertido para contagem de células e processadas para observação no microscópio eletrônico de varredura (MEV). Os grupos de 1 e 3 dias apresentaram medidas de LPD significativamente maiores para a técnica de autotransplante quando comparadas ao reimplante. O grupo de 3 dias com CT não apresentou alterações pulpares significativas, diferente do controle (sem CT) O grupo de 15 dias com CT apresentou as mesmas características histológicas do grupo sem injeção de CT. A observação ao MEV dos biomateriais revelou que as células apresentaram pouca adesão e proliferação no enxerto ósseo e no cemento dentário quando comparados à membrana colágena. A técnica de reimplante associada à injeção de células-tronco sugere alguma influência da terapia com as células-tronco sobre a polpa. As distâncias aumentadas no LPD com a técnica de autotransplante podem não influenciar tanto o sucesso da técnica. As células mesenquimais da medula óssea possuem grande potencial para colonizarem a membrana colágena CollaTape que mostrou vantagens sobre o enxerto ósseo Extra Graft XG-13 como biomaterial para a aderência e a proliferação de células mononucleares da medula óssea, permitindo a diferenciação destas células. / The studies on the regeneration of dental tissues have gained a new perspective with the use of stem cells. And new perspectives have appeared with bioengineering and pulp and periodontal regenerative therapies. The aim of this study was to develop an experimental model of autotransplantation in rats in order to compare it with tooth reimplant technique and to study the therapeutic potential of bone marrow cells in different biomaterials used as scaffolds for stem cell therapy to repair dental tissues. 23 rats divided in 1, 3, 15 and 60 days groups were used for the techniques of tooth reimplant and autotranplant. The groups with stem cell injection (CT) were: (1) 3 days, combined with tooth replant technique; (2) 15 days with both techniques. Blocks containing the three molar teeth from each side of the rats superior jaws were removed, periapical radiographs were taken and the specimens were processed and embedded in paraffin. LPD thickness among different groups and cell morphology and extracellular matrix related to the root surface, alveolar bone and the middle portion of the LPD, and dental pulp cells were evaluated and compared from each group. Cells isolated from bone marrow were incubated for 24h, 48h and 72h in culture plates containing membranes of bovine collagen type I - CollaTape (Integra LifeSciences Corporation, Plainsboro, NJ, USA), bone graft - Extra Graft XG-13 (Silvestre Labs Chemical and Pharmaceutical Ltda, RJ, Brazil) or a mouse molar tooth. The specimens were observed using an inverted microscope for cell count and processed for observation in a scanning electron microscope (SEM). Groups 1 and 3 days showed LPD thickness significantly higher for tooth autotransplant technique when compared to reimplant. The group of 3 days with stem cells showed no significant pulp changes different from control (without stem cells). Group of 15 days with stem cells showed the same histological characteristics of the group without injection of stem cells. The biomaterials observation at SEM revealed that cells in the bone graft and in tooth cementum showed poor adhesion and prolifetarion when compared to collagen membrane The tooth reimplant technique associated with injection of stem cells suggests some influence of stem cells therapy on the pulp. The increased distances in LPD with tooth autotranplant technique may not influence the success of the technique. The bone marrow mesenchymal cells have great potential to colonize the collagen membrane CollaTape that showed advantages over bone graft Extra Graft XG-13 as a biomaterial for adhesion and proliferation of bone marrow mononuclear cells, allowing the differentiation of these cells.

Os estudos abordando a regeneração dos tecidos dentários ganharam uma nova perspectiva com a utilização das células-tronco. E novas perspectivas têm surgido com a bioengenharia tecidual e as terapias periodontais e pulpares regeneradoras. O objetivo deste trabalho foi desenvolver o modelo experimental de autotransplante em ratos visando compará-lo à técnica de reimplante e estudar a capacidade terapêutica das células da medula óssea em diferentes biomateriais utilizados como matriz para a terapia de células-tronco no reparo dos tecidos dentais. Foram utilizados 23 ratos Wistar divididos em grupos de 1, 3, 15 e 60 dias para as técnicas de reimplante e autotransplante. Os grupos com injeção de células-tronco (CT) foram: (1) grupo de 3 dias, combinado à técnica de reimplante; (2) grupo de 15 dias com ambas as técnicas. Blocos contendo os três dentes molares superiores de cada lado dos ratos foram removidos, feitas radiografias periapicais e as peças foram processadas para inclusão em parafina. Foram avaliadas a espessura do ligamento periodontal (LPD) comparada entre os diferentes grupos e a morfologia celular e matriz extracelular relacionadas à superfície radicular, ao osso alveolar e à porção média do LPD, além das células da polpa dental de cada grupo. As células isoladas a partir da medula-óssea foram incubadas por 24h, 48h, e 72h em placas de cultura contendo membranas de colágeno bovino tipo I - CollaTape (Integra LifeSciences Corporation, Plainsboro, NJ, USA), enxerto ósseo - Extra Graft XG-13 (Silvestre Labs Quimica e Farmaceutica LTDA, RJ, Brazil) ou um dente molar de rato. Os espécimes foram observados em um microscópio invertido para contagem de células e processadas para observação no microscópio eletrônico de varredura (MEV). Os grupos de 1 e 3 dias apresentaram medidas de LPD significativamente maiores para a técnica de autotransplante quando comparadas ao reimplante. O grupo de 3 dias com CT não apresentou alterações pulpares significativas, diferente do controle (sem CT) O grupo de 15 dias com CT apresentou as mesmas características histológicas do grupo sem injeção de CT. A observação ao MEV dos biomateriais revelou que as células apresentaram pouca adesão e proliferação no enxerto ósseo e no cemento dentário quando comparados à membrana colágena. A técnica de reimplante associada à injeção de células-tronco sugere alguma influência da terapia com as células-tronco sobre a polpa. As distâncias aumentadas no LPD com a técnica de autotransplante podem não influenciar tanto o sucesso da técnica. As células mesenquimais da medula óssea possuem grande potencial para colonizarem a membrana colágena CollaTape que mostrou vantagens sobre o enxerto ósseo Extra Graft XG-13 como biomaterial para a aderência e a proliferação de células mononucleares da medula óssea, permitindo a diferenciação destas células. / The studies on the regeneration of dental tissues have gained a new perspective with the use of stem cells. And new perspectives have appeared with bioengineering and pulp and periodontal regenerative therapies. The aim of this study was to develop an experimental model of autotransplantation in rats in order to compare it with tooth reimplant technique and to study the therapeutic potential of bone marrow cells in different biomaterials used as scaffolds for stem cell therapy to repair dental tissues. 23 rats divided in 1, 3, 15 and 60 days groups were used for the techniques of tooth reimplant and autotranplant. The groups with stem cell injection (CT) were: (1) 3 days, combined with tooth replant technique; (2) 15 days with both techniques. Blocks containing the three molar teeth from each side of the rats superior jaws were removed, periapical radiographs were taken and the specimens were processed and embedded in paraffin. LPD thickness among different groups and cell morphology and extracellular matrix related to the root surface, alveolar bone and the middle portion of the LPD, and dental pulp cells were evaluated and compared from each group. Cells isolated from bone marrow were incubated for 24h, 48h and 72h in culture plates containing membranes of bovine collagen type I - CollaTape (Integra LifeSciences Corporation, Plainsboro, NJ, USA), bone graft - Extra Graft XG-13 (Silvestre Labs Chemical and Pharmaceutical Ltda, RJ, Brazil) or a mouse molar tooth. The specimens were observed using an inverted microscope for cell count and processed for observation in a scanning electron microscope (SEM). Groups 1 and 3 days showed LPD thickness significantly higher for tooth autotransplant technique when compared to reimplant. The group of 3 days with stem cells showed no significant pulp changes different from control (without stem cells). Group of 15 days with stem cells showed the same histological characteristics of the group without injection of stem cells. The biomaterials observation at SEM revealed that cells in the bone graft and in tooth cementum showed poor adhesion and prolifetarion when compared to collagen membrane The tooth reimplant technique associated with injection of stem cells suggests some influence of stem cells therapy on the pulp. The increased distances in LPD with tooth autotranplant technique may not influence the success of the technique. The bone marrow mesenchymal cells have great potential to colonize the collagen membrane CollaTape that showed advantages over bone graft Extra Graft XG-13 as a biomaterial for adhesion and proliferation of bone marrow mononuclear cells, allowing the differentiation of these cells.