Submitted by Tatiana Silva (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2013-02-08T13:31:12Z No. of bitstreams: 1 sabina_v_montero_ioc_bcm_0053_2011.pdf: 2783003 bytes, checksum: 58d0698eae0f2913066b128813d0d416 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-02-08T13:31:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sabina_v_montero_ioc_bcm_0053_2011.pdf: 2783003 bytes, checksum: 58d0698eae0f2913066b128813d0d416 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de janeiro, RJ, Brasil / Pacientes infectados pelo HIV-1 apresentam aumentada permeabilidade intestinal, a qual permite a passagem para a circulação sanguínea de produtos microbianos, fenômeno conhecido por translocação microbiana. Dentre os produtos translocados são encontrados vários ligantes dos receptores do tipo Toll (TRL). A ativação de TLR desencadeia uma complexa cascata de sinalização, induz a síntese de diversas citocinas, e modula a função de células dendríticas (CDs), macrófagos e linfócitos, células-alvo da infecção pelo HIV-1. Estudos experimentais mostram que a ativação de TLRs influencia a replicação do HIV-1, como, por exemplo, a ativação de TLR-4 e TLR-3 resulta em diminuição da replicação viral. No entanto, os estudos relacionados à ativação de TLR-2 e HIV-1 são escassos. Assim, em nosso estudo, resolvemos analisar o efeito da ativação de TLR-2 sobre a replicação do HIV-1 em PBMCs e macrófagos primários humanos infectados in vitro. Para isto, PBMCs e macrófagos obtidos de doadores saudáveis foram infectados pelo HIV-1 e em seguida expostos ao Zymosaqn ou Pam3CSK4, ambos ligantes de TLR-2, e a replicação viral foi avaliada pela detecção da proteína viral p24 nos sobredanantes de cultura. Vimos que tanto o Zymosan quanto o Pam3CSK4 inibem de forma potente (até 90%) a replicação do isolado Ba-L (trópico para CCR5) de HIV-1 em PBMCs e macrófagos, assim como isolados primários trópicos para CCR5 e CXCR4. o tratamento das células com os ligantes de TLR-2 antes da infecção também induziu a queda da replicação viral. Ambos os ligantes de TLR-2 induziram aumento da produção das β-quimiocinas CCL3, CCL4 e CCL5 em macrófagos e PBMCs, e de IL-10 em macrófagos. A imuno-neutralização das β-quimiocinas diminuiu expressivamente o seu efeito inibitório sobre a replicação do HIV-1,. sugerindo que estas moléculas participam da inibição da replicação do HIV-1 resultante da ativação de TLR2. no entanto, a neutralização do receptor de IL-10 não produziu resultados semelhantes. A expressão dos receptores celulares CD4, CCR5 e CXCR4 não foi alterada quando macrófagos e PBMCs foram tratados com Pam3CSK4. observamos, ainda, que a proteína quinase R (PKR) é ativada por Pam3CSK4 tanto em macrófagos quanto em PBMCs. Estes resultados mostram que a ativação de TLR-2 resulta em uma potente inibição da replicação do HIV-1 em PBMCs e macrófagos, e sugerem que as β-quimiocinas estão envolvidas neste fenômeno. Nossos achados ressaltam o papel anti-HIV-1 resultante da ativação de TLR-2, e indicam que novos estudos devem ser realizados para esclarecer, com maior profundidade, os mecanismos envolvidos neste processo / Patients infected with HIV-1 exhibit increased intestinal permeability, which allows passage into the bloodstream of microbial products, a phenomenon known as microbial translocation. Among the products are found translocated several ligands of Toll-like receptors (TRL). The activation of TLR triggers a complex cascade of signaling, inducing synthesis of different cytokines, and modulates the function of dendritic cells (DCs), macrophages and lymphocytes, target cells from infection by HIV-1. Experimental studies have shown that activation of TLRs influences the replication of HIV-1, for example, activation of TLR-4, TLR-3 results in decreased viral replication. However, studies related to the activation of TLR-2 and HIV-1 are scarce. Thus, in our study, we decided to analyze the effect of the activation of TLR-2 on HIV-1 replication in PBMCs and human primary macrophages infected in vitro. For this purpose, PBMC and macrophages obtained from healthy donors were infected with HIV-1 and then exposed to Zymosaqn or Pam3CSK4, both from the TLR-2 ligands, and viral replication was assessed by the detection of viral protein p24 in culture sobredanantes. We have seen that both Zymosan as potently inhibit Pam3CSK4 (up to 90%) replication isolated Ba-L (CCR5 tropic) HIV-1 PBMC and macrophages, as well as primary isolates tropic CCR5 and CXCR4. treating the cells with the ligands of TLR-2 prior to infection also induced decrease in viral replication. Both ligands of TLR-2 induced increased production of β-chemokines CCL3, CCL4 and CCL5 in PBMC and macrophages, and IL-10 in macrophages. The immuno-neutralization of β-chemokine significantly reduced their inhibitory effect on the replication of HIV-1. suggesting that these molecules participate in inhibiting the replication of HIV-1 resulting from activation of TLR2. However, the neutralization of IL-10 did not produce similar results. The expression of cell receptors CD4, CCR5 and CXCR4 was not altered when macrophages and PBMCs were treated with Pam3CSK4. noted further that protein kinase R (PKR) is activated by Pam3CSK4 in both macrophages and in PBMCs. These results show that activation of TLR-2 results in a potent inhibition of HIV-1 replication in PBMC and macrophages, and suggest that β-chemokines are involved in this phenomenon. Our findings highlight the role of anti-HIV-1 resulting from the activation of TLR-2, and suggest that further studies should be conducted to clarify, in greater depth, the mechanisms involved in this process