Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 422149.pdf: 415747 bytes, checksum: c509f9409deb999a7bde0e7f31c283e9 (MD5) Previous issue date: 2010-01-22 / A Salmonella Enteritidis ? uma das principais bact?rias causadoras de gastrenterite, tamb?m podendo ser respons?vel por doen?as sist?micas. A adequada caracteriza??o deste microrganismo ? essencial nos estudos epidemiol?gicos. Neste contexto, este estudo avaliou a utiliza??o de dois m?todos moleculares, Tipifica??o por Sequenciamento de M?ltiplos loci (MLST) e An?lise de Fragmentos Polim?rficos Amplificados e Fluorescentes (FAFLP), para a diferencia??o de 32 isolados de S. Enteritidis oriundos de diferentes fontes do sul do Brasil, bem como de cinco isolados de S. Enteritidis provenientes de outras ?reas geogr?ficas. Tamb?m foram inclu?dos neste estudo quatro isolados pertencentes a outros sorovares (S. Panama, S. Senftenberg, S. Typhimurium e Salmonella [4,5:-:1,2]. As duas t?cnicas escolhidas para este trabalho j? foram empregadas concomitantemente para analisar diferentes sorotipos de Salmonella, mas este estudo ? o primeiro a utiliz?-las para a diferencia??o de um mesmo grupo de isolados de S. Enteritidis. O esquema desenvolvido para o MLST incluiu a amplifica??o de fragmentos de dois genes constitutivos (hemD e mdh) combinado com dois genes de virul?ncia (ssaQ e slyA), aumentando, assim, a capacidade discriminat?ria do m?todo. Ambas as t?cnicas apresentaram altos ?ndices de poder discriminat?rio, calculados pelo ?ndice de diversidade de Simpson, 0,99 e 0,88 para FAFLP e MLST, respectivamente. Al?m disso, os m?todos avaliados tamb?m mostraram-se eficientes na discrimina??o de isolados de diferentes sorovares de Salmonella. Entretanto, a FAFLP e a MLST n?o foram capazes de diferenciar isolados provavelmente n?o relacionados epidemiologicamente, bem como n?o agruparam isolados pertencentes a um mesmo fagotipo. Desta forma, os resultados obtidos sugerem que ambas as t?cnicas podem ser ferramentas ?teis para a an?lise epidemiol?gica molecular de isolados de Salmonella, inclusive para um sorovar com grande homogeneidade gen?tica como a S. Enteritidis.

Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-09-08T13:51:47Z No. of bitstreams: 1 OtavioHenriqueB.PintoDissertacao2017.pdf: 3191289 bytes, checksum: b7b005d77190f465fe0685851ff5f090 (MD5) / Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-09-08T13:52:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 OtavioHenriqueB.PintoDissertacao2017.pdf: 3191289 bytes, checksum: b7b005d77190f465fe0685851ff5f090 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-08T13:52:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 OtavioHenriqueB.PintoDissertacao2017.pdf: 3191289 bytes, checksum: b7b005d77190f465fe0685851ff5f090 (MD5) Previous issue date: 2017-03-29 / Acidobacteria is one of the most abundant phyla in soil; however, it is not yet known the reasons for their success in terrestrial habitats. This characteristic may be due to mechanisms of resistance as well as the large amount of glycosyl hydrolases and transferases present in Acidobacteria. Therefore, this study aimed to investigate mechanisms of resistance that may contribute to the abundance of Acidobacteria in soil. In addition, the degradation of cellulose was investigated, to understand its participation in processes of plant biomass degradation. In this study, a member of subdivision 1 of Acidobacteria, Occallatibacter savannae AB23 was used as model. This isolate was taxonomically characterized and cellulose degradation and carotenoid production were evaluated. The degradation of cellulose was evaluated using carboxymethylcellulose (CMC). The pigments were identified since this bacterium produced several carotenoids under different environmental stimuli. The results showed that the isolate AB23 can assimilate CMC, however in a very slow way, requiring 2 months for the visualization of colonies and 1 year to visualization of biomass in liquid medium. For this isolate, endoglucanases were found associated with the cell fraction of culture. In addition, cellobiose has been shown to be a repressor and lactose an inducer of endoglucanases expression. It was possible to observe the production of carotenoids in AB23. By mass spectrometry, it was possible to find ions related to carotenoids: ?? -carotene, neurosporene, lycopene, ??-carotene, ??-carotene, phytoene and phytofluene. These carotenoids might be used as a resistance mechanism since they are produced in response to stress caused by light. However, the presence of vitamins, oxygen and trace elements are essential for carotenoid production. The characteristics found in this work may be one of the mechanisms of persistence and / or resistance that confer abundance for Acidobacteria in soil. / Acidobacteria ?? um dos filos mais abundantes no solo, entretanto, n??o se conhece as raz??es que levam a essa abund??ncia. Estudos indicam que essa caracter??stica pode ser devido a mecanismos de resist??ncia e a grande quantidade de glicosil hidrolases e transferases presentes em Acidobacteria. Assim, esse estudo teve como objetivo investigar mecanismos de resist??ncia que podem contribuir para a abund??ncia de Acidobacteria no solo. Al??m disso, foi investigada a degrada????o de celulose em Acidobacteria, procurando entender sua participa????o em processos de degrada????o de material originado de plantas. Neste estudo foi utilizado como modelo Occallatibacter savannae AB23. Este isolado foi caracterizado taxonomicamente e foram avaliadas a degrada????o de celulose e produ????o de caroten??ides. A degrada????o de celulose foi avaliada utilizando-se carboximetilcelulose (CMC). Para os pigmentos, foram identificados quais carotenoides essa bact??ria produz e os est??mulos que levam a sua produ????o. Os resultados mostraram que o isolado AB23 consegue assimilar CMC, no entanto de uma forma muito lenta, sendo necess??rios 2 meses para a visualiza????o de col??nias. Para este isolado, as endoglucanasases foram encontradas associadas ?? fra????o celular da cultura. Al??m disso, celobiose mostrou ser um repressor e a lactose um indutor da express??o de endocglucanases. Foi poss??vel observar a produ????o de pigmentos em AB23. Por espectrometria de massa, foi poss??vel encontrar ??ons relacionados aos carotenoides: ??-caroteno, neurosporeno, licopeno, ??-caroteno, ??-caroteno, fitoeno e fitoflueno. Estes devem estar sendo empregados como um mecanismo de resist??ncia, uma vez que eles s??o produzidos em resposta ao estresse causado pela luz. No entanto a presen??a de vitaminas, oxig??nio e elementos tra??o s??o essenciais para produ????o desses pigmentos. As caracter??sticas encontradas neste trabalho podem ser um dos mecanismos de persist??ncia e/ou resist??ncia que conferem abund??ncia para Acidobacteria no solo.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-12-23T13:17:24Z No. of bitstreams: 1 DIS_BRUNO_DALLAGNOL_PARCIAL.pdf: 1004622 bytes, checksum: f24e6bdb92018aba52853bc890c3dc2c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-23T13:17:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_BRUNO_DALLAGNOL_PARCIAL.pdf: 1004622 bytes, checksum: f24e6bdb92018aba52853bc890c3dc2c (MD5) Previous issue date: 2015-03-18 / Anaplasma marginale is a vector-borne pathogen that causes a disease known as anaplasmosis. To date, there are no sequenced genomes of Brazilian strains available. The aim of this work was to compare whole genomes of Brazilian strains of A. marginale (Palmeira and Jaboticabal) with genomes of strains from other regions (North-American and Australian strains). Genome sequencing was performed by next-generation sequencing. Reads were mapped using the genome of the Florida strain of A. marginale as a reference sequence. Identification of single nucleotide polymorphisms (SNPs) and insertions/deletions (INDELs) was performed. Data showed significant differences between the two Brazilian strains, and their comparison with North-American strains (Florida and St. Maries) revealed more nucleotide differences than with Australian strains (Gypsy Plains and Dawn). These results shed light into the evolutionary history of A. marginale and provide the first genome information of South American isolates. Assessing sequences of the genomes of strains from different regions is essential to increase knowledge of the pan-genome of this rickettsia. / Anaplasma marginale ? um pat?geno transmitido por vetores que causa uma doen?a conhecida como anaplasmose. At? o momento, n?o h? genomas sequenciados de cepas brasileiras dispon?veis. O objetivo deste trabalho foi comparar genomas completos de cepas brasileiras de A. marginale (Palmeira e Jaboticabal) com genomas de cepas de outras regi?es (cepas norte-americanas e australianas). O sequenciamento do genoma foi realizado por sequenciamento de alto rendimento. As reads foram mapeadas utilizando o genoma da cepa Florida de A. marginale como uma sequ?ncia de refer?ncia. A identifica??o de polimorfismos de nucleot?deo ?nico (SNPs) e inser??es/dele??es (INDELs) foi realizada. Os dados mostraram diferen?as significativas entre as duas cepas brasileiras, e sua compara??o com as cepas norte-americanas (Fl?rida e St. Maries) revelou mais diferen?as de nucleot?deos do que com as cepas australianas (Gypsy Plains e Dawn). Esses resultados lan?am luz sobre a hist?ria evolutiva de A. marginale e fornecem a primeira informa??o gen?mica de isolados da Am?rica do Sul. Avaliar sequ?ncias dos genomas de cepas de diferentes regi?es ? essencial para aumentar o conhecimento do pangenoma desta rickettsia.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-01-03T21:40:09Z No. of bitstreams: 1 IageTerraGuedesDeOliveira_DISSERT.pdf: 1463923 bytes, checksum: 19dff760e791d43564091519748df937 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-01-09T15:13:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 IageTerraGuedesDeOliveira_DISSERT.pdf: 1463923 bytes, checksum: 19dff760e791d43564091519748df937 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-09T15:13:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 IageTerraGuedesDeOliveira_DISSERT.pdf: 1463923 bytes, checksum: 19dff760e791d43564091519748df937 (MD5) Previous issue date: 2015-08-31 / Os ecossistemas de ?gua doce tem um importante papel na ciclagem global de carbono, uma vez que recebem cerca de 2,9 Pg C ano-1 advindo dos ecossistemas terrestres, processando e/ou estocando at? 2,6 Pg C ano-1.Desses, at? 2,1 Pg C ano-1 s?o mineralizados na coluna d??gua em grande parte pelas bact?rias planct?nicas. Essas s?o os organismos planct?nicos mais numerosos nos ecossistemas aqu?ticos continentais, por isso sendo respons?veis por grande do processamento do carbono. O seu papel dentro da ciclagem do carbono ir? variar de acordo com v?rios par?metros, agindo como fatores regulat?rios. O principal objetivo desse trabalho ? de avaliar o metabolismo bacteriano em dois reservat?rios do semi?rido tropical. Foram coletadas trimestralmente amostras de ?gua nos reservat?rios Santa Cruz e Umari entre fevereiro de 2013 e e novembro de 2014. Foram analisados par?metros f?sico-qu?micos e biol?gicos. O metabolismo bacteriano mostrou-se bastante vari?vel e com pouca previsibilidade. Isso ocorre devido a grande diversidade de fatores regulat?rios existentes que atuam em momentos e em locais diferentes, conjunta e separadamente. Frequentemente, se torna dif?cil prever os valores reais pois em diferentes momentos o metabolismo tanto pode ser influenciado pelas caracter?sticas f?sicas do sistema, bem como da concentra??o de nutrientes e suas implica??es nas intera??es. Sendo assim, mostram-se ind?cios de que o metabolismo bacteriano sofre bastante influ?ncia tanto bottom-up como top-down, podendo sofrer a partir de mudan?as, direcionadas ou aleat?rias, na estrutura da comunidade.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 400016.pdf: 696310 bytes, checksum: 7f8908ad96586598d5473332eb4bd96b (MD5) Previous issue date: 2008-03-26 / Interferons s?o prote?nas expressas por diferentes c?lulas humanas e sintetizadas como resposta a muitos agentes qu?micos e biol?gicos. Eles est?o envolvidos em repostas antiviral, antiproliferativa e imunomodulat?ria, atuando na manuten??o da homeostase e na prote??o do organismo contra pat?genos. Devido a essa atividade biol?gica, os interferons s?o atualmente aprovados no mundo inteiro para o tratamento de v?rias desordens virais, malignas e imunol?gicas. Interferon β1, por exemplo, ? uma das poucas subst?ncias que provou ser efetiva na supress?o das manifesta??es da esclerose m?ltipla que ? uma doen?a cr?nica do sistema nervoso central. Ele ? produzido comercialmente em microorganismos como Escherichia coli, utilizando a tecnologia do DNA recombinante e ? chamado de biof?rmaco. As patentes de muitos biof?rmacos originais est?o expirando e uma nova gera??o de mol?culas, chamadas biossimilares, est? em desenvolvimento. O interferon β1 foi aprovado para uso no tratamento da esclerose m?ltipla surtoremiss?o pelo Departamento de Controle de Drogas e Alimentos dos EUA em 1993 e perdeu sua prote??o de patente em 2007, tornando-se um alvo para a produ??o do biossimilar pelas ind?strias farmac?uticas. O desenvolvimento do biossimilar interferon β1 ? uma alternativa para o alto custo do biof?rmaco original. Desenvolvemos um protocolo para produzir grandes quantidades do interferon β1, no qual aproximadamente 3 mg da prote?na recombinante homog?nea podem ser obtidos a partir de 1 g de c?lulas de E. coli Rosetta(DE3). As an?lises por seq?enciamento N-terminal de amino?cidos e espectrometria de massas proveram evid?ncias para a identidade e pureza da prote?na recombinante. A an?lise por cromatografia l?quida de fase reversa demonstrou que o conte?do de deamidados e sulf?xidos foi similar ao padr?o comercial, e nenhuma forma heterog?nea da prote?na rhIFN-β1ser17 foi detectada. A an?lise por cromatografia l?quida de exclus?o molecular demonstrou a aus?ncia de agregados de alta massa molecular e de d?meros. O protocolo desenvolvido poder? ser utilizado para a produ??o do biossimilar pelas ind?strias farmac?uticas e deste modo, diminuir os custos do Minist?rio da Sa?de e dos consumidores com este biof?rmaco.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 437675.pdf: 3014292 bytes, checksum: 10c5c967edfd4e61677f7867c8186a73 (MD5) Previous issue date: 2011-12-09 / Tuberculosis (TB) is an infectious disease mainly caused by Mycobacterium tuberculosis, which currently infects one-third of the world s population. Despite the availability of the Bacille Calmette-Gu?rin vaccine and effective short-course chemotherapy, the increasing global burden of TB has been linked to the co-infection with HIV, the emergence of multi, extensively and now totally drug-resistant strains. Furthermore, the capacity of M. tuberculosis to remain viable within infected hosts in a long-term asymptomatic infection is an additional problem for the control of TB. Nucleotides biosynthesis pathways provide promising molecular targets for the development of new vaccines and therapeutic strategies to control the global incidence of TB. Uracil phosphoribosyltransferase (UPRT) catalyzes the conversion of uracil and 5'-phosphoribosyl-a- 1'-pyrophosphate (PRPP) to uridine 5'-monophosphate (UMP) and pyrophosphate (PPi). UPRT plays an important role in the pyrimidine salvage pathway since its product (UMP) is a common precursor of all pyrimidine nucleotides. This work presents cloning, recombinant expression in Escherichia coli, and purification of the upp-encoded M. tuberculosis UPRT (MtUPRT). Mass spectrometry analysis and N-terminal amino acid sequencing confirmed the identity of homogeneous MtUPRT. The molecular mass of the native MtUPRT was shown to follow a monomer-tetramer association model by analytical ultracentrifugation. This enzyme did not show a pronounced regulation by GTP as this nucleotide did not affect enzyme kinetic parameters, and its binding was not detected by isothermal titration calorimetry (ITC). Initial velocity and ITC studies suggested that catalysis proceeds through a sequential ordered mechanism, in which PRPP binds first, followed by uracil binding, and PPi is the first product to be released, followed by UMP. ITC also showed that PRPP and UMP binding are thermodynamically favorable processes. The pH-rate profiles indicated that groups with pK values of 5.7 and 8.1 are important for catalytic activity and a group with a pK value of 9.45 is involved in PRPP binding. Pre-steady-state kinetic data suggested that product release is not the rate-limiting step of the reaction catalyzed by MtUPRT. Kinetic fluorescence studies demonstrated two forms of enzyme in solution of which only one can bind to PRPP. Knockout of the upp gene showed that this gene is not essential for M. tuberculosis H37Rv in the employed experimental conditions and the absence of upp gene did not affect the mycobacterium growth. UPRT is expressed in both high and low oxygen conditions of M. tuberculosis H37Ra growth. MtUPRT is inhibited by an active metabolite of isoxyl, which does not seem to inhibit RNA polymerase, adenine phosphoribosyltransferase and hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase. Minimum inhibitory concentration of isoxyl for M. tuberculosis mutant for upp gene, complemented and wild type strains was 12.8 μg/mL, meaning that the absence of the upp gene did not affect M. tuberculosis sensitivity to isoxyl. Altogether, these data may be useful for a better understanding about the nucleotide biosynthesis pathway in M. tuberculosis and as a framework on which to base efforts towards the development of efficient prophylactic and therapeutic strategies to decrease the global incidence of this pathogen. / A tuberculose (TB) ? uma doen?a infecciosa causada principalmente pelo Mycobacterium tuberculosis, o qual atualmente infecta um ter?o da popula??o mundial. Apesar da disponibilidade da vacina Bacille Calmette-Gu?rin e da eficaz quimioterapia de curta dura??o, o aumento na incid?ncia global da TB est? relacionado ? co-infec??o com o HIV e ao surgimento de cepas multi, extensivamente e agora totalmente resistente a drogas. Al?m disto, a capacidade do M. tuberculosis de permanecer vi?vel dentro do hospedeiro infectado por longo per?odo em uma infec??o assintom?tica ? um problema adicional para o controle da TB. As rotas de bioss?ntese de nucleot?deos fornecem alvos moleculares promissores para o desenvolvimento de novas vacinas e estrat?gias terap?uticas para controlar a incid?ncia global de TB no mundo. A uracil fosforribosil transferase (UPRT) catalisa a convers?o de uracil e 5 - fosforribosil-a-1 -pirofosfato (PRPP) a uridina 5 -monofosfato (UMP) e pirofosfato (PPi). A UPRT tem um papel importante na rota de salvamento das pirimidinas j? que seu produto (UMP) ? o precursor comum de todos os nucleot?deos pirim?dicos. Este trabalho apresenta a clonagem, express?o recombinante em E. coli, e a purifica??o da UPRT de M. tuberculosis codificada pelo gene upp (MtUPRT). Adicionalmente, foram realizadas an?lises de espectrometria de massas e sequenciamento N-terminal que confirmaram a identidade da MtUPRT homog?nea. A massa molecular da MtUPRT nativa seguiu um modelo de associa??o mon?mero-tetr?mero por ultracentrifuga??o anal?tica. Esta enzima n?o mostrou uma regula??o pronunciada por GTP j? que este nucleot?deo n?o afetou os par?metros cin?ticos da enzima, e a sua liga??o n?o foi detectada por calorimetria de titula??o isot?rmica (ITC). A velocidade inicial e os estudos de ITC sugeriram que a cat?lise procede atrav?s de um mecanismo ordenado sequencial, no qual o PRPP liga primeiramente, seguido pela liga??o de uracil, e PPi ? o primeiro produto a ser liberado, seguido pelo UMP. ITC tamb?m mostrou que a liga??o de PRPP e UMP s?o processos termodinamicamente favor?veis. O perfil de pH indicou que grupamentos com os valores de pK pr?ximos de 5,7 e 8,1 s?o importantes para a atividade catal?tica e um grupamento com valor de pK pr?ximo a 9,45 est? envolvido na liga??o do PRPP. Dados de cin?tica no estado pr?-estacion?rio sugeriram que a libera??o de produto n?o ? a etapa limitante da rea??o catalisada pela MtUPRT. Estudos de fluoresc?ncia demonstraram a exist?ncia de duas formas da enzima em solu??o, das quais apenas uma pode ligar ao PRPP. O nocaute do gene upp demonstrou que este gene n?o ? essencial para o M. tuberculosis H37Rv nas condi??es empregadas no experimento e a aus?ncia do gene upp n?o afetou o crescimento micobacteriano. A UPRT mostrou ser expressa tanto em altas como em baixas concentra??es de oxig?nio. A MtUPRT foi inibida por um metab?lito ativo do isoxyl, que n?o parece inibir as enzimas RNA polimerase, adenina fosforribosil transferase e hipoxantinaguanina fosforribosil transferase. A concentra??o inibit?ria m?nima de isoxyl para as cepas de M. tuberculosis mutante para o gene upp, complementada e tipo selvagem foi de 12,8 μg/mL, o que significa que a aus?ncia do gene upp n?o afetou a sensibilidade do M. tuberculosis ao isoxyl. Assim, estes dados podem ser ?teis para um melhor entendimento sobre a via de bioss?ntese de nucleot?deos em M. tuberculosis e podem servir como base para o desenvolvimento de estrat?gias terap?uticas e preventivas eficientes para diminuir a incid?ncia global deste pat?geno.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 439219.pdf: 722099 bytes, checksum: 87b93549e65018c129416830692d4bfc (MD5) Previous issue date: 2012-03-30 / Stenotrophomonas maltophilia is an important opportunistic and emerging pathogen commonly related to nosocomial infections and found in different environmental sources, including hospital settings. This microorganism is recognized for presenting intrinsic resistance to a range of important antimicrobials as well as to acquire resistance by horizontal gene transfer, which reduces the effective options for the treatment of infections caused by this organism. Therefore, the aim of this study was to determine the presence of S. maltophilia in the nosocomial environment and characterize the resistance of the environmental isolates, as well as clinical isolates obtained in the same hospital. Then, environmental samples were collected in the general ICU and the Unified Health System hospitalization unit of the S?o Lucas Hospital, Porto Alegre, Brazil. In addition, 100 clinical isolates were sent by the Clinical Pathology Laboratory of the same hospital. All samples were analyzed using a specific protocol for S. maltophilia detection by PCR developed in this study targeting 23S rRNA gene. Subsequently, the antimicrobial resistance was evaluated against ceftazidime, chloramphenicol, levofloxacin, minociclin and trimethoprim/sulfamethoxazole (TMP/SMX). The presence of integrons was verified in all isolates and those that presented reduced susceptibility to TMP/SMX was evaluated the presence of sul1 and sul2 gene, as well as was determined the plasmid profile. All isolates were submitted to detection of smf-1 gene. Among the 936 samples collected in the nosocomial environment, S. maltophilia was identified in 28. High rates of susceptibility to minocycline, levofloxacin and chloramphenicol were observed, and all of the 19 isolates that presented reduced susceptibility to TMP/SMX carried the sul1 gene, 14 of them presented class 1 integron and nine isolates showed simultaneously sul1 and sul2. All isolates that carried the sul2 gene also presented the 7.3 kb plasmid. The smf-1 gene was detected in 31 S. maltophilia isolates. The presence of S. maltophilia in hospital environment and medical devices indicates the permanence of this microorganism in the nosocomial environment, what can constitute a risk to infection for other hospitalized patients. In addition, the data obtained in this study in relation to TMP/SMX susceptibility can suggest that the resistance to these drugs have the tendency to increase, especially due to resistance determinants to these drugs can be associated to mobile genetic elements, which may facilitate horizontal transfer and the spread of these resistance genes. / Stenotrophomonas maltophilia ? um importante pat?geno oportunista e emergente, comumente relacionado a infec??es nosocomiais e encontrado em diferentes locais, incluindo o ambiente hospitalar. Este microrganismo ? reconhecido por apresentar resist?ncia intr?nseca a uma gama importante de antimicrobianos, bem como por adquirir resist?ncia atrav?s de transfer?ncia g?nica horizontal, o que reduz as op??es efetivas para o tratamento de infec??es ocasionadas por este microrganismo. Desta forma, o objetivo deste estudo foi determinar a presen?a de S. maltophilia no ambiente hospitalar e caracterizar a resist?ncia a drogas antimicrobianas dos isolados ambientais, bem como dos isolados cl?nicos obtidos no mesmo hospital. Para tanto, amostras ambientais foram coletadas na UTI Geral e no andar referente ? interna??o pelo Sistema ?nico de Sa?de (SUS) do Hospital S?o Lucas, Porto Alegre, Brasil. Al?m disso, 100 isolados cl?nicos foram cedidos pelo Laborat?rio de Patologia Cl?nica do mesmo hospital. Todas as amostras foram analisadas utilizando um protocolo de detec??o espec?fica de S. maltophilia atrav?s de PCR desenvolvido neste estudo, tendo o gene RNAr 23S como alvo. Posteriormente, foi avaliada a resist?ncia dos isolados frente ? ceftazidima, cloranfenicol, levofloxacina, minociclina e trimetoprim/sulfametoxazol (TMP/SMX). A presen?a de integrons foi verificada em todos os isolados e naqueles com suscetibilidade reduzida a TMP/SMX foi avaliada a presen?a dos genes sul1 e sul2, bem como foi determinado o perfil plasmidial. Todos os isolados foram submetidos ? detec??o do gene smf-1. De um total de 936 amostras coletadas no ambiente hospitalar, S. maltophilia foi identificada em 28. Foram observadas elevadas taxas de suscetibilidade ? minociclina, levofloxacina e cloranfenicol e todos os 19 isolados que apresentaram suscetibilidade reduzida ? combina??o TMP/SMX carrearam o gene sul1, 14 destes apresentaram o integron de classe 1 e nove isolados apresentaram concomitantemente os genes sul1 e sul2. Todos os isolados que carrearam o gene sul2 apresentaram o plasm?deo de 7,3 kb. O gene smf-1 foi detectado em 31 isolados de S. maltophilia. A presen?a de S. maltophilia nos materiais e equipamentos hospitalares indica a perman?ncia destas bact?rias no ambiente hospitalar, podendo constituir risco para infec??o de outros pacientes internados. Al?m disso, os dados obtidos neste estudo em rela??o ? suscetibilidade ? TMP/SMX podem sugerir que a resist?ncia a esta combina??o de drogas possa estar em ascens?o, especialmente porque os determinantes de resist?ncia a estas drogas podem estar associados a elementos gen?ticos m?veis, o que facilitaria a transfer?ncia horizontal e a dissemina??o destes genes de resist?ncia.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:29:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 429331.pdf: 3416061 bytes, checksum: b9dd27c021e450278555744beaf366b5 (MD5) Previous issue date: 2011-01-25 / ARTIGO 1 : Introduction: Photodynamic therapy has been proposed to improve to root canal desinfection, but its role on certain bacterial species needs to be further ellucidated. Objective: to compare, in vitro, the action of photodynamic therapy and sodium hypochlorite in root canals infected with Enterococcus faecalis. Methods: The root canals of 45 single-rooted human extracted teeth were enlarged up to a file 60, autoclaved, inoculated with a suspension of Enterococcus faecalis and incubated for 60 days, with renewal of the culture medium every 48 hours. After that, samples were divided into five groups according to the protocol of decontamination: G1 (n = 5) positive control - no procedure; G2 (n = 10) negative control - distilled water; G3 (n = 10) - PAD, G4 (n = 10) NaOCl 2.5%; G5 (n = 10) - NaOCl 2.5% + PAD. Subsequently, samples were fixed on 25% glutaraldehyde, dehydrated, dried, metalized and subjected to scanning electron microscopy (SEM). The assessment was made of images taken at every root third at 5.000x magnification for the canal wall and 10.000x for the exposed tubule area, both in backscattering (BS), noting the effect of proposed treatments to the different thirds of the root canal. The presence of bacteria in the images was scored by position ranks from 1 to 45, where the higher the value, the cleanliness of the sample. Data were subjected to One-way ANOVA followed by post-hoc Tukey test (α = 0.05). Results: Group 5 had the highest mean position ranks for all thirds of the root canal, both in canal wall and in the exposed tubule area. Thus, it was the most effective in eliminating Enterococcus faecalis. Conclusion: the association NaOCl 2,5% + PAD is an efficient protocol for the elimination of Enterococcus faecalis present in the dentinal surface and deep into the dentinal tubules. ARTIGO 2 : Purpose: Evaluate the bovine pulp tissue dissolution ability of photodynamic therapy. Methods: Twenty pieces of bovine pulp tissue were weighed and divided randomly into four groups (n = 5), according to the cleaning protocol: G1 - distilled water (negative control), G2 - sodium hypochlorite 1% (positive control), G3 - photodynamic therapy, G4 - sodium hypochlorite 1% + photodynamic therapy. The observation of the events of dissolution was performed by two observers blinded in relation to the test using 2x loupe magnification, recording time in minutes until complete tissue dissolution. The total observation time was 2 hours. The dissolution rate was calculated dividing the weight of the fragment pulp (mg) by the time of dissolution (mg / min). Results: only group 2 (NaOCl) was able to promote complete dissolution of pulp tissue. In the other groups there was no occurrence of complete dissolution of the samples. The mean dissolution time for samples from group 2 (NaOCl) was 1.26 mg / min. Conclusion: photodynamic therapy was not able to dissolve the fragments of bovine pulp tissue and was not able to accelerate the rate of dissolution. / ARTIGO 1 : O objetivo deste estudo foi comparar, in vitro, a a??o da terapia fotodin?mica com a a??o do hipoclorito de s?dio em canais radiculares infectados com Enterococcus faecalis. Os canais radiculares de 45 dentes humanos unirradiculares foram ampliados at? a lima 60, autoclavados, inoculados com uma suspens?o de Enterococcus faecalis e incubados por 60 dias, com renova??o do meio de cultura de 48 em 48 horas. Ap?s o per?odo de contamina??o, as amostras foram divididas aleatoriamente em cinco grupos, de acordo com o protocolo de descontamina??o: G1 (n=5) controle positivo nenhum procedimento; G2 (n=10) controle negativo ?gua destilada; G3 (n=10) PAD; G4 (n=10) NaOCl 2,5%; G5 (n=10) NaOCl 2,5% + PAD. Posteriormente, as amostras foram fixadas em glutaralde?do 25%, desidratadas, secas, metalizadas e submetidas ? microscopia eletr?nica de varredura (MEV). A avalia??o foi feita em imagens do MEV com o aumento de 5.000x para a luz do canal e de 10.000x para a interface dentin?ria, ambos em backscattering (BS), observando o efeito dos tratamentos propostos nos diferentes ter?os do canal radicular. A presen?a de bact?rias foi classificada por interm?dio de um rankeamento de posi??es de 1 a 45, onde quanto maior o valor, maior o grau de limpeza da amostra. Os dados de n?veis de contamina??o foram submetidos ao teste de ANOVA de uma via, seguido pelo post-hoc de Tukey (α=0,05). Os resultados mostraram que o grupo 5 apresentou os maiores valores na m?dia de rankeamento de posi??es nos tr?s ter?os do canal radicular, tanto na luz do canal quanto na interface dentin?ria. Com isso, foi o mais efetivo na elimina??o de Enterococcus faecalis. Diante do exposto, ? poss?vel concluir que a associa??o NaOCl 2,5% + PAD foi eficiente na elimina??o de Enterococcus faecalis presentes na parede dentin?ria e na profundidade de penetra??o dos t?bulos dentin?rios. ARTIGO 2 : O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de dissolu??o do tecido pulpar bovino atrav?s da a??o da terapia fotodin?mica. Vinte fragmentos de tecido pulpar bovino foram pesados e divididos aleatoriamente dentro de quatro grupos (n=5), de acordo com o mecanismo de dissolu??o testado: G1 ?gua destilada (controle negativo); G2 hipoclorito de s?dio 1% (controle positivo); G3 terapia fotodin?mica; G4 hipoclorito de s?dio + terapia fotodin?mica. A observa??o dos eventos de dissolu??o foi realizada por dois observadores cegados em rela??o ao teste, com lupa de 2x de aumento, sendo anotado, em minutos, o tempo at? que ocorresse a completa dissolu??o do tecido. O per?odo total de observa??o foi de 2 horas. O tempo necess?rio para dissolu??o foi registrado em minutos (min) e a velocidade de dissolu??o foi calculada dividindo o peso do fragmento pulpar (mg) pelo tempo de dissolu??o (mg/min). Os resultados mostraram que somente o grupo 2 (NaOCl) foi capaz de promover a dissolu??o completa do tecido pulpar. Nos demais grupos n?o houve a ocorr?ncia da dissolu??o completa das amostras. A m?dia do tempo de dissolu??o para as amostras do grupo 2 (NaOCl) foi de 1.26 mg/min. Em conclus?o, somente o hipoclorito de s?dio foi capaz de dissolver os fragmentos de tecido pulpar bovino e a terapia fotodin?mica n?o apresentou capacidade de dissolu??o tecidual.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:29:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 431351.pdf: 2942190 bytes, checksum: c6eabd5cdfe51ae9bd263fa784c3b71b (MD5) Previous issue date: 2011-03-30 / O objetivo deste estudo foi testar a influ?ncia da utiliza??o da fibra ?ptica e de diferentes tempos de pr?-irradia??o (PIT) na terapia fotodin?mica com LED, na desinfec??o de canais radiculares de dentes bovinos infectados, in vitro, com Enterococcus faecalis. Cento e vinte dentes bovinos foram inoculados com E. faecalis, permanecendo em cultivo por 60 dias. Os dentes foram divididos em seis grupos (n=20): Grupo 1- ?gua destilada; Grupo 2- 1 minuto PIT/sem fibra ?ptica; Grupo 3- 1 minuto PIT/fibra ?ptica; Grupo 4- 5 minutos PIT/sem fibra ?ptica; Grupo 5 - 5 minutos/com fibra ?ptica; Grupo 6 hipoclorito de s?dio 2%. Foram realizados testes microbiol?gicos e an?lise em SEM. A an?lise microbiol?gica mostrou que o grupo 6 obteve os melhores resultados, com diferen?a estat?stica entre este e os grupos 1, 2, 3, 4 e 5. A an?lise da microscopia eletr?nica de varredura, nos tr?s ter?os da parede do canal mostrou os melhores resultados para o grupo 6 (com diferen?a estatisticamente significativa com os grupos 1, 3, 4 e 5) e o grupo 2, entre os grupos da terapia fotodin?mica. Na ?rea de t?bulos expostos, no ter?o apical os grupos com melhores resultados foram os grupos 1 e 3; no ter?o m?dio grupos 6 e 2; e no ter?o cervical grupos 6 e 3. N?o foi encontrada diferen?a na desinfec??o dos canais radiculares quando a fibra ?ptica foi usada na aplica??o da terapia fotodin?mica. Esta n?o pode ser usada de forma isolada na desinfec??o dos canais radiculares, o seu valor pode estar na complementa??o da desinfec??o obtida por outros protocolos de limpeza.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:35:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 429777.pdf: 10807139 bytes, checksum: b05a53115bb6b1ea5696ca873906b4cf (MD5) Previous issue date: 2011-01-26 / Asma ? uma doen?a extremamente prevalente que afeta pessoas de todas as idades, sendo um problema de sa?de p?blica s?rio no mundo inteiro. Quando inadequadamente controlada pode trazer graves limita??es na qualidade de vida do indiv?duo, sendo, algumas vezes, fatal. Evid?ncias recentes v?m demonstrando que asm?ticos t?m suscetibilidade maior ao desenvolvimento de in?meros tipos de infec??es virais e bacterianas, por?m infec??es por micobact?ria n?o tuberculosa (MNT) n?o haviam sido at? ent?o descritas em indiv?duos com asma.