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Transplante de células de medula óssea (BMCs) de camundongos em modelo experimental para o desenvolvimento de aterosclerose: aspectos estruturais, ultraestrutuais e moleculares da aorta / Bone marrow cell transplantation (BMCs) in atherosclerosis experimental model mice: structural, ultrastructural and molecular aortic

Alyne Souza Félix Fonseca 24 February 2015 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / As células tronco são caracterizadas pela sua capacidade de se diferenciar em várias linhagens de células e exibir um pontente efeito parácrino. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da terapia com células da medula óssea (BMCs) na glicose sanguínea, no metabolismo lipídico e remodelamento da parede da aorta em um modelo experimental para aterosclerose. Camundongos C57BL/6 foram alimentados com uma dieta controle (grupo CO) ou uma dieta aterogênica (grupo AT - 60% gordura). Após 16 semanas, o grupo AT foi dividido em quatro sub grupos: grupo AT 14 dias e o grupo AT 21 dias receberam uma injeção de PBS na veia caudal e mortos 14 e 21 dias após respectivamente; grupo AT-BMC 14 dias e AT-BMC 21 dias que receberam uma injeção com BMCs na veia caudal e mortos 14 e 21 dias após, respectivamente. O grupo CO foi sacrificado juntamente com outros grupos. O transplante BMCs reduziu os niveis de glicose, triglicerídeos e colesterol total no sangue. Não houve diferença significativa em relação à massa corporal entre os grupos transplantados e não transplantados, sendo todos diferentes do grupo CO. Não houve diferença significativa na curva glicemica entre os grupos AT 14 dias, AT-BMC 14 dias e AT 21 dias e estes diferentes do grupo CO e do grupo AT-BMC 21 dias. O Qa (1/mm2) foi quantitativamente reduzido no grupo AT 14 dias e AT 21 dias quando comparado ao grupo CO. Este Qa se mostrou elevado no grupo AT-BMC 21 dias quando comparado a todos os grupos. O aumento da expessura da parede da aorta foi observado em todos os grupos aterogênicos, entretanto o aumento da espessura foi significativamente menor no grupo AT-BMC 21 dias em relação ao grupo AT 14 dias e AT 21 dias. A percentagem de fibras elásticas se apresentou significativamente maior no grupo AT 21 dias quando comparado ao CO e AT-BMC 21 dias. Não houve diferença significativa entre o grupo CO e AT-BMC 21 dias. Vacúolos na túnica média, delaminação e o adelgaçamento das lamelas elásticas foram observados nos grupos AT-14 dias e AT-21 dias. O menor número destes foi visualizado no grupo AT-BMC 14 dias e AT-BMC 21 dias. A imunomarcação para alfa actina de músculo liso (α-SMA) e fator de crescimento vascular e endotelial (VEGF) mostrou menor marcação em grupos transplantados com BMCs. A marcação para antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) mostrou-se mais expressiva no grupo AT-BMC 21 dias grupo. Marcação para CD105, CD133 e CD68 foi observada nos grupos AT 14 dias e AT 21 dias. Estas marcações não foram observadas nos grupos AT-BMC 14 dias e AT-BMC 21 dias. Nas eletromicrografias observamos o remodelamento benéfico no grupo AT-BMC14 dias e AT-BMC 21 dias, com a organização estrutural similar ao grupo CO. Vesículas de pinocitose, projeção da célula muscular lisa e a delaminação da lamina elástica interna são observados nos grupos AT 14 dias e AT 21 dias. Célula endotelial preservada, com lamina elástica interna de contorno regular e contínua é observada no grupo CO e nos grupos AT-BMC 14 dias e AT-BMC 21 dias. Como conclusão, os nossos resultados reforçam o conceito de que, em um modelo aterosclerótico utilizando camundongos e dieta aterogênica, a injeção de BMCs melhora os níveis de glicose, metabolismo lipídico e ocasiona um remodelamento benéfico na parede da aorta. / Stem cells are characterized by their ability to differentiate into multiple cell lineages and display the paracrine effect. The aim of this work was to evaluate the effect of therapy with bone marrow cells (BMCs) on blood glucose, lipid metabolism and aortic wall remodeling in mice through the administration of a high fat diet and subsequent BMCs transplantation. C57BL/6 mice were fed a control diet (CO group) or an atherogenic diet (AT group). After 16 weeks, the AT group was divided into four groups: an AT 14 days group and AT 21 days group, that were given an injection of vehicle and sacrificed at 14 and 21 days after, respectively; AT-BMC 14 days group and AT-BMC 21 days group that was given an injection of BMCs and sacrificed at 14 and 21 days after. The CO group was sacrificed along with other groups. The BMCs transplant had reduced blood glucose, triglycerides and total cholesterol. There was no significant difference in relation to body mass between the transplanted groups and non-transplanted groups, with all are different to CO group. There was no significant difference in the glycemic curve between AT 14 days group, AT-BMC 14 days group and AT 21 days group and these are different to CO and the AT-BMC 21 days group. The Qa (1 / mm2) was quantitatively reduced in the AT 14 days group and AT 21 days group when compared to the CO group. This Qa proved high in AT-BMC 21 days BMC compared to all groups. The increased thickness of the aortic wall was observed in all atherogenic groups, but was significantly smaller in group AT-BMC 21 days compared to AT 14 days group and AT 21 days group. The percentage of elastic fibers was significantly higher in the AT 21 days group when compared to the CO and AT-BMC 21 days. There was no significant difference between the CO and AT-BMC 21 days. Vacuoles in the media tunic, delamination and the thinning of the elastic lamellae were observed in AT 14 days group and AT 21 days group. The smallest number of these apresentation were displayed on the AT-BMC 14 days group and and AT-BMC 21 days. The immunostaining for α-SMA and VEGF showed lower in AT-BMC 14 days group and AT-BMC 21 days group. The markup for PCNA appears to be greater in the AT-BMC 21 days group. Marking to CD105, CD133 and CD68 were observed in AT 14 days group and AT 21 days group. These markings were not observed in AT-BMC 14 days group and AT-BMC 21 days group. In electron micrographs observed the beneficial remodeling in AT-BMC 14 day group and AT-BMC 21 days, with the structural organization was similar to the CO group. Vesicles of pinocytosis, projection of smooth muscle cell and delamination of the internal elastic lamina are seen in groups AT 14 days group and AT 21 days group. Endothelial cell preserved, regular and continuous contour in internal elastic lamelae is observed in the CO group, AT-BMC 14 days group and AT-BMC 21 days group. In conclusion, our results support the concept that an atherosclerotic model using mice and atherogenic diet, the injection of BMCs improve glucose, lipid metabolism and causes a beneficial remodeling of the aortic wall.
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Transplante de células de medula óssea (BMCs) de camundongos em modelo experimental para o desenvolvimento de aterosclerose: aspectos estruturais, ultraestrutuais e moleculares da aorta / Bone marrow cell transplantation (BMCs) in atherosclerosis experimental model mice: structural, ultrastructural and molecular aortic

Alyne Souza Félix Fonseca 24 February 2015 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / As células tronco são caracterizadas pela sua capacidade de se diferenciar em várias linhagens de células e exibir um pontente efeito parácrino. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da terapia com células da medula óssea (BMCs) na glicose sanguínea, no metabolismo lipídico e remodelamento da parede da aorta em um modelo experimental para aterosclerose. Camundongos C57BL/6 foram alimentados com uma dieta controle (grupo CO) ou uma dieta aterogênica (grupo AT - 60% gordura). Após 16 semanas, o grupo AT foi dividido em quatro sub grupos: grupo AT 14 dias e o grupo AT 21 dias receberam uma injeção de PBS na veia caudal e mortos 14 e 21 dias após respectivamente; grupo AT-BMC 14 dias e AT-BMC 21 dias que receberam uma injeção com BMCs na veia caudal e mortos 14 e 21 dias após, respectivamente. O grupo CO foi sacrificado juntamente com outros grupos. O transplante BMCs reduziu os niveis de glicose, triglicerídeos e colesterol total no sangue. Não houve diferença significativa em relação à massa corporal entre os grupos transplantados e não transplantados, sendo todos diferentes do grupo CO. Não houve diferença significativa na curva glicemica entre os grupos AT 14 dias, AT-BMC 14 dias e AT 21 dias e estes diferentes do grupo CO e do grupo AT-BMC 21 dias. O Qa (1/mm2) foi quantitativamente reduzido no grupo AT 14 dias e AT 21 dias quando comparado ao grupo CO. Este Qa se mostrou elevado no grupo AT-BMC 21 dias quando comparado a todos os grupos. O aumento da expessura da parede da aorta foi observado em todos os grupos aterogênicos, entretanto o aumento da espessura foi significativamente menor no grupo AT-BMC 21 dias em relação ao grupo AT 14 dias e AT 21 dias. A percentagem de fibras elásticas se apresentou significativamente maior no grupo AT 21 dias quando comparado ao CO e AT-BMC 21 dias. Não houve diferença significativa entre o grupo CO e AT-BMC 21 dias. Vacúolos na túnica média, delaminação e o adelgaçamento das lamelas elásticas foram observados nos grupos AT-14 dias e AT-21 dias. O menor número destes foi visualizado no grupo AT-BMC 14 dias e AT-BMC 21 dias. A imunomarcação para alfa actina de músculo liso (α-SMA) e fator de crescimento vascular e endotelial (VEGF) mostrou menor marcação em grupos transplantados com BMCs. A marcação para antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) mostrou-se mais expressiva no grupo AT-BMC 21 dias grupo. Marcação para CD105, CD133 e CD68 foi observada nos grupos AT 14 dias e AT 21 dias. Estas marcações não foram observadas nos grupos AT-BMC 14 dias e AT-BMC 21 dias. Nas eletromicrografias observamos o remodelamento benéfico no grupo AT-BMC14 dias e AT-BMC 21 dias, com a organização estrutural similar ao grupo CO. Vesículas de pinocitose, projeção da célula muscular lisa e a delaminação da lamina elástica interna são observados nos grupos AT 14 dias e AT 21 dias. Célula endotelial preservada, com lamina elástica interna de contorno regular e contínua é observada no grupo CO e nos grupos AT-BMC 14 dias e AT-BMC 21 dias. Como conclusão, os nossos resultados reforçam o conceito de que, em um modelo aterosclerótico utilizando camundongos e dieta aterogênica, a injeção de BMCs melhora os níveis de glicose, metabolismo lipídico e ocasiona um remodelamento benéfico na parede da aorta. / Stem cells are characterized by their ability to differentiate into multiple cell lineages and display the paracrine effect. The aim of this work was to evaluate the effect of therapy with bone marrow cells (BMCs) on blood glucose, lipid metabolism and aortic wall remodeling in mice through the administration of a high fat diet and subsequent BMCs transplantation. C57BL/6 mice were fed a control diet (CO group) or an atherogenic diet (AT group). After 16 weeks, the AT group was divided into four groups: an AT 14 days group and AT 21 days group, that were given an injection of vehicle and sacrificed at 14 and 21 days after, respectively; AT-BMC 14 days group and AT-BMC 21 days group that was given an injection of BMCs and sacrificed at 14 and 21 days after. The CO group was sacrificed along with other groups. The BMCs transplant had reduced blood glucose, triglycerides and total cholesterol. There was no significant difference in relation to body mass between the transplanted groups and non-transplanted groups, with all are different to CO group. There was no significant difference in the glycemic curve between AT 14 days group, AT-BMC 14 days group and AT 21 days group and these are different to CO and the AT-BMC 21 days group. The Qa (1 / mm2) was quantitatively reduced in the AT 14 days group and AT 21 days group when compared to the CO group. This Qa proved high in AT-BMC 21 days BMC compared to all groups. The increased thickness of the aortic wall was observed in all atherogenic groups, but was significantly smaller in group AT-BMC 21 days compared to AT 14 days group and AT 21 days group. The percentage of elastic fibers was significantly higher in the AT 21 days group when compared to the CO and AT-BMC 21 days. There was no significant difference between the CO and AT-BMC 21 days. Vacuoles in the media tunic, delamination and the thinning of the elastic lamellae were observed in AT 14 days group and AT 21 days group. The smallest number of these apresentation were displayed on the AT-BMC 14 days group and and AT-BMC 21 days. The immunostaining for α-SMA and VEGF showed lower in AT-BMC 14 days group and AT-BMC 21 days group. The markup for PCNA appears to be greater in the AT-BMC 21 days group. Marking to CD105, CD133 and CD68 were observed in AT 14 days group and AT 21 days group. These markings were not observed in AT-BMC 14 days group and AT-BMC 21 days group. In electron micrographs observed the beneficial remodeling in AT-BMC 14 day group and AT-BMC 21 days, with the structural organization was similar to the CO group. Vesicles of pinocytosis, projection of smooth muscle cell and delamination of the internal elastic lamina are seen in groups AT 14 days group and AT 21 days group. Endothelial cell preserved, regular and continuous contour in internal elastic lamelae is observed in the CO group, AT-BMC 14 days group and AT-BMC 21 days group. In conclusion, our results support the concept that an atherosclerotic model using mice and atherogenic diet, the injection of BMCs improve glucose, lipid metabolism and causes a beneficial remodeling of the aortic wall.
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Alginate Beads: A Promising Vector for BMCs

Alsaggaf, Ahmed A. 17 May 2022 (has links)
Coral bleaching is a worldwide result of climate change that is affecting the marine ecosystems greatly. Methods to help solve the issue have been previously explored and Beneficial Microorganisms for Corals (BMCs) have been proven to help mitigate coral bleaching in laboratory trials. In their efforts to test its effectiveness on the field, scientists have found that it would be beneficial to have a constant, biocompatible, source of BMCs. We have tested Calcium Alginate microspheres, what we call Alginate Beads, in terms of release rate and cell viability to determine if they are fit to be used as vectors for the BMC consortia. By placing the Beads in two different temperatures representing winter and summer temperatures in the Red Sea in agitation we were able to understand their dynamics more clearly. By using Flow Cytometry, Colony Forming Units, and microscopy techniques we were able to see that Alginate Beads incorporate bacteria into their matrix and keep them viable for up to two weeks. We also observed that the Beads release more bacterial cells at higher temperatures compared to lower temperatures. This suggests that when used in the field, Alginate Beads are able to sustain the bacteria for a prolonged time period and it will release bacteria at a higher rate in warmer temperatures potentially either season or region-wise. Hence, we believe that Alginate Beads could be suitable as vectors for field research and should be explored further.

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