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Comparação da presença de suínos portadores de Salmonella sp. no início da fase de terminação e ao abate, em três granjas do Rio Grande do SulMüller, Monika January 2005 (has links)
O objetivo deste estudo foi comparar o índice de animais positivos para Salmonella sp. no início da terminação e ao abate e identificar possíveis fontes de contaminação. Em três granjas terminadoras, foram coletados suabes de superfície nas baias e nos silos durante o vazio sanitário; amostras de fezes e sangue dos animais no dia do alojamento; alíquotas de todos os lotes de ração e amostras de sangue, linfonodos mesentéricos (LM) e conteúdo intestinal (CI) dos animais ao abate. As amostras de sangue foram submetidas a testes de ELISA-LPS para Salmonella Tiphymurium, enquanto nas demais amostras pesquisou-se a presença de Salmonella sp. As amostras de ração foram adicionalmente submetidas à técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Todos animais foram negativos para presença de Salmonella sp. nas fezes no início da terminação, entretanto um pequeno número de animais foi positivo na sorologia. Em duas granjas, havia a contaminação residual no ambiente, enquanto na terceira granja, em um dos lotes de ração, foi detectada a presença de Salmonella sp. pela PCR. Ao abate, acima de 90% dos animais foi positivo no teste de ELISA-LPS, sendo que, em todos os lotes, encontrou-se um número variável (12-92%) de portadores em LM e CI. A partir disso, concluiu-se que a terminação foi a fase crítica para a amplificação da infecção por Salmonella sp., sendo a presença residual do microrganismo na granja e o fornecimento de ração contaminada fontes prováveis de infecção.
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Comparação da presença de suínos portadores de Salmonella sp. no início da fase de terminação e ao abate, em três granjas do Rio Grande do SulMüller, Monika January 2005 (has links)
O objetivo deste estudo foi comparar o índice de animais positivos para Salmonella sp. no início da terminação e ao abate e identificar possíveis fontes de contaminação. Em três granjas terminadoras, foram coletados suabes de superfície nas baias e nos silos durante o vazio sanitário; amostras de fezes e sangue dos animais no dia do alojamento; alíquotas de todos os lotes de ração e amostras de sangue, linfonodos mesentéricos (LM) e conteúdo intestinal (CI) dos animais ao abate. As amostras de sangue foram submetidas a testes de ELISA-LPS para Salmonella Tiphymurium, enquanto nas demais amostras pesquisou-se a presença de Salmonella sp. As amostras de ração foram adicionalmente submetidas à técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Todos animais foram negativos para presença de Salmonella sp. nas fezes no início da terminação, entretanto um pequeno número de animais foi positivo na sorologia. Em duas granjas, havia a contaminação residual no ambiente, enquanto na terceira granja, em um dos lotes de ração, foi detectada a presença de Salmonella sp. pela PCR. Ao abate, acima de 90% dos animais foi positivo no teste de ELISA-LPS, sendo que, em todos os lotes, encontrou-se um número variável (12-92%) de portadores em LM e CI. A partir disso, concluiu-se que a terminação foi a fase crítica para a amplificação da infecção por Salmonella sp., sendo a presença residual do microrganismo na granja e o fornecimento de ração contaminada fontes prováveis de infecção.
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Comparação da presença de suínos portadores de Salmonella sp. no início da fase de terminação e ao abate, em três granjas do Rio Grande do SulMüller, Monika January 2005 (has links)
O objetivo deste estudo foi comparar o índice de animais positivos para Salmonella sp. no início da terminação e ao abate e identificar possíveis fontes de contaminação. Em três granjas terminadoras, foram coletados suabes de superfície nas baias e nos silos durante o vazio sanitário; amostras de fezes e sangue dos animais no dia do alojamento; alíquotas de todos os lotes de ração e amostras de sangue, linfonodos mesentéricos (LM) e conteúdo intestinal (CI) dos animais ao abate. As amostras de sangue foram submetidas a testes de ELISA-LPS para Salmonella Tiphymurium, enquanto nas demais amostras pesquisou-se a presença de Salmonella sp. As amostras de ração foram adicionalmente submetidas à técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Todos animais foram negativos para presença de Salmonella sp. nas fezes no início da terminação, entretanto um pequeno número de animais foi positivo na sorologia. Em duas granjas, havia a contaminação residual no ambiente, enquanto na terceira granja, em um dos lotes de ração, foi detectada a presença de Salmonella sp. pela PCR. Ao abate, acima de 90% dos animais foi positivo no teste de ELISA-LPS, sendo que, em todos os lotes, encontrou-se um número variável (12-92%) de portadores em LM e CI. A partir disso, concluiu-se que a terminação foi a fase crítica para a amplificação da infecção por Salmonella sp., sendo a presença residual do microrganismo na granja e o fornecimento de ração contaminada fontes prováveis de infecção.
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Isolamento e identificação de micro-organismos cultiváveis produtores de proteases provenientes da Antártida e caracterização da bactéria queratinolítica Lysobacter concretionisPereira, Jamile Queiroz January 2012 (has links)
Na Península Antártica, uma grande concentração de aves nidifica anualmente; ainda assim, não é observado o acúmulo de penas no ambiente, sugerindo a ação da microbiota local. As queratinases são o grupo de enzimas capazes de degradar a queratina, identificadas majoritariamente em micro- organismos meso e termofílicos. O objetivo deste trabalho foi a identificação de bactérias queratinolíticas psicrofílicas ou psicrotolerantes, como uma nova alternativa para o uso de queratinases em processos industriais. Amostras de penas foram coletadas em pinguineiras na ilha Rei George, Antártida, o material semeado em meio ágar farinha de penas (AFP, 10 g L-1) e incubado entre 4 e 30 ºC. Seis isolados bacterianos capazes de crescer em AFP foram selecionados e inoculados em meio ágar leite, sendo que três deles formaram halos de proteólise entre 9 e 30 °C, preferencialmente em pH 9,0. Seu DNA foi extraído e o gene do rRNA 16S amplificado e sequenciado. Os isolados proteolíticos foram identificados como Lysobacter concretionis (A03), Arthrobacter sp. (A08) e Chryseobacterium sp. (A17U). O sobrenadante de cultivo das três bactérias foi caracterizado ao longo de 7 dias de incubação em meio caldo farinha de penas (CFP, 10 g L-1), entre 20 °C e 40 °C sendo que todas apresentaram crescimento e produção enzimática ótimos a 20 °C, entre o 3° e o 4° dia. De acordo com os zimogramas, a linhagem A08 foi produtora de uma única protease, A17U de três e A03 de nove enzimas. Esta última se destacou por ser capaz de degradar o substrato farinha de penas quase completamente em 7 dias de cultivo e por tolerar concentrações relativamente altas de NaCl sendo, por isso, selecionada para a análise filogenética, na qual isolado foi identificado como Lysobacter concretionis, com um valor de bootstrap de 100%, e para a purificação por cromatografia de filtração em gel, Sistema Aquoso Bifásico (SAB) e Partição em Três Fases (TPP). O melhor resultado foi obtido na TPP, com a recuperação de 82% da atividade enzimática e um fator de purificação de 3,59 vezes, sendo possível a detecção de cinco bandas, de aproximadamente 70, 65, 50, 40 e 30 kDa no gel SDS-PAGE. Este é o primeiro trabalho que reporta uma grande capacidade queratinolítica pela linhagem psicrotolerante Lysobacter concretionis A03, sendo o seu emprego biotecnológico e industrial compatível com a redução de gastos energéticos para a degradação de resíduos queratinosos. / In the Antarctic Peninsula, high concentrations of birds nest every year; nevertheless, their feathers do not accumulate in the environment, suggesting the action of the local microbiota. Keratinases are the enzymes able to degrade keratin, identified mainly in thermophilic and mesophilic micro-organisms. The aim of this work was the identification of psychrophilic or psychrotolerant feather degrading bacteria, in order to reduce the energy consumption for the industrial application of keratinases. Penguin feathers samples were collected in King George Island, Antarctic, the material was spread in feather meal agar plates (FMA 1%) and incubated at 4 – 30 °C. Six isolates capable of growing on FMA were selected and incubated in skimmed milk agar; of these, three formed clear zones indicative of proteolytic activity, between 9 and 30°C, preferable at pH 9.0. Total DNA of isolates was extracted and the rRNA 16S gene was amplified and sequenced. Proteolytic isolates were identified as Lysobacter concretionis (A03), Arthrobacter sp. (A08) and Chryseobacterium sp. (A17U). The crude extract of the three bacteria was characterized along 7 days of cultivation at 20 to 40°C on feather meal broth (FMB, 1%). All bacterial strains showed medium alkalinization, optimum growing and enzymatic production at 20 °C, between third and fourth days, in despite of its optimal enzymatic activity on azocasein and azokeratin have been determined between 35 and 40°C. According to zymography, strain A08 produced only one protease, A17U three and A03 nine proteolytic enzymes, this later standing out due to their high feather meal degradation in 7 days of cultivation and by their tolerance to high salt concentrations, being, therefore, selected for Phylogenetic analysis, purification methods of gel filtration chromatography, aqueous two-phase partition (ATP) and three-phase partition (TPP). The isolate was identified by phylogeny as Lysobacter concretionis, with a bootstrap value of 100%. The best results in purification were achieved by TPP, despite has not been possible the isolation of a single protein, with recovery of 82% of enzymatic activity and a purification factor of 3.59. The SDS-PAGE showed the presence of five bands of approximately 70, 65, 50, 40 and 30 kDa. This is the first report of great keratinolytic ability by the psychrotolerant strain of Lysobacter concretionis A03, thus, its industrial use its compatible with the reduction of energetic costs for the degradation of keratin wastes by enzymatic digestion.
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Isolamento e identificação de micro-organismos cultiváveis produtores de proteases provenientes da Antártida e caracterização da bactéria queratinolítica Lysobacter concretionisPereira, Jamile Queiroz January 2012 (has links)
Na Península Antártica, uma grande concentração de aves nidifica anualmente; ainda assim, não é observado o acúmulo de penas no ambiente, sugerindo a ação da microbiota local. As queratinases são o grupo de enzimas capazes de degradar a queratina, identificadas majoritariamente em micro- organismos meso e termofílicos. O objetivo deste trabalho foi a identificação de bactérias queratinolíticas psicrofílicas ou psicrotolerantes, como uma nova alternativa para o uso de queratinases em processos industriais. Amostras de penas foram coletadas em pinguineiras na ilha Rei George, Antártida, o material semeado em meio ágar farinha de penas (AFP, 10 g L-1) e incubado entre 4 e 30 ºC. Seis isolados bacterianos capazes de crescer em AFP foram selecionados e inoculados em meio ágar leite, sendo que três deles formaram halos de proteólise entre 9 e 30 °C, preferencialmente em pH 9,0. Seu DNA foi extraído e o gene do rRNA 16S amplificado e sequenciado. Os isolados proteolíticos foram identificados como Lysobacter concretionis (A03), Arthrobacter sp. (A08) e Chryseobacterium sp. (A17U). O sobrenadante de cultivo das três bactérias foi caracterizado ao longo de 7 dias de incubação em meio caldo farinha de penas (CFP, 10 g L-1), entre 20 °C e 40 °C sendo que todas apresentaram crescimento e produção enzimática ótimos a 20 °C, entre o 3° e o 4° dia. De acordo com os zimogramas, a linhagem A08 foi produtora de uma única protease, A17U de três e A03 de nove enzimas. Esta última se destacou por ser capaz de degradar o substrato farinha de penas quase completamente em 7 dias de cultivo e por tolerar concentrações relativamente altas de NaCl sendo, por isso, selecionada para a análise filogenética, na qual isolado foi identificado como Lysobacter concretionis, com um valor de bootstrap de 100%, e para a purificação por cromatografia de filtração em gel, Sistema Aquoso Bifásico (SAB) e Partição em Três Fases (TPP). O melhor resultado foi obtido na TPP, com a recuperação de 82% da atividade enzimática e um fator de purificação de 3,59 vezes, sendo possível a detecção de cinco bandas, de aproximadamente 70, 65, 50, 40 e 30 kDa no gel SDS-PAGE. Este é o primeiro trabalho que reporta uma grande capacidade queratinolítica pela linhagem psicrotolerante Lysobacter concretionis A03, sendo o seu emprego biotecnológico e industrial compatível com a redução de gastos energéticos para a degradação de resíduos queratinosos. / In the Antarctic Peninsula, high concentrations of birds nest every year; nevertheless, their feathers do not accumulate in the environment, suggesting the action of the local microbiota. Keratinases are the enzymes able to degrade keratin, identified mainly in thermophilic and mesophilic micro-organisms. The aim of this work was the identification of psychrophilic or psychrotolerant feather degrading bacteria, in order to reduce the energy consumption for the industrial application of keratinases. Penguin feathers samples were collected in King George Island, Antarctic, the material was spread in feather meal agar plates (FMA 1%) and incubated at 4 – 30 °C. Six isolates capable of growing on FMA were selected and incubated in skimmed milk agar; of these, three formed clear zones indicative of proteolytic activity, between 9 and 30°C, preferable at pH 9.0. Total DNA of isolates was extracted and the rRNA 16S gene was amplified and sequenced. Proteolytic isolates were identified as Lysobacter concretionis (A03), Arthrobacter sp. (A08) and Chryseobacterium sp. (A17U). The crude extract of the three bacteria was characterized along 7 days of cultivation at 20 to 40°C on feather meal broth (FMB, 1%). All bacterial strains showed medium alkalinization, optimum growing and enzymatic production at 20 °C, between third and fourth days, in despite of its optimal enzymatic activity on azocasein and azokeratin have been determined between 35 and 40°C. According to zymography, strain A08 produced only one protease, A17U three and A03 nine proteolytic enzymes, this later standing out due to their high feather meal degradation in 7 days of cultivation and by their tolerance to high salt concentrations, being, therefore, selected for Phylogenetic analysis, purification methods of gel filtration chromatography, aqueous two-phase partition (ATP) and three-phase partition (TPP). The isolate was identified by phylogeny as Lysobacter concretionis, with a bootstrap value of 100%. The best results in purification were achieved by TPP, despite has not been possible the isolation of a single protein, with recovery of 82% of enzymatic activity and a purification factor of 3.59. The SDS-PAGE showed the presence of five bands of approximately 70, 65, 50, 40 and 30 kDa. This is the first report of great keratinolytic ability by the psychrotolerant strain of Lysobacter concretionis A03, thus, its industrial use its compatible with the reduction of energetic costs for the degradation of keratin wastes by enzymatic digestion.
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Isolamento e identificação de micro-organismos cultiváveis produtores de proteases provenientes da Antártida e caracterização da bactéria queratinolítica Lysobacter concretionisPereira, Jamile Queiroz January 2012 (has links)
Na Península Antártica, uma grande concentração de aves nidifica anualmente; ainda assim, não é observado o acúmulo de penas no ambiente, sugerindo a ação da microbiota local. As queratinases são o grupo de enzimas capazes de degradar a queratina, identificadas majoritariamente em micro- organismos meso e termofílicos. O objetivo deste trabalho foi a identificação de bactérias queratinolíticas psicrofílicas ou psicrotolerantes, como uma nova alternativa para o uso de queratinases em processos industriais. Amostras de penas foram coletadas em pinguineiras na ilha Rei George, Antártida, o material semeado em meio ágar farinha de penas (AFP, 10 g L-1) e incubado entre 4 e 30 ºC. Seis isolados bacterianos capazes de crescer em AFP foram selecionados e inoculados em meio ágar leite, sendo que três deles formaram halos de proteólise entre 9 e 30 °C, preferencialmente em pH 9,0. Seu DNA foi extraído e o gene do rRNA 16S amplificado e sequenciado. Os isolados proteolíticos foram identificados como Lysobacter concretionis (A03), Arthrobacter sp. (A08) e Chryseobacterium sp. (A17U). O sobrenadante de cultivo das três bactérias foi caracterizado ao longo de 7 dias de incubação em meio caldo farinha de penas (CFP, 10 g L-1), entre 20 °C e 40 °C sendo que todas apresentaram crescimento e produção enzimática ótimos a 20 °C, entre o 3° e o 4° dia. De acordo com os zimogramas, a linhagem A08 foi produtora de uma única protease, A17U de três e A03 de nove enzimas. Esta última se destacou por ser capaz de degradar o substrato farinha de penas quase completamente em 7 dias de cultivo e por tolerar concentrações relativamente altas de NaCl sendo, por isso, selecionada para a análise filogenética, na qual isolado foi identificado como Lysobacter concretionis, com um valor de bootstrap de 100%, e para a purificação por cromatografia de filtração em gel, Sistema Aquoso Bifásico (SAB) e Partição em Três Fases (TPP). O melhor resultado foi obtido na TPP, com a recuperação de 82% da atividade enzimática e um fator de purificação de 3,59 vezes, sendo possível a detecção de cinco bandas, de aproximadamente 70, 65, 50, 40 e 30 kDa no gel SDS-PAGE. Este é o primeiro trabalho que reporta uma grande capacidade queratinolítica pela linhagem psicrotolerante Lysobacter concretionis A03, sendo o seu emprego biotecnológico e industrial compatível com a redução de gastos energéticos para a degradação de resíduos queratinosos. / In the Antarctic Peninsula, high concentrations of birds nest every year; nevertheless, their feathers do not accumulate in the environment, suggesting the action of the local microbiota. Keratinases are the enzymes able to degrade keratin, identified mainly in thermophilic and mesophilic micro-organisms. The aim of this work was the identification of psychrophilic or psychrotolerant feather degrading bacteria, in order to reduce the energy consumption for the industrial application of keratinases. Penguin feathers samples were collected in King George Island, Antarctic, the material was spread in feather meal agar plates (FMA 1%) and incubated at 4 – 30 °C. Six isolates capable of growing on FMA were selected and incubated in skimmed milk agar; of these, three formed clear zones indicative of proteolytic activity, between 9 and 30°C, preferable at pH 9.0. Total DNA of isolates was extracted and the rRNA 16S gene was amplified and sequenced. Proteolytic isolates were identified as Lysobacter concretionis (A03), Arthrobacter sp. (A08) and Chryseobacterium sp. (A17U). The crude extract of the three bacteria was characterized along 7 days of cultivation at 20 to 40°C on feather meal broth (FMB, 1%). All bacterial strains showed medium alkalinization, optimum growing and enzymatic production at 20 °C, between third and fourth days, in despite of its optimal enzymatic activity on azocasein and azokeratin have been determined between 35 and 40°C. According to zymography, strain A08 produced only one protease, A17U three and A03 nine proteolytic enzymes, this later standing out due to their high feather meal degradation in 7 days of cultivation and by their tolerance to high salt concentrations, being, therefore, selected for Phylogenetic analysis, purification methods of gel filtration chromatography, aqueous two-phase partition (ATP) and three-phase partition (TPP). The isolate was identified by phylogeny as Lysobacter concretionis, with a bootstrap value of 100%. The best results in purification were achieved by TPP, despite has not been possible the isolation of a single protein, with recovery of 82% of enzymatic activity and a purification factor of 3.59. The SDS-PAGE showed the presence of five bands of approximately 70, 65, 50, 40 and 30 kDa. This is the first report of great keratinolytic ability by the psychrotolerant strain of Lysobacter concretionis A03, thus, its industrial use its compatible with the reduction of energetic costs for the degradation of keratin wastes by enzymatic digestion.
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Discriminação de ambientes aquáticos poluídos e não poluídos através da amplificação e clivagem do rDNA 16SKoller, Francisco Fernando de Castilho January 2002 (has links)
O crescimento desordenado da população e a expansão mal planejada das cidades, tem levado a precariedade das condições de saneamento e abastecimento hídrico, tornando a água um importante meio de desenvolvimento e transporte de microrganismos, muitos destes patogênicos. Desta maneira, torna-se necessário além da busca de soluções, o monitoramento eficiente e constante dos níveis e focos de contaminação. O presente trabalho teve como objetivo principal diferenciar ambientes aquáticos poluídos de não poluídos por contaminação de origem fecal, através de padrões moleculares. Para tanto foram escolhidos os arroios Feijó e Carvão, localizados na região metropolitana de Porto Alegre, Rio Grande do Sul, de onde foram coletadas amostras de água no verão e no inverno de 2001, submetidas a determinação do número mais provável (NMP) de coliformes totais e fecais, através da fermentação em tubos múltiplos. No Arroio Feijó foram observados índices de coliformes fecais superiores ao arroio Carvão, portanto o primeiro foi considerado modelo de ambiente aquático poluído e o segundo, não poluído. Seguiu-se a extração do DNA total das amostras brutas, amplificação do rDNA 16S pela PCR e clivagem destes com as enzimas de restrição Rsa I, Taq I e Alu I. Os padrões de clivagens observados com Rsa I sugerem a discriminação destes ambientes, uma variação sazonal foi observada entre as amostras de verão e inverno. O método mostrou-se sensível para uma análise comparativa entre estruturas de comunidades bacterianas em ambientes aquáticos.
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Discriminação de ambientes aquáticos poluídos e não poluídos através da amplificação e clivagem do rDNA 16SKoller, Francisco Fernando de Castilho January 2002 (has links)
O crescimento desordenado da população e a expansão mal planejada das cidades, tem levado a precariedade das condições de saneamento e abastecimento hídrico, tornando a água um importante meio de desenvolvimento e transporte de microrganismos, muitos destes patogênicos. Desta maneira, torna-se necessário além da busca de soluções, o monitoramento eficiente e constante dos níveis e focos de contaminação. O presente trabalho teve como objetivo principal diferenciar ambientes aquáticos poluídos de não poluídos por contaminação de origem fecal, através de padrões moleculares. Para tanto foram escolhidos os arroios Feijó e Carvão, localizados na região metropolitana de Porto Alegre, Rio Grande do Sul, de onde foram coletadas amostras de água no verão e no inverno de 2001, submetidas a determinação do número mais provável (NMP) de coliformes totais e fecais, através da fermentação em tubos múltiplos. No Arroio Feijó foram observados índices de coliformes fecais superiores ao arroio Carvão, portanto o primeiro foi considerado modelo de ambiente aquático poluído e o segundo, não poluído. Seguiu-se a extração do DNA total das amostras brutas, amplificação do rDNA 16S pela PCR e clivagem destes com as enzimas de restrição Rsa I, Taq I e Alu I. Os padrões de clivagens observados com Rsa I sugerem a discriminação destes ambientes, uma variação sazonal foi observada entre as amostras de verão e inverno. O método mostrou-se sensível para uma análise comparativa entre estruturas de comunidades bacterianas em ambientes aquáticos.
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Discriminação de ambientes aquáticos poluídos e não poluídos através da amplificação e clivagem do rDNA 16SKoller, Francisco Fernando de Castilho January 2002 (has links)
O crescimento desordenado da população e a expansão mal planejada das cidades, tem levado a precariedade das condições de saneamento e abastecimento hídrico, tornando a água um importante meio de desenvolvimento e transporte de microrganismos, muitos destes patogênicos. Desta maneira, torna-se necessário além da busca de soluções, o monitoramento eficiente e constante dos níveis e focos de contaminação. O presente trabalho teve como objetivo principal diferenciar ambientes aquáticos poluídos de não poluídos por contaminação de origem fecal, através de padrões moleculares. Para tanto foram escolhidos os arroios Feijó e Carvão, localizados na região metropolitana de Porto Alegre, Rio Grande do Sul, de onde foram coletadas amostras de água no verão e no inverno de 2001, submetidas a determinação do número mais provável (NMP) de coliformes totais e fecais, através da fermentação em tubos múltiplos. No Arroio Feijó foram observados índices de coliformes fecais superiores ao arroio Carvão, portanto o primeiro foi considerado modelo de ambiente aquático poluído e o segundo, não poluído. Seguiu-se a extração do DNA total das amostras brutas, amplificação do rDNA 16S pela PCR e clivagem destes com as enzimas de restrição Rsa I, Taq I e Alu I. Os padrões de clivagens observados com Rsa I sugerem a discriminação destes ambientes, uma variação sazonal foi observada entre as amostras de verão e inverno. O método mostrou-se sensível para uma análise comparativa entre estruturas de comunidades bacterianas em ambientes aquáticos.
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Caracterização da produção de carotenoides pela bactéria Kocuria palustris isolada de solo do Domínio Caatinga: otimização das condições de produção e análise de atividades biológicasSILVA, Tayane de Cássia Dias Mendes 10 February 2017 (has links)
SILVA, Tayane de Cássia Dias Mendes, também é conhecida em citações bibliográficas por: MENDES, Tayane de Cássia Dias / Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-24T20:49:38Z
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DISSERTAÇÃO Tayane de Cássia Dias Mendes Silva.pdf: 2108798 bytes, checksum: d10c373beec7146cd962c9a58bca4571 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-27T21:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2
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DISSERTAÇÃO Tayane de Cássia Dias Mendes Silva.pdf: 2108798 bytes, checksum: d10c373beec7146cd962c9a58bca4571 (MD5)
Previous issue date: 2017-02-10 / CAPES / O grupo dos carotenoides é bastante utilizado como corantes naturais, para enriquecer alimentos e rações, mas também são usados devido suas funções biológicas, como suas propriedades antioxidantes e fotoprotetoras, que resultam no fortalecimento do sistema imunológico e na redução do risco de doenças degenerativas. A produção biotecnológica de carotenoides por microrganismos apresenta-se como uma alternativa viável. Várias bactérias são capazes de produzir pigmentos carotenoides, inclusive do gênero Kocuria. Na região da Caatinga brasileira apenas 1% das bactérias foi descrita, indicando a necessidade de ser explorada a biodiversidade, inclusive como uma fonte natural de carotenoides. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi caracterizar e otimizar a produção de carotenoide por dois isolados bacterianos (FT-7.22 e FT-5.12) da Caatinga, e analisar suas aplicações biológicas. Inicialmente, foi realizada a identificação molecular usando gene ribossomal 16S, em que os isolados foram identificados como Kocuria palustris. Em seguida, realizaram-se planejamentos fatoriais a fim de otimizar a produção de carotenoides, com ensaios em erlenmeyers de 250 ml contendo 50 ml de meio TSB (Tryptic Soy Broth), iniciando as cinéticas de crescimento com uma densidade óptica de concentração de células (OD, 600nm) de 0,1. Nesses ensaios foram avaliados os efeitos dos fatores luminosidade, temperatura de incubação, agitação, tipo de isolado bacteriano e estratégias para homogeneização do cultivo de células (presença ou ausência de espirais), sobre a produção total de carotenoides (μg/L) e produção específica (μg/g). Após obter o ensaio maximizado referente à produção de carotenoides em erlenmeyers, que ocorreu nas condições a 30°C, ambiente claro, 250 rpm e com a presença de espiral no interior dos frascos, buscou-se aumentar a escala de produção utilizando biorreator (10 L), determinando-se a cinética de produção de carotenoide e outros parâmetros durante 48h. Posteriormente, foi realizada a caracterização do pigmento extraído a partir da biomassa bacteriana, através das ferramentas de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC) e Cromatografia Líquida Acoplada à Espectrometria de Massas (LC-MS). Foi encontrado o carotenoide majoritário sarcinaxantina (705 Da), com uma concentração de 112,48 mg/L produzida por Kocuria palustris FT-7.22 e 50.39 mg/L por K. palustris FT-5.12. Bem como os compostos minoritários, seus derivados sarcinaxantina diglicosilada (1029 Da) e monoglicosilada (887 Da), e o licopeno (536,87 Da). A análise como antioxidante mostrou taxas de inibição da oxidação do ácido linoleico de 80,6 ± 0,21% para o extrato de K. palustris FT-7.22. e 73 ± 0,042% para o extrato de carotenoide obtido de K. palustris FT-5.12. Para a aplicação como fotoprotetor o extrato obtido de Kocuria palustris FT-7.22 apresentou um FPS de 6.81 ± 0.64 e o extrato de K. palustris FT-5.12 mostrou um FPS de 4.65 ± 0.83. Dessa forma, pode-se sugerir que Kocuria palustris FT-7.22 destacou-se na produção de carotenoide sarcinaxantina e apresentou melhores valores de atividades biológicas, podendo ser utilizado em futuros estudos de formulação de cosméticos e em indústrias desse setor. / The carotenoid group is widely used as natural dyes to enrich foods and feeds, but they are also used because of their biological functions, such as their antioxidant and photoprotective properties, which result in strengthening the immune system and reducing the risk of degenerative diseases. The biotechnological production of carotenoids by microorganisms is a viable alternative. Several bacteria are capable of producing carotenoid pigments, including the genus Kocuria. In the Brazilian Caatinga region, only 1% of the bacteria were described, indicating the need to exploit biodiversity, including as a natural source of carotenoids. Thus, the objective of this work was to characterize and optimize carotenoid production by two bacterial isolates (FT-7.22 and FT-5.12) from Caatinga, and to analyze their biological applications. Initially, molecular identification was performed using 16S ribosomal gene, in which the isolates were identified as Kocuria palustris. Factorial schedules were then performed to optimize carotenoid production with 250 ml Erlenmeyer assays containing 50 ml TSB medium (Tryptic Soy Broth), initiating growth kinetics with an optical density of cell concentration (OD, 600nm) of 0.1. In these tests the effects of the factors of luminosity, incubation temperature, agitation, bacterial isolate type and strategies for cell culture homogenization (presence or absence of spirals), on the total carotenoid production (μg/L) and specific production (μg/g). After obtaining the maximized assay for the production of carotenoids in erlenmeyers, which occurred under the conditions at 30°C, light environment, 250 rpm and with the presence of a spiral inside the bottles, the scale of production was investigated using bioreactor (10L), determining the kinetics of carotenoid production and other parameters during 48h. Subsequently, the characterization of the pigment extracted from the bacterial biomass was performed using the High Efficiency Liquid Chromatography (HPLC) and Liquid Chromatography coupled to Mass Spectrometry (LC-MS). Was found the major carotenoid sarcinaxanthin (705 Da) at a concentration of 112.48 mg/L produced by Kocuria palustris FT-7.22 and 50.39 mg/L by K. palustris FT-5.12. As well as the minor compounds, their derivatives diglycosylated (1029 Da) and monoglycosylated sarcinaxanthin (887 Da), and lycopene (536.87 Da). Antioxidant analysis showed rates of inhibition of linoleic acid oxidation of 80.6 ± 0.21% for K. palustris FT-7.22 extract and 73 ± 0.042% for the carotenoid extract obtained from K. palustris FT-5.12. For the application as photoprotector, the extract obtained from Kocuria palustris FT-7.22 presented a FPS of 6.81 ± 0.64 and K. palustris extract FT-5.12 showed an SPF of 4.65 ± 0.83. Thus, it can be suggested that Kocuria palustris FT-7.22 was highlighted in the production of carotenoid sarcinaxanthin and presented better values of biological activities, being able to be used in future studies of cosmetic formulation and in industries of this sector.
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