Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-07-24Bitstream added on 2014-06-13T20:41:05Z : No. of bitstreams: 1 novello_apf_dr_araiq.pdf: 2183203 bytes, checksum: 27042c5ec8d4993548db395a201c8898 (MD5) / Outros / Acidithiobacillus ferrooxidans (A. ferrooxidans) é uma bactéria quimioautotrófica capaz de oxidar íon ferroso ou sulfetos minerais para a obtenção de energia. Bornita e calcopirita são dois sulfetos de cobre que possuem a mesma composição elementar, mas diferem na susceptibilidade para a biolixiviação. Este trabalho teve por objetivo a análise proteômica diferencial de A. ferrooxidans em resposta à mudança do substrato íon ferroso para os sulfetos minerais calcopirita ou bornita. Comparativamente a outras doze linhagens de A. ferrooxidans, a linhagem LR apresentou uma das maiores velocidades de oxidação sobre ambos os minerais em experimentos de respirometria, sendo selecionada para ser utilizada na análise proteômica. Respostas de células de A. ferrooxidans LR à bornita ou calcopirita foram investigadas utilizando-se 2D-PAGE e espectrometria de massas. O perfil de proteínas totais de células livres expostas aos minerais por 24 ou 48 horas foi comparado com o perfil das células não expostas (controle). Para bornita, detectou-se indução na síntese das proteínas chaperonina (groEL), antioxidante da família AhpC/Tsa e aldeído desidrogenase, enquanto que proteína de domínio radical SAM, frutose-1-6-bifosfatase, proteína de choque térmico HslU, carboidrato quinase, ribulose bifosfato carboxilase e proteínas ribossomais S2 e L25 tiveram sua síntese reprimida. Alterações opostas na expressão protéica foram detectadas para duas formas da fructose-bifosfato aldolase, as quais apresentaram valores distintos de ponto isoelétrico, sugerindo o envolvimento de modificações pós-traducionais desta proteína em A. ferrooxidans em resposta à bornita. Todas as alterações detectadas para a bornita não foram observadas na presença de calcopirita, não sendo detectada pela abordagem utilizada qualquer alteração significativa em células expostas a este mineral... / Acidithiobacillus ferrooxidans (A.ferrooxidans) is a chemoautotrophic bacterium able to oxidize ferrous iron or mineral sulfides to obtain energy. Bornite and chalcopyrite are two copper sulfides having the same elemental composition but differ in relation to the susceptibility for bioleaching process. The aim of this work was to perform a differential proteomic analysis of the A. ferrooxidans response to the exchange of ferrous ion as an energetic substrate to the mineral sulfides chalcopyrite or bornite. Among twelve A. ferrooxidans strains, the LR strain presented one of the highest oxidative rates on both minerals by respirometric assays, and was chosen for the proteomic analysis studies. The bacterium responses to bornite or chalcopyrite were investigated by 2D-PAGE and mass spectrometry. The total protein profiles of cells exposed to bornite or chalcopyrite for 24 or 48 hours were compared to the one of control not exposed to minerals. For bornite, were detected an induction for the proteins chaperonin (groEL), AhpC/Tsa family antioxidant and aldehyde dehydrogenase, whereas the proteins radical SAM domain, fructose-1-6- bisphosphatase, carbohydrate kinase, HslU heat shock protein, ribulose bisphosphate carboxylase and the ribosomal proteins S2 and L25 were repressed. For the protein fructosebisphosphate aldolase two forms having distinct isoelectric points were observed suggesting pos-translational modification of this protein in the A. ferrooxidans response to bornite. No significant alteration of the protein expression was detected for cells exposed to chalcopyrite. Therefore, the proteomic analyses show that these minerals lead to distinct cellular responses in A. ferrooxidans. Distinct responses were detected by proteomic analysis of the periplasmic fraction for chalcopyrite-attached cells in relation to non-attached cells. The analysis by 2D showed four proteins that presented... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-26T18:29:15Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1028506 bytes, checksum: 8419cc523f0e9bd5b6f9e4ea14453897 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-26T18:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1028506 bytes, checksum: 8419cc523f0e9bd5b6f9e4ea14453897 (MD5) Previous issue date: 2003-03-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Avaliou-se a ação dos desinfetantes álcool 70%, detergente neutro 5%, formol 10%, hipoclorito de sódio 0,5% de cloro ativo e dos antibióticos penicilina 200 mg/mL, estreptomicina 200 mg/mL e cloranfenicol 200 mg/mL, sobre a adesão e a reprodução de Pasteuria penetrans em Meloidogyne javanica. Bem como a ação direta de hipoclorito de sódio, em diferentes concentrações de cloro ativo, sobre a adesão e a morfologia dos endósporos e o período necessário para promover a desinfestação de placas contaminadas com endósporos da bactéria em solução de hipoclorito de sódio a 0,5% de cloro ativo. Os tratamentos com álcool, detergente neutro e antibióticos não impediram a adesão nem a reprodução de P. penetrans, e incremento de 277% e 169% na adesão dos endósporos nos tratamentos com álcool e detergente neutro respectivamente, com relação à testemunha. Formol a 10% não afetou a adesão dos endósporos porém inibiu seu desenvolvimento ao passo que o hipoclorito de sódio a 0,5% de cloro ativo impediu a adesão dos endósporos aos nematóides e, portanto, a multiplicação da bactéria. O pré-tratamento dos endósporos de P. penetrans com hipoclorito de sódio, em diferentes concentrações de cloro ativo, afetaram drasticamente a adesão dos endósporos de P. penetrans aos juvenis de M. javanica, principalmente em concentrações a partir de 0,125%. O estudo morfológico mostrou que houve mudanças na estrutura dos endósporos, iniciando com a dissolução das fibras parasporais em hipoclorito de sódio a 0,125% e atingindo destruição total das mesmas a 0,5%. Quando placas contaminadas com endósporos da bactéria foram submersas em uma solução de hipoclorito de sódio a 0,5% de cloro ativo, 1 minuto de contato já foi o suficiente para promover a eliminação de 85% dos endósporos das placas e 15 minutos para completa desinfestação das mesmas. Conclui-se, portanto, que o hipoclorito de sódio é um potente agente inativante de endósporos de P. penetrans atuando num curto período de tempo, podendo ser recomendada a utilização de hipoclorito de sódio a 0,5% de cloro ativo por 15 minutos para a desinfestação de vidrarias contaminadas com P. penetrans. / The action of the disinfectants alcohol 70%, neutral detergent 5%, formol 10%, sodium hypochlorite 0,5% of active chlorine and of the antibiotics penicillin 200 mg/mL, streptomicin 200 mg/mL and chloranphenicol 200 mg/mL on the attachment and reproduction of Pasteuria penetrans in Meloidogyne javanica was evaluated. The direct action of sodium hypochlorite, in different concentration of active chlorine, on the attachment and morphology of the endospores was also evaluated, as well as the time required for disinfestation of glass petri dishes contaminated with the bacterial endospores in sodium hypochlorite at 5% of active chlorine. Treatments with alcohol, detergent and antibiotics did not impair the attachment or the reproduction of P. penetrans, and increments of 277% and 169% in the attachment of the endospores were observed in the treatments with alcohol and detergent, respectively. Formol 10% did not affect the attachment but inhibited the bacterial development while sodium hypochlorite at 5% of active chlorine impaired the attachment of the endospores to the nematode and, consequently, the multiplication of the bacteria. Pre-treatment of P. penetrans endospores with sodium hypochlorite in different concentrations of active chlorine drastically affected the attachment to M. javanica juveniles, mainly in concentrations above 0,125%. The morphological study showed changes in the structure of the endospores, beginning with the dissolution of the parasporal fibers in sodium hypochlorite at 0,125% of active chlorine and reaching the total destruction of them at 0,5%. One minute of immersion of the contaminated petri dishes in sodium hypochlorite 0,5% of active chlorine was enough to eliminate 85% of the bacterial endospores and 15 minutes for a complete disinfestation of them. / Dissertação importada do Alexandria

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:01:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8544_1.pdf: 706882 bytes, checksum: 7f552d13edf81608cb94ae198a8dccde (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Neste estudo foi investigada a capacidade antimicrobiana in vitro do extrato hidroalcoólico de alecrim (Rosmarinus officinalis Linn.) sobre bactérias orais planctônicas. Foram utilizados o extrato puro, suas diluições de 1/2 à 1/512, clorexidina e cepas padrão de Streptococcus mitis ATCC 98811, Streptococcus sanguinis ATCC 10556, Streptococcus mutans ATCC 25175, Streptococcus sobrinus ATCC 27609 e Lactobacillus casei ATCC 7469. Inicialmente, foi determinada a CIM do extrato de alecrim pelo método de difusão em meio sólido sobre as cepas supracitadas. Em seguida, foi determinada a CIMA do extrato sobre as cepas padrão de Streptococcus mitis ATCC 98811, Streptococcus sanguinis ATCC 10556, Streptococcus mutans ATCC 25175, Streptococcus sobrinus ATCC 27609, na presença de sacarose a 5%. Todos os ensaios foram realizados em duplicata e a clorexidina foi utilizada como solução controle. A CIM variou de 66,5 mg/mL a 266 mg/mL e a CIMA de 16 mg/mL a 33,2 mg/mL. Foi observado que o extrato hidroalcoólico puro de alecrim e diluído até 1/16 apresentou ação antimicrobiana sobre as cepas padrão ensaiadas, exceto sobre Streptococcus mitis ATCC 98811. Não foi observado efeito inibitório de aderência sobre Streptococcus sanguinis ATCC 10556. Streptococcus mutans ATCC 25175 e Lactobacillus casei ATCC 7469 foram as cepas mais sensíveis à ação antimicrobiana in vitro do extrato de alecrim

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Jaqueline Oliveira (jaqueoliveiram@gmail.com) on 2008-12-03T15:55:33Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_HugoDeAlmeidaSilva.pdf: 1378682 bytes, checksum: 3890c0001da50032e86de35c261d77c5 (MD5) / Approved for entry into archive by Georgia Fernandes(georgia@bce.unb.br) on 2009-02-16T14:52:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_HugoDeAlmeidaSilva.pdf: 1378682 bytes, checksum: 3890c0001da50032e86de35c261d77c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-02-16T14:52:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_HugoDeAlmeidaSilva.pdf: 1378682 bytes, checksum: 3890c0001da50032e86de35c261d77c5 (MD5) / Uma varredura em busca de atividades proteolíticas em bactérias patogênicas e não-patogênicas do gênero Leptospira identificou a presença de atividade aminopeptidolítica apenas nas primeiras. Visando a esclarecer este achado, o presente trabalho propôs caracterizar bioquímicamente a enzima potencialmente responsável pela atividade leucil-aminopeptidásica presente apenas em sorovares patogênicos de Leptospira. Por meio da clonagem do gene pepA, que codifica uma provável leucilaminopeptidase (LAP) citossólica, obtivemos a forma recombinante ativa da enzima, que possui características filogenética e bioquímica semelhantes àquelas enzimas da família M17 das metalopeptidases. Assim como outras enzimas dessa família, essa LAP recombinante demonstrou atividade catalítica sobre o substrato L-Leu-AMC, com uma atividade ótima em pH 8,5, e termofilia com temperatura ótima de 50 °C. Além disso, a enzima exibiu comportamento típico de cinética clássica de Michaelis-Menten. É inibida irreversivelmente por EDTA, apesar de outras LAPs serem reativadas por cofatores iônicos. Aparentemente, a enzima forma um oligômero de 320 kDa, apresentando dependência dessa forma para sua atividade sobre o substrato L-Leu-AMC, em gel de eletroforese. Adicionalmente, foi produzido soro -HaLAP em camundongos isogênicos, demonstrando a antigenicidade da enzima e possibilitando a posterior utilização de anticorpos em outros estudos sobre a expressão diferenciada dessa peptidase durante infecções. Esse trabalho abre caminho para a elucidação de novos mecanismos operando exclusivamente em membros patogênicos de bactérias do gênero Leptospira. _________________________________________________________________ ABSTRACT / Screening proteolytic activities in non-pathogenic and as well in pathogenic bacteria of the genus Leptospira, we identified the presence of aminopeptydolitic activity in the latter only. Aiming at clarification of this finding, this work led to the biochemical characterization of the enzyme which appears to be responsible for the leucyl-aminopeptydase activity present in pathogenic Leptospira serotypes. By the cloning og the pepA gene coding a putative cytosolic leucyl-aminopeptidase (LAP), we obtained the active recombinant enzyme, showing phylogenetic and biochemical features similar to those present in the M17 metallopeptidase enzymes family. Like other enzymes belonging to this family, recombinant LAP revealed catalytic activity upon L-Leu-AMC substrate, with optimal activity at pH 8.5, and a slight termophilic behavior, with its optimal temperature at 50 °C. Besides, the enzyme presented typical Michaelis-Menten kynetics. It is irreversibly inhibited by EDTA, although other LAPs shows reactivation towards ionic cofactors. Apparently, the enzyme forms a 320 kDa oligomer, structure which the activity on the L-Leu-AMC substrate in eletrophoresis gel seems to be dependent. In adittion, the antiserum against -HaLAP produced in isogenic mice showed its high antigenicty. This finding suggests that the enzyme could be employed to produce specific antibody, which could be useful in clarifying the differential expression of the peptidase in the course of severe infections. This work opens a new avenue that may lead to elucidation of novel mechanisms exclusively associated with pathogenic species within the genus Leptospira.

Foi estudado o efeito das gemas de ovos de aves hiperimunizadas contra Escherichia coli patogênica para suínos sobre a imunidade passiva (IP) de leitões recém-nascidos em uma unidade produtora de leitões (UPL). Foram avaliados densidade ótica do ELISA (DO), peso corporal (PC) e ocorrência de diarréia diária (OcD) em 137 leitões recém-nascidos oriundos de 25 fêmeas primíparas não vacinadas contra E. coli. De cada fêmea, foram separados 6 leitões recémnascidos de ambos os sexos, excluindo-se os mais leves e os mais pesados, divididos em 3 tratamentos e 2 repetições. A análise estatística para DO e PC foi realizada através de ANOVA, a comparação de médias entre tratamentos pelo Lsmeans e o teste do qui-quadradro para a OcD. As gemas estavam armazenadas à -5ºC, in natura e, minutos antes do fornecimento, foram descongeladas e diluídas em 15 mL de uma solução tampão (PBS). Os tratamentos foram fornecidos via oral, tendo sido os seguintes: T1: 2mL de PBS (controle) em 2 doses, a primeira ao nascer e a segunda 2 horas após o nascimento; T2: 2mL de gemas de ovos com título de 100.000 de anticorpos (IgY) contra E. coli em 2 doses, ao nascer e 2 horas após o nascimento; T3: idem ao T2, além de 2mL de gema de 3 em 3 dias até os leitões completarem 12 dias de idade. Foram realizadas duas coletas de sangue em 1 leitão/tratamento/porca: a primeira às 24 horas e a segunda aos 14 dias de idade. O título de IgY contra E. coli dos soros foi determinado por ELISA. A DO do ELISA dos leitões de T2 e T3 foi significativamente maior às 24 horas e aos 14 dias em relação ao controle (P≤0,0001). T3, T2 e T1 permaneceram 87, 79 e 72,5% do tempo estudado sem diarréia (P≤X20,0001). Os animais de T3 foram significativamente mais pesados do que os do T1 (P≤0,08), mas não diferiram de T2. Os resultados deste estudo sugerem que o uso de gemas de aves hiperimunizadas contra E. coli age efetivamente na prevenção da diarréia dos leitões e o seu uso contínuo é mais vantajoso do que o fornecimento somente ao nascer.

Os danos ao ambiente, bem como os custos econômicos relacionados à adubação nitrogenada têm estimulado a busca por alternativas que possam diminuir a utilização deste fertilizante sem que haja diminuição na produtividade. Uma das possibilidades é a utilização de bactérias diazotróficas que podem se associar a plantas de sorgo para fixar nitrogênio gasoso (N2) e/ou produzir substâncias promotoras de crescimento de plantas (PCPs). Outra possibilidade é a seleção de genótipos eficientes na associação com bactérias diazotróficas, já que a eficiência na associação depende de características específicas das plantas. Deste modo, o presente estudo objetivou avaliar a ocorrência e a localização de bactérias diazotróficas associadas ao sorgo, selecionar cultivares eficientes na associação com bactérias diazotróficas, bem como identificar os isolados mais eficientes em fixar nitrogênio e produzir PCPs. A atividade experimental foi realizada em duas etapas. Na primeira etapa foram utilizados 14 cultivares de sorgo forrageiro em vasos e, na segunda, seis cultivares de sorgo granífero em campo. A seleção dos cultivares de sorgo foi baseada na eficiência de absorção de nitrogênio, através da quantificação de matéria seca e do teor de nitrogênio total da parte aérea das plantas. Para o isolamento das bactérias diazotróficas foi utilizado meio de enriquecimento semi-sólido. Após, quantificou-se a produção de PCPs e os níveis de N2 fixados pelos isolados, a fim de selecionar os mais eficientes. A matéria seca e o teor de N no tecido dos cultivares avaliados foram influenciados pela adubação nitrogenada. A presença de bactérias diazotróficas foi constatada em todos os cultivares de sorgo avaliados. Através da análise de similaridade, verificou-se que, em ambos experimentos, foram formados quatro grupos de isolados, sendo que três se agruparam com 100% de similaridade com as estirpes padrões Burkholderia tropica Ppe8 (ATCC BAA-831), Herbaspirillum seropedicae Z67 (ATCC 35892) e Azospirillum. brasilense Sp7 (ATCC 29145). A distribuição das bactérias isoladas em ambos experimentos foi influenciada pelo genótipo da planta. Além do genótipo, a localização das bactérias isoladas das plantas de sorgo granífero foi influenciada pela adubação nitrogenada, sendo que as raízes foram o sítio preferencial de colonização das bactérias nestes cultivares. Todos os isolados foram aptos em fixar nitrogênio e produzir ácido indol-acético in vitro.

A detecção de Salmonella sp. é fundamental nos programas de controle de salmonelose. Métodos de detecção mais eficientes permitem uma melhor determinação do nível de infecção dos rebanhos, um melhor entendimento da epidemiologia da infecção por Salmonella sp. e o desenvolvimento de programas de controle do patógeno, que visem a segurança biológica do alimento. Nos métodos convencionais, o enriquecimento seletivo é uma etapa crítica, pois inibe a microbiota competitiva e permite a multiplicação de Salmonella sp. Vários caldos de enriquecimento seletivo têm sido comparados quanto à eficiência na recuperação de Salmonella sp. a partir de alimentos, contudo existem poucos estudos relativos a fezes de suínos. O objetivo deste trabalho foi comparar caldos de enriquecimento seletivo para o isolamento de Salmonella sp. a partir de fezes de suínos. Numa primeira fase, amostras de fezes foram contaminadas artificialmente e os caldos Rappaport-Vassiliadis incubado a 42°C (RV), Tetrationato Müller-Kauffmann a 37°C (TMK37) e 42°C (TMK42), e Selenito Cistina (SC) a 37°C foram testados, em associação com meios sólidos seletivos: Rambach (RA), Xilose Lisina Tergitol 4 (XLT4), e Verde Brilhante Vermelho de Fenol Lactose Sacarose (VB). Na segunda fase os caldos RV, TMK37 e TMK42, semeados nos meios XLT4 e VB, foram testados com amostras naturalmente contaminadas. Na primeira fase o RV, TMK42 e TMK37 foram mais eficientes que o SC. No isolamento de Salmonella sp. em amostras naturalmente contaminadas os caldos TMK42 e RV foram superiores ao TMK37. O desempenho destes influenciou diretamente a capacidade seletiva e indicadora dos meios sólidos seletivos. No presente estudo, a associação TMK42/XLT4 demonstrou ser mais sensível, e a RV/XLT4 mais específica. O ágar VB também é recomendado para aumentar a probabilidade de detecção do patógeno. Desta forma os caldos RV e TMK42 e o ágar XLT4 e o VB foram considerados os mais indicados para a implantação de protocolos de detecção de Salmonella sp. em fezes suínas. / Detection of Salmonella is a key point in veterinary Salmonella research and surveillance programs. Through an efficient method for pathogen detection, the herd infection leveI could be better determinated, which would permit the understanding of Salmonella infection epidemiology and the developing of pathogen control programs in order to achieve biological food safety. In a conventional isolation method, the selective enrichment is a critical step because it suppresses competitive microflora and permits Salmonella sp. to proliferate. Several selective enrichment broths have been compared for recovering Salmonella sp. from foods. However the isolation ITomswine feces has been conduct in a few studies. The aim of this study was to compare the efficiency of different selective enrichment methods for the isolation of Salmonella sp. from swine feces. In a first step, swine feces samples were artificially contaminated and Rappaport- Vassiliadis broth incubated at 42°C (RV), MüIler-Kauffmann tetrathionate broth at 37°C (MKT37) and 42°C (MKT42), and Selenite Cystine broth at 37°C (SC) were tested, in association with selective plating media: Xylose Lisine Tergitol 4 (XLT4), Brilliant Green Phenol Red Lactose Sucrose (BG). Later, in a second step, RV, MKT42 and MKT37 broths were streaked in XLT4 and BG media and tested with naturally contaminated samples. At the first step RV, MKT42 and MKT37 broths were more efficient than SC broth. When Salmonella sp. were isolated from naturally contaminated samples MKT42 and RV broth were superior to MKT37. The performance of the broths affected the selectivity and differentiation capacity of the selective plating media used. In the present study the association MKT42/XLT4 was the most sensitive and RV/XLT4 was the most specific. The use of BG agar is also recommended to improve the likelihood of Salmonella sp. detection. Therefore, RVand MKT42 broth, and XLT4 and VB media were considered the most appropriated to be used in detection protocols of Salmonella sp. from swine feces.

Bactérias diazotróficas podem promover o crescimento do milho por meio da fixação biológica do nitrogênio (FBN) ou pela produção de fitohormônios. Devido a tendência mundial de redução do uso de fertilizantes sintéticos na agricultura, existe um grande interesse em caracterizar a diversidade destes microrganismos para que seu potencial seja melhor explorado. Assim o objetivo deste trabalho foi avaliar a diversidade bacteriana sob três aspectos: a) diversidade de bactérias diazotróficas associadas a plantas de milho; b) diversidade total da comunidade microbiana do solo; c) comprovar o potencial das bactérias diazotróficas em promover o crescimento das plantas. A detecção da diversidade das bactérias diazotróficas, foi baseada na amplificação e no seqüenciamento do gene nifH isolado de amostras ambientais. Para a detecção da diversidade bacteriana total do solo, fragmentos do gene ribossomal do 16S foram amplificados e seqüenciados a partir do DNA bacteriano extraído diretamente do solo. Bactérias diazotróficas foram isoladas e testadas quanto a FBN e a produção de fitohormônios. As análises dos genes nifH indicaram que a associação das bactérias diazotróficas com plantas de milho pode sofrer influência do ambiente. O solo da rizosfera apresentou maior diversidade de bactérias diazotróficas em relação às raízes e ao colmo do milho. Com relação a riqueza das bactérias totais do solo, foram encontradas até 6.543 espécies bacterianas por grama de solo, sendo este valor muito menor do que supunha a literatura. Embora a diversidade das bactérias diazotróficas e das bactérias totais tenha sido elevada nas amostras utilizadas, detectou-se a presença de gêneros dominantes em todas as comunidades avaliadas. Os isolados bacterianos obtidos demonstraram possuir potencial para aumentar a produtividade das plantas e podem ser considerados como promissores para inoculação em plantas nas condições edafoclimáticas do Estado do Rio Grande do Sul. / Diazotrophic bacteria are capable of promoting the growth of maize by biological nitrogen fixation (BNF) or by plant hormone production. Since decreasing the use of synthetic fertilizers in agriculture is a worldwide necessity, there is a great interest in characterizing bacterial diversity to better explore their potential. The aim of this work was evaluate: a) the diazotrophic bacterial diversity associated with maize; b) The total bacterial diversity of soil; c) show the potential of diazotrophic bacterial as plant growth promoting To evaluate the diversity of nitrogen fixing bacteria in various ecosystems, universal primers were used to amplify the nifH gene by culture-independent means. The total bacterial diversity was assessed by amplification and sequencing of the 16S ribosomal gene using the DNA extracted from soil. Dizotrophic bacterium were isolated and tested for BNF and plant hormone production. The nifH gene analysis indicated that diazotrophic bacterial diversity can be environment controlled. The rhizosphere soil presented greater diazotrophic diversity than the roots and stem of maize. According to the analysis of the 16S gene fragments amplified from soil samples, it was found 6,543 bacterial species in one gram of soil which is smaller than supposed by the actual researches. Although diazotrophic bacterial diversity and the total bacterial diversity had been large in all samples used, we detected the presence of some dominant genera in all communities evaluated. The diazotrophic bacterial isolates shown to be able to increase plant growth in the Rio Grande do Sul climatic conditions.

A detecção de Salmonella sp. é fundamental nos programas de controle de salmonelose. Métodos de detecção mais eficientes permitem uma melhor determinação do nível de infecção dos rebanhos, um melhor entendimento da epidemiologia da infecção por Salmonella sp. e o desenvolvimento de programas de controle do patógeno, que visem a segurança biológica do alimento. Nos métodos convencionais, o enriquecimento seletivo é uma etapa crítica, pois inibe a microbiota competitiva e permite a multiplicação de Salmonella sp. Vários caldos de enriquecimento seletivo têm sido comparados quanto à eficiência na recuperação de Salmonella sp. a partir de alimentos, contudo existem poucos estudos relativos a fezes de suínos. O objetivo deste trabalho foi comparar caldos de enriquecimento seletivo para o isolamento de Salmonella sp. a partir de fezes de suínos. Numa primeira fase, amostras de fezes foram contaminadas artificialmente e os caldos Rappaport-Vassiliadis incubado a 42°C (RV), Tetrationato Müller-Kauffmann a 37°C (TMK37) e 42°C (TMK42), e Selenito Cistina (SC) a 37°C foram testados, em associação com meios sólidos seletivos: Rambach (RA), Xilose Lisina Tergitol 4 (XLT4), e Verde Brilhante Vermelho de Fenol Lactose Sacarose (VB). Na segunda fase os caldos RV, TMK37 e TMK42, semeados nos meios XLT4 e VB, foram testados com amostras naturalmente contaminadas. Na primeira fase o RV, TMK42 e TMK37 foram mais eficientes que o SC. No isolamento de Salmonella sp. em amostras naturalmente contaminadas os caldos TMK42 e RV foram superiores ao TMK37. O desempenho destes influenciou diretamente a capacidade seletiva e indicadora dos meios sólidos seletivos. No presente estudo, a associação TMK42/XLT4 demonstrou ser mais sensível, e a RV/XLT4 mais específica. O ágar VB também é recomendado para aumentar a probabilidade de detecção do patógeno. Desta forma os caldos RV e TMK42 e o ágar XLT4 e o VB foram considerados os mais indicados para a implantação de protocolos de detecção de Salmonella sp. em fezes suínas. / Detection of Salmonella is a key point in veterinary Salmonella research and surveillance programs. Through an efficient method for pathogen detection, the herd infection leveI could be better determinated, which would permit the understanding of Salmonella infection epidemiology and the developing of pathogen control programs in order to achieve biological food safety. In a conventional isolation method, the selective enrichment is a critical step because it suppresses competitive microflora and permits Salmonella sp. to proliferate. Several selective enrichment broths have been compared for recovering Salmonella sp. from foods. However the isolation ITomswine feces has been conduct in a few studies. The aim of this study was to compare the efficiency of different selective enrichment methods for the isolation of Salmonella sp. from swine feces. In a first step, swine feces samples were artificially contaminated and Rappaport- Vassiliadis broth incubated at 42°C (RV), MüIler-Kauffmann tetrathionate broth at 37°C (MKT37) and 42°C (MKT42), and Selenite Cystine broth at 37°C (SC) were tested, in association with selective plating media: Xylose Lisine Tergitol 4 (XLT4), Brilliant Green Phenol Red Lactose Sucrose (BG). Later, in a second step, RV, MKT42 and MKT37 broths were streaked in XLT4 and BG media and tested with naturally contaminated samples. At the first step RV, MKT42 and MKT37 broths were more efficient than SC broth. When Salmonella sp. were isolated from naturally contaminated samples MKT42 and RV broth were superior to MKT37. The performance of the broths affected the selectivity and differentiation capacity of the selective plating media used. In the present study the association MKT42/XLT4 was the most sensitive and RV/XLT4 was the most specific. The use of BG agar is also recommended to improve the likelihood of Salmonella sp. detection. Therefore, RVand MKT42 broth, and XLT4 and VB media were considered the most appropriated to be used in detection protocols of Salmonella sp. from swine feces.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-28Bitstream added on 2014-06-13T20:33:36Z : No. of bitstreams: 1 marcon_hs_me_botib.pdf: 1524532 bytes, checksum: 73e3664d86fdbb7b69d358e0398f60ab (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Wolbachia é uma bactéria endossimbionte comumente encontrada nos tecidos reprodutores de invertebrados, sendo herdada vertical e horizontalmente. Esta bactéria é desencadeadora de inúmeras alterações reprodutivas, dentre elas a incompatibilidade citoplasmática. Bactéria Wolbachia apresenta oito diferentes tipos de genoma, identificados de A a H. Dentre os hospedeiros da Wolbachia estão as moscas-das-frutas do gênero Anastrepha, que são um importante inseto-praga causador de inúmeras perdas na fruticultura de vários países na América. Neste estudo, foram utilizados os primers 16S rDNA, ftsZ e wsp na detecção da Wolbachia e identificação do supergrupo em três populações de Anastrepha do complexo fraterculus, de diferentes regiões do estado de São Paulo. Em todas as amostras de moscas foi detectada a presença da Wolbachia do supergrupo A, através da utilização dos primers 16S rDNA e wsp, visto que o ftsZ apresentou baixa sensibilidade na detecção desta bactéria em Anastrepha. Comparações das sequências do gene wsp dos 62 indivíduos no Genebank possibilitaram a identificação de duas linhagens de Wolbachia, uma pertencente a Anastrepha sp. 2 (wAsp2B) e a outra ao nematóide Brugia pahangi (Bp-1-1001). Com isso, sugere-se a ocorrência de transferência horizontal da linhagem Bp-1-1001 em Anastrepha através das vespas parasitas de dípteros. A partir de comparações entre as sequências geradas com o gene wsp, observou-se a ocorrência de quatro diferentes sequências pertencentes a novas linhagens de Wolbachia, denominadas wAsc, wAnc, wBjc e wBsp. Essas linhagens estão distribuídas nas diferentes populações de moscas-das-frutas do gênero Anastrepha / Wolbachia is a endosymbiont bacteria commonly found in reproducer tissue of invertebrates, being vertically and horizontally inherited. This bacteria cause innumerable reproductive alterations, among them a cytoplasmic incompatibility. Wolbachia have eight different types of genome, designated from A to H. Among Wolbachia host there are the fruit flies of genus Anastrepha. These arthropods are important pest insect that causes many losses in fruit production of many countries of America. In this work, were used the primers 16S rDNA, ftsZ and wsp to detect Wolbachia and to identify the supergroups of three Anastrepha populations the different regions of São Paulo state, Brazil. In all fruit flies samples, it was detected the presence of Wolbachia of the A supergroup, through the use of primers 16S rDNA and wsp, since ftsZ has low sensitivity in detecting this bacteria in Anastrepha. Comparisons of the wsp gene sequences of 62 samples in GeneBank, allowed the identification of two Wolbachia lineages, one relating to Anastrepha sp. 2 (wAsp2B) and other in Brugia pahangi nematode (Bp-1-1001). Therefore it is propose the occurrence the horizontal transference of Wolbachia lineages Bp-1- 1001 into Anastrepha through the did parasite wasps of dipterous. The comparisons among the wsp gene sequences showed the occurrence of four different sequences, possibly belonging to the news lineages of Wolbachia, which were named wAsc, wAnc, wBjc and wBsp. These lineages are distributed in different fruit flies of populations of the Anastrepha genus