As análises dos voláteis por SPME/CG-EM das partes aéreas, flores e frutos de Bidens sulphurea e Bidens gardneri permitiram-nos constatar diferenças em suas composições químicas. Porém, em todas as frações analisadas os compostos majoritários foram os sequiterpenos b-cariofileno, germacreno D e biciclogermacreno. Apesar dos constituintes majoritários coincidirem nas frações analisadas das duas espécies, foi possível constatar a presença exclusiva de determinados metabólitos em cada fração. A partir das frações hexânicas, oriundas dos extratos etanólicos de B. sulphurea (partes aéreas e flores) e B. gardneri (partes aéreas), foram identificadas trinta e cinco, dezenove e vinte substâncias por CG-EM, respectivamente. Na fração hexânica das partes aéreas de B. sulphurea (BsfcEt/Hx) foram identificados, como constituintes majoritários, o óxido de cariofileno, espatulenol e _- cariofileno, enquanto que na fração hexânica de suas flores (BsflorEt/Hx) os principais constituintes identificados foram _-amirina e _-sitosterol e na fração hexânica das partes aéreas de B. gardneri (BgfcEt/Hx) foram os metabólitos _-estigmasterol e o trans-fitol. O estudo químico da espécie B. sulphurea (partes aéreas e flores) conduziu ao isolamento de um sesquiterpeno (1), 5 flavonas (2, 10, 13-15), 8 flavonóis (3-8, 11, 16), 1 aurona (9) e 2 chalconas (12, 17). Já o estudo de B. gardneri (partes aéreas) conduziu ao isolamento de 4 ácidos clorogênicos (21, 22, 27, 28), 3 poliacetilenos (18-20), 2 flavonas (25, 27), 3 flavanonas (23, 24, 30) e 2 chalconas (29, 31). Os metabólitos 3-O-_-glicopiranosil-tetradeca- 6(E),12(E)-dieno-8,10-diino-1,14-diol (18), 1-O-_-glicopiranosil-14-hidróxi-tetradeca-6(E), 12(E)-dieno-8,10-diino-3-ona (19), 4-metóxi-7-O-_-glicopiranosil-8,3-diidróxi-flavanona (23), 4-metóxi-7-O-_-(6-acetil)-glicopiranosil-8,3-diidróxi-flavanona (24) e 7-O-_-(6- trans-p-cumaroil)-glicopiranosil-8,34-triidróxi-flavanona (30) estão sendo descritos pela primeira vez na literatura. Enquanto que os flavonóides 3-O-_-xilopiranosil-quercetina (5), 3-O-a-arabinofuranosil-kaempferol (8) e 3-O-b-(6-trans-cafeoil)-galactopiranosil-quercetina (16) estão sendo relatados pela primeira vez na família Asteraceae e as substâncias 4(15)- eudesmeno-1_,6_-diol (1), 6-C-_-glicopiranosil-apigenina (2), 3-O-_-arabinofuranosilquercetina (6), 8-C-_-glicopiranosil-apigenina (13), 6-C-_-glicopiranosil-luteolina (14), 8-C- _-glicopiranosil-luteolina (15), ácido 1-metil-5-O-E-cafeoilquínico (22) e 7-O-_- glicopiranosil-apigenina (25) estão sendo relatadas pela primeira vez no gênero Bidens. Além disso, convém destacar que a partir das substâncias 2-O-_-glicopiranosil-trideca-3(E),11(E)- dieno-5,7,9-triino-1,13-diol (20), 4-metóxi-4-O-_-glicopiranosil-okanina (29) e 4-O-_-(6- trans-p-cumaroil)-glicopiranosil-okanina (31) há poucos relatos na literatura e ainda não foram descritos dados de suas propriedades biológicas. Na avaliação da atividade antialérgica das substâncias isoladas, os flavonóides causaram inibição da liberação de _-hexosaminidase de forma dose-dependente, sendo que as substâncias 11 e 31 foram as mais ativas e apresentaram CI50 de 5,1 ± 1,3 M e 5,8 ± 1,2 M, respectivamente. Dentre os extratos e frações avaliados biologicamente, observou-se que BsfcEt/Hx (maior teor de sesquiterpenos) causou um estímulo da liberação de _-hexosaminidase, enquanto que BsfcEt/Ac foi a fração mais ativa (CI50 = 1,3 ± 1,1g/mL). As análises desta última fração e de BsfcEt/DCM por CLAE-DAD-EM e CLAE-DAD-EM/EM revelaram que seus constituintes majoritários são os flavonóis 3, 4, 6 e 7. / The SPME/GC-MS analyses of aerial parts, flowers and fruits of Bidens sulphurea and Bidens gardneri showed the differences in their chemical compositions. However the sesquiterpenes _-caryophyllene, germacrene D and bicyclogermacrene were identified in all fractions analyzed as major compounds. It was observed the exclusive presence of metabolites in each fraction, in spite of major constituents were equal in fractions analyzed of two species. Thirty-five, nineteen and twenty substances were identified in the hexane fractions from ethanol extracts of B. sulphurea (aerial parts and flowers) and B. gardneri (aerial parts) by GC-MS. The major compounds were caryophyllene oxide, spathulenol and _-caryophyllene in the hexane fraction from aerial parts of B. sulphurea (BsfcEt/Hx), while _-amyrin and _- sitosterol were identified in the hexane fraction of its flowers and _-stigmasterol and transphytol were main constituents identified in the hexane fraction from aerial parts of B. gardneri. The chemical study of species B. sulphurea (aerial parts and flowers) led to the isolation of one sesquiterpene (1), five flavones (2, 10, 13-15), eight flavonols (3-8, 11, 16), one aurone (9) and two chalcones (12, 17). From B. gardneri (aerial parts), four chlorogenic acids (21, 22, 27, 28), three polyacetylenes (18-20), two flavones (25, 27), three flavanones (23, 24, 30) and two chalcones (29, 31) were isolated. The substances 3-O-_-glucopyranosyltetradeca-6(E),12(E)-dien-8,10-diin-1,14-diol(18), 1-O-_-glucopyranosyl-14-hydroxytetradeca-6(E),12(E)-dien-8,10-diin-3-one(19),4-methoxy-7-O_glucopyranosyl-8,3-dihydroxyflavanone (23), 4-methoxy-7-O-_-(6-acetyl)-glucopyranosyl-8,3-dihydroxyflavanone(24) and 7-O-_-(6-trans-p-coumaroyl)-glucopyranosyl-8,34-trihydroxyflavanone(30) are described for the first time in the literature. Whereas the flavonols 3-O-_-xylopyranosyl quercetin (5), 3-O-a-arabinofuranosyl kaempferol (8) and 3-O--(6-transcaffeoyl)-galactopyranosyl quercetin (16) are described for the first time in the Asteraceaeand 4(15)-eudesmene-1_,6_-diol (1), 6-C-_-glucopyranosyl apigenin (2), 3-O-_-arabinofuranosyl quercetin (6), 8-C-_-glucopyranosyl apigenin (13), 6-C-_-glucopyranosylluteolin (14), 8-C-_-glucopyranosyl luteolin (15), 1-methyl-5-O-E-caffeoylquinic acid (22)and 7-O-_-glucopyranosyl apigenin (25) for the first time in the genus Bidens. Moreover,there are few reports of the isolation and there are not studies of biological activities from 2-O-_-glucopyranosyl-trideca-3(E),11(E)-dien-5,7,9-triin-1,13-diol (20), 4-methoxy-4-O-_-glucopyranosyl okanin (29) and 4-O-_-(6-trans-p-coumaroyl)-glucopyranosyl okanin (31).The flavonoids showed inhibition of _-hexosaminidase released with dependent-doseresponse and the substances 11 (IC50 = 5,1 ± 1,3 M) and 31 (IC50 = 5,8 ± 1,2 M) were themost active. The BsfcEt/Hx fraction (highest concentration of sesquiterpenes) induced _-hexosaminidase released, while the BsfcEt/Ac fraction exhibited the lower IC50 (1,3 ±1,1g/mL). The flavonoids 3, 4, 6 and 7 were identified, by HPLC-DAD-MS and HPLCDAD-MS/MS, as major constituents in BsfcEt/Ac and BsfcEt/DCM fractions.

As análises dos voláteis por SPME/CG-EM das partes aéreas, flores e frutos de Bidens sulphurea e Bidens gardneri permitiram-nos constatar diferenças em suas composições químicas. Porém, em todas as frações analisadas os compostos majoritários foram os sequiterpenos b-cariofileno, germacreno D e biciclogermacreno. Apesar dos constituintes majoritários coincidirem nas frações analisadas das duas espécies, foi possível constatar a presença exclusiva de determinados metabólitos em cada fração. A partir das frações hexânicas, oriundas dos extratos etanólicos de B. sulphurea (partes aéreas e flores) e B. gardneri (partes aéreas), foram identificadas trinta e cinco, dezenove e vinte substâncias por CG-EM, respectivamente. Na fração hexânica das partes aéreas de B. sulphurea (BsfcEt/Hx) foram identificados, como constituintes majoritários, o óxido de cariofileno, espatulenol e _- cariofileno, enquanto que na fração hexânica de suas flores (BsflorEt/Hx) os principais constituintes identificados foram _-amirina e _-sitosterol e na fração hexânica das partes aéreas de B. gardneri (BgfcEt/Hx) foram os metabólitos _-estigmasterol e o trans-fitol. O estudo químico da espécie B. sulphurea (partes aéreas e flores) conduziu ao isolamento de um sesquiterpeno (1), 5 flavonas (2, 10, 13-15), 8 flavonóis (3-8, 11, 16), 1 aurona (9) e 2 chalconas (12, 17). Já o estudo de B. gardneri (partes aéreas) conduziu ao isolamento de 4 ácidos clorogênicos (21, 22, 27, 28), 3 poliacetilenos (18-20), 2 flavonas (25, 27), 3 flavanonas (23, 24, 30) e 2 chalconas (29, 31). Os metabólitos 3-O-_-glicopiranosil-tetradeca- 6(E),12(E)-dieno-8,10-diino-1,14-diol (18), 1-O-_-glicopiranosil-14-hidróxi-tetradeca-6(E), 12(E)-dieno-8,10-diino-3-ona (19), 4-metóxi-7-O-_-glicopiranosil-8,3-diidróxi-flavanona (23), 4-metóxi-7-O-_-(6-acetil)-glicopiranosil-8,3-diidróxi-flavanona (24) e 7-O-_-(6- trans-p-cumaroil)-glicopiranosil-8,34-triidróxi-flavanona (30) estão sendo descritos pela primeira vez na literatura. Enquanto que os flavonóides 3-O-_-xilopiranosil-quercetina (5), 3-O-a-arabinofuranosil-kaempferol (8) e 3-O-b-(6-trans-cafeoil)-galactopiranosil-quercetina (16) estão sendo relatados pela primeira vez na família Asteraceae e as substâncias 4(15)- eudesmeno-1_,6_-diol (1), 6-C-_-glicopiranosil-apigenina (2), 3-O-_-arabinofuranosilquercetina (6), 8-C-_-glicopiranosil-apigenina (13), 6-C-_-glicopiranosil-luteolina (14), 8-C- _-glicopiranosil-luteolina (15), ácido 1-metil-5-O-E-cafeoilquínico (22) e 7-O-_- glicopiranosil-apigenina (25) estão sendo relatadas pela primeira vez no gênero Bidens. Além disso, convém destacar que a partir das substâncias 2-O-_-glicopiranosil-trideca-3(E),11(E)- dieno-5,7,9-triino-1,13-diol (20), 4-metóxi-4-O-_-glicopiranosil-okanina (29) e 4-O-_-(6- trans-p-cumaroil)-glicopiranosil-okanina (31) há poucos relatos na literatura e ainda não foram descritos dados de suas propriedades biológicas. Na avaliação da atividade antialérgica das substâncias isoladas, os flavonóides causaram inibição da liberação de _-hexosaminidase de forma dose-dependente, sendo que as substâncias 11 e 31 foram as mais ativas e apresentaram CI50 de 5,1 ± 1,3 M e 5,8 ± 1,2 M, respectivamente. Dentre os extratos e frações avaliados biologicamente, observou-se que BsfcEt/Hx (maior teor de sesquiterpenos) causou um estímulo da liberação de _-hexosaminidase, enquanto que BsfcEt/Ac foi a fração mais ativa (CI50 = 1,3 ± 1,1g/mL). As análises desta última fração e de BsfcEt/DCM por CLAE-DAD-EM e CLAE-DAD-EM/EM revelaram que seus constituintes majoritários são os flavonóis 3, 4, 6 e 7. / The SPME/GC-MS analyses of aerial parts, flowers and fruits of Bidens sulphurea and Bidens gardneri showed the differences in their chemical compositions. However the sesquiterpenes _-caryophyllene, germacrene D and bicyclogermacrene were identified in all fractions analyzed as major compounds. It was observed the exclusive presence of metabolites in each fraction, in spite of major constituents were equal in fractions analyzed of two species. Thirty-five, nineteen and twenty substances were identified in the hexane fractions from ethanol extracts of B. sulphurea (aerial parts and flowers) and B. gardneri (aerial parts) by GC-MS. The major compounds were caryophyllene oxide, spathulenol and _-caryophyllene in the hexane fraction from aerial parts of B. sulphurea (BsfcEt/Hx), while _-amyrin and _- sitosterol were identified in the hexane fraction of its flowers and _-stigmasterol and transphytol were main constituents identified in the hexane fraction from aerial parts of B. gardneri. The chemical study of species B. sulphurea (aerial parts and flowers) led to the isolation of one sesquiterpene (1), five flavones (2, 10, 13-15), eight flavonols (3-8, 11, 16), one aurone (9) and two chalcones (12, 17). From B. gardneri (aerial parts), four chlorogenic acids (21, 22, 27, 28), three polyacetylenes (18-20), two flavones (25, 27), three flavanones (23, 24, 30) and two chalcones (29, 31) were isolated. The substances 3-O-_-glucopyranosyltetradeca-6(E),12(E)-dien-8,10-diin-1,14-diol(18), 1-O-_-glucopyranosyl-14-hydroxytetradeca-6(E),12(E)-dien-8,10-diin-3-one(19),4-methoxy-7-O_glucopyranosyl-8,3-dihydroxyflavanone (23), 4-methoxy-7-O-_-(6-acetyl)-glucopyranosyl-8,3-dihydroxyflavanone(24) and 7-O-_-(6-trans-p-coumaroyl)-glucopyranosyl-8,34-trihydroxyflavanone(30) are described for the first time in the literature. Whereas the flavonols 3-O-_-xylopyranosyl quercetin (5), 3-O-a-arabinofuranosyl kaempferol (8) and 3-O--(6-transcaffeoyl)-galactopyranosyl quercetin (16) are described for the first time in the Asteraceaeand 4(15)-eudesmene-1_,6_-diol (1), 6-C-_-glucopyranosyl apigenin (2), 3-O-_-arabinofuranosyl quercetin (6), 8-C-_-glucopyranosyl apigenin (13), 6-C-_-glucopyranosylluteolin (14), 8-C-_-glucopyranosyl luteolin (15), 1-methyl-5-O-E-caffeoylquinic acid (22)and 7-O-_-glucopyranosyl apigenin (25) for the first time in the genus Bidens. Moreover,there are few reports of the isolation and there are not studies of biological activities from 2-O-_-glucopyranosyl-trideca-3(E),11(E)-dien-5,7,9-triin-1,13-diol (20), 4-methoxy-4-O-_-glucopyranosyl okanin (29) and 4-O-_-(6-trans-p-coumaroyl)-glucopyranosyl okanin (31).The flavonoids showed inhibition of _-hexosaminidase released with dependent-doseresponse and the substances 11 (IC50 = 5,1 ± 1,3 M) and 31 (IC50 = 5,8 ± 1,2 M) were themost active. The BsfcEt/Hx fraction (highest concentration of sesquiterpenes) induced _-hexosaminidase released, while the BsfcEt/Ac fraction exhibited the lower IC50 (1,3 ±1,1g/mL). The flavonoids 3, 4, 6 and 7 were identified, by HPLC-DAD-MS and HPLCDAD-MS/MS, as major constituents in BsfcEt/Ac and BsfcEt/DCM fractions.

Dois dos principais aspectos da Química de Produtos Naturais são a identificação e a determinação estrutural dos compostos orgânicos presentes em materiais de origem vegetal ou animal. Para realizar esta tarefa são empregados diversos métodos de separação e espectroscópicos. Dentre os métodos espectroscópicos, destaca-se a espectroscopia de ressonância magnética nuclear pela riqueza dos dados fornecidos. Entretanto, o desenvolvimento da área exige métodos cada vez mais eficientes e sensíveis, para permitir o estudo de amostras em quantidades cada vez menores. Neste trabalho, empregamos três estratégias distintas para aumentar a eficiência da análise de amostras de produtos naturais por RMN. A primeira estratégia busca acelerar o processo de identificação dos componentes de frações de extratos vegetais através da separação virtual dos componentes da mistura, baseada nas diferenças de seus coeficientes de difusão. Esta estratégia permitiu identificar os quatro componentes majoritários da fração em acetato de etila do extrato etanólico das partes aéreas de Bidens sulphurea (Asteraceae) através de um estudo de RMN DOSY-2D. A segunda estratégia é dedicada ao problema da baixa sensibilidade da RMN 13C, o que torna difícil, e em alguns casos, proibitiva em termos do tempo necessário, a análise de amostras muito pequenas. Dada a dificuldade de se obter diretamente um espectro com uma relação sinal/ruído adequada, uma abordagem possível se baseia em estratégias de pós-processamento de um espectro de RMN em que predomina o ruído. A estratégia utilizada neste trabalho fornece um espectro reconstruído de secções que foram previamente processadas para a eliminação do ruído pela decomposição do valor singular (SVD). Os espectros assim processados nos auxiliaram na identificação e/ou elucidação estrutural de dois alcalóides obtidos de Duguetia furfuraceae (Annonaceae) e um poliacetileno e dois flavonóides de B. sulphurea (Asteraceae). A terceira estratégia utilizada neste trabalho se baseia na ampliação dos parâmetros rotineiramente obtidos numa análise por RMN, com a finalidade de fornecer novos subsídios para a determinação da estrutura de produtos naturais. Neste sentido, a determinação das constantes de acoplamento heteronuclear forneceu dados valiosos para a identificação de dois poliacetilenos obtidos de B. gardneri. / Two major aspects of Natural Products Chemistry are the identification and structure determination of organic compounds in materials of vegetable or animal. To accomplish this task are used various methods of separation and spectroscopic. Among spectroscopic methods, we highlight the spectroscopy of nuclear magnetic resonance by the wealth of data provided. However, the development of the area requires methods increasingly efficient and sensitive to allow the study of small or diluted samples. In this work, we employ three different strategies to increase the efficiency of analysis of samples of natural products by NMR. The first strategy seeks to accelerate the process of identifying the components of fractions of plant extracts through the virtual separation of the components of the mixture based on differences in their diffusion coefficients. With this strategy we have identified four major components of the in ethyl acetate fraction of ethanol extract of aerial parts of Bidens sulphurea (Asteraceae) by 2D DOSY NMR. The second strategy is devoted to the problem of low sensitivity of 13C NMR, which makes it difficult, and in some cases prohibitive in terms of time, the analysis of very small samples. Due to the difficulty of obtaining directly a spectrum with a signal-to-noise ratio adequate, a possible approach is based on strategies for post-processing of an NMR spectrum in which noise predominates. This strategy used here provides a spectrum of reconstructed sections were first processed to remove noise by singular value decomposition (SVD). Spectra processed of this way helped us in identifying and / or structural elucidation of two alkaloids derived from Duguetia furfuraceae (Annonaceae) and a polyacetylene and two flavonoids from Bidens gardneri (Asteraceae). The third strategy used in this work is based on expansion of the parameters routinely obtained in an analysis by NMR in order to provide new subsidies for the structure determination of natural products. In this sense, the determination of heteronuclear coupling constants provided valuable data for the identification of two polyacetylenes obtained from B. gardneri.

Dois dos principais aspectos da Química de Produtos Naturais são a identificação e a determinação estrutural dos compostos orgânicos presentes em materiais de origem vegetal ou animal. Para realizar esta tarefa são empregados diversos métodos de separação e espectroscópicos. Dentre os métodos espectroscópicos, destaca-se a espectroscopia de ressonância magnética nuclear pela riqueza dos dados fornecidos. Entretanto, o desenvolvimento da área exige métodos cada vez mais eficientes e sensíveis, para permitir o estudo de amostras em quantidades cada vez menores. Neste trabalho, empregamos três estratégias distintas para aumentar a eficiência da análise de amostras de produtos naturais por RMN. A primeira estratégia busca acelerar o processo de identificação dos componentes de frações de extratos vegetais através da separação virtual dos componentes da mistura, baseada nas diferenças de seus coeficientes de difusão. Esta estratégia permitiu identificar os quatro componentes majoritários da fração em acetato de etila do extrato etanólico das partes aéreas de Bidens sulphurea (Asteraceae) através de um estudo de RMN DOSY-2D. A segunda estratégia é dedicada ao problema da baixa sensibilidade da RMN 13C, o que torna difícil, e em alguns casos, proibitiva em termos do tempo necessário, a análise de amostras muito pequenas. Dada a dificuldade de se obter diretamente um espectro com uma relação sinal/ruído adequada, uma abordagem possível se baseia em estratégias de pós-processamento de um espectro de RMN em que predomina o ruído. A estratégia utilizada neste trabalho fornece um espectro reconstruído de secções que foram previamente processadas para a eliminação do ruído pela decomposição do valor singular (SVD). Os espectros assim processados nos auxiliaram na identificação e/ou elucidação estrutural de dois alcalóides obtidos de Duguetia furfuraceae (Annonaceae) e um poliacetileno e dois flavonóides de B. sulphurea (Asteraceae). A terceira estratégia utilizada neste trabalho se baseia na ampliação dos parâmetros rotineiramente obtidos numa análise por RMN, com a finalidade de fornecer novos subsídios para a determinação da estrutura de produtos naturais. Neste sentido, a determinação das constantes de acoplamento heteronuclear forneceu dados valiosos para a identificação de dois poliacetilenos obtidos de B. gardneri. / Two major aspects of Natural Products Chemistry are the identification and structure determination of organic compounds in materials of vegetable or animal. To accomplish this task are used various methods of separation and spectroscopic. Among spectroscopic methods, we highlight the spectroscopy of nuclear magnetic resonance by the wealth of data provided. However, the development of the area requires methods increasingly efficient and sensitive to allow the study of small or diluted samples. In this work, we employ three different strategies to increase the efficiency of analysis of samples of natural products by NMR. The first strategy seeks to accelerate the process of identifying the components of fractions of plant extracts through the virtual separation of the components of the mixture based on differences in their diffusion coefficients. With this strategy we have identified four major components of the in ethyl acetate fraction of ethanol extract of aerial parts of Bidens sulphurea (Asteraceae) by 2D DOSY NMR. The second strategy is devoted to the problem of low sensitivity of 13C NMR, which makes it difficult, and in some cases prohibitive in terms of time, the analysis of very small samples. Due to the difficulty of obtaining directly a spectrum with a signal-to-noise ratio adequate, a possible approach is based on strategies for post-processing of an NMR spectrum in which noise predominates. This strategy used here provides a spectrum of reconstructed sections were first processed to remove noise by singular value decomposition (SVD). Spectra processed of this way helped us in identifying and / or structural elucidation of two alkaloids derived from Duguetia furfuraceae (Annonaceae) and a polyacetylene and two flavonoids from Bidens gardneri (Asteraceae). The third strategy used in this work is based on expansion of the parameters routinely obtained in an analysis by NMR in order to provide new subsidies for the structure determination of natural products. In this sense, the determination of heteronuclear coupling constants provided valuable data for the identification of two polyacetylenes obtained from B. gardneri.