No description available.

No description available.

No description available.

No description available.

No description available.

Multiple sclerosis (MS) is a demyelinating inflammatory disease affecting the central nervous system (CNS). The pathology of MS is characterized by the infiltration of immune cells into the CNS and by the destruction of myelin-producing cells, the oligodendrocytes. CD8 T cells constitute a prominent fraction of CNS-infiltrating immune cells. They have an effector memory phenotype and can persist as clonal expansions for years in the CNS of MS patients sug gesting their active participation in the local immune response. The work presented in this thesis emanates from the hypothesis that the microenvironment of MS lesions favors and enhances the effector functions of CD8 T cells. First, we show that glial cells, especially astrocytes, expressed elevated levels of the pro-inflammatory cytokine interleukin (IL)-15 in MS lesions. Treatment of astrocytes in vitro with interferon-g, interleukin-1b or tumor necrosis factor resulted in elevated levels of IL-15. This IL-15 activated co-cultured antigen-specific CD8 T cell lines and augmented their lytic enzyme content and antigen-restricted cytotoxicity. These results prove that IL-15 provided by astrocytes in MS lesions may enhance the effector function of CD8 T cells present in MS lesions and consequently exacerbate the observed tissue damage. Second, we showed that oligodendrocytes in active MS lesions expressed elevated levels of the ligands of NKG2D, an activating receptor expressed by CD8 T cells, gd T cells and natural killer (NK) cells. NKG2D ligands were expressed by primary human adult oligodendrocytes in vitro and increased their susceptibility to cytotoxicity mediated by all NKG2D-expressing cells. These results prove that oligodendrocytes in MS lesions may have an increased susceptibility to immune-mediated cytotoxicity because they express NKG2D ligands. Third, we evaluated the contribution of human leukocyte antigen (HLA) -E to the dialogue between immune cells and o / La sclérose en plaques (SEP) est une maladie inflammatoire qui affecte le système nerveux central (SNC). La pathologie de la SEP est caractérisée par la destruction de la gaine de la myéline et des cellules qui la produisent, les oligodendrocytes ainsi que par une perte axonale. Les lésions observées au sein du SNC contiennent de nombreuses cellules immunitaires ainsi que des cellules gliales (microglies et astrocytes) démontrant un phénotype activé. De nombreuses études ont démontré que les cellules immunitaires détectées au sein du SNC pendant la SEP sont impliquées dans la pathogenèse de cette maladie. En particulier, les cellules T CD8 sont nombreuses dans les lésions SEP et leur phénotype suggère une participation active dans les dommages infligés aux oligodendrocytes. Les résultats présentés dans cette thèse émanent de l'hypothèse que l'environnement des lésions SEP favorise l'activation des cellules T CD8 ainsi que leur cytotoxicité envers les oligodendrocytes. Nous avons démontré que les astrocytes dans les lésions SEP expriment des niveaux élevés d'interleukine (IL) -15, une cytokine impliquée dans l'activation et la préservation des cellules mémoire T CD8 (entre autres). La co-culture in vitro d'astrocytes humains exprimant de hauts niveaux d'IL-15 avec des lignées T CD8 a prouvé que l'IL-15 fourni par les astrocytes augmente l'expression d'enzymes lytiques par les cellules CD8 T. Ces conditions de co-cultures amplifient aussi leur cytotoxicité envers des cellules cibles. Ces résultats suggèrent que l'IL-15 présente au sein des lésions de SEP peut augmenter la capacité des cellules CD8 T à tuer des cellules cibles tels que les oligodendrocytes.Le second chapitre de cette thèse démontre l'expression des ligands NKG2D par les oligodendrocytes dans les lésions SEP. Ces ligands, habituellement exprimés par des cellules endommagées, se lient au récepteur NKG2D, prése

No description available.

The pathway of internalization of insulin and asialoglycoprotein into rat liver parenchymal cells was through the same endosomal components. At no time was either ligand associated with the biosynthetic Golgi apparatus. Rat liver Golgi fractions were found to be contaminated by endosomes, hence their redesignation as Golgi-endosome fractions (GE). / Proton translocation activity of different GE fractions showed a gradient of progressively decreasing activity which correlated with increasing time, of ligand accumulation therein. Based on the distinctive kinetics of proton translocation activity and ligand accumulation the endosomal components of the Golgi intermediate and light fractions, which fractionate coincidently on percoll gradient centrifugation, have been considered to be distinct components of the endocytic apparatus. / The activity of the EGF receptor kinase has been assessed in plasmalemmal and GE fractions isolated from untreated animals as well as those injected with EGF in vivo. In untreated animals receptor kinase activity was readily detected in plasmalemmal fractions, but was latent in GE fractions, suggesting an intraluminal orientation of the EGF binding region of the receptor in endosomes. Consequent to the administration of EGF in vivo a majority of the receptor kinase translocated from plasmalemma to endosomes. Receptor kinase activity remaining on the plasmalemma was activated. Endosomally located receptor kinase activity was no longer latent following EGF administration, was maximally stimulated with respect to autophosphorylation activity and at later times following internalization, may become activated. These data are consistent with a role for both plasmalemmal and endosomally located EGF receptor kinase in transmembrane signalling.

Implantation is a complex process that involves precisely orchestrated and reciprocal protein signalling between the uterine endometrium and the implanting blastocyst. The free-floating blastocyst is able to secrete factors that activate certain protein signalling pathways in the luminal epithelial cells of the uterus, specifically at future sites of implantation. The activation of the Wnt protein signalling pathway has been shown to be a critical component of this embryo-uterine cross-talk that is required for successful implantation to occur. Canonical Wnt signalling can be visualized in a special strain of TCF/Lef transgenic mice. Previous microarray studies on these reporter mice have revealed that the genes encoding Ptgis, a prostaglandin I2 synthase, and Cyp26b1, a member of the cytochrome P450 superfamily of enzymes, are up-regulated in the luminal epithelial cells of mouse uteri at the time implantation occurs. β-galactosidase stainings of uterine tissues isolated from reporter mice allowed for the characterization of Wnt/β-catenin signalling within the uterus at different time points of pregnancy and pseudopregnancy. The observed expression pattern of canonical Wnt signalling was then compared to that of Ptgis and Cyp26b1 in vivo using immunofluorescently labelled slides of the uterine tissues under investigation. Ptgis and Cyp26b1 were shown to follow the same expression pattern as Wnt/β-catenin signalling in all tissue sections. Uterine exposure to Wnt7a around the time that implantation would usually occur stimulates canonical Wnt activity in the absence of a blastocyst in the pseudopregnant mouse uterus. This activation of Wnt/β-catenin protein signalling resulted in the increase in Ptgis and Cyp26b1 protein levels suggesting that these two molecules are indeed downstream targets of canonical Wnt signalling. Ptgis and Cyp26b1 expression patterns were shown to be restricted to the luminal epithelial cells of the mouse uterus at the time implantation occurs. Implantation was severely compromised when a Ptgis inhibitor was injected into the mouse uterus at post-coital day 3.0. These results suggest that both Ptgis and Cyp26b1 are components of the Wnt/β-catenin signalling pathway playing essential roles in embryo-uterine cross-talk. Further research needs to be done in order to elucidate the precise mechanisms by which these proteins contribute towards successful implantation and how they are linked to Wnt/β-catenin signalling cascades. / L'implantation est un processus extrêmement complexe qui dépend sur un dialogue moléculaire précis et synchronisé entre l'endomètre maternel et le blastocyste implantatoire. L'embryon est capable de sécréter des molécules qui stimulent des voies de signalisation protéiques particulières dans les régions de l'endomètre maternel où le processus implantatoire aura lieu. La stimulation de la voie Wnt est une signalisation biochimique essentielle au dialogue moléculaire materno-fœtal qui fait partie du processus implantatoire. La voie Wnt canonique peut être visualisée en utilisant un modèle murin transgénique TCF/Lef très spécial incluant le gène rapporteur LacZ. Auparavant, une analyse micropuces ADN sur les souris transgéniques TCF/Lef a conduit à l'identification de plusieurs gènes dont l'expression génique est stimulée par l'activité de la voie Wnt dans les cellules de l'épithélium de l'utérus durant le temps d'implantation. Le but de cette étude est d'analyser la régulation de deux de ces gènes Ptgis, une prostaglandine I2 synthase, et Cyp26b1, un membre de la famille enzymatique cytochrome P450, durant le processus implantatoire. Le marquage β-galactoside est une techniques expérimentale qui a été utilisée dans cette étude pour observer la signalisation Wnt/β-caténine dans l'utérus des souris transgéniques durant différents stades de gestation et de pseudo-gestation. Les résultats obtenus ont identifié une signalisation Wnt canonique très particulière et ce modèle d'expression a été comparé à l'expression protéique de Ptgis et Cyp26b1 in vivo en utilisant le marquage par immunofluorescence sur les tissus utérins d'intérêt. Ptgis et Cyp26b1 ont été démontré à suivre le même modèle d'expression que la voie Wnt/β-caténine dans toutes les sections de tissus utérins analysés. L'exposition utérine à Wnt7a durant le temps quand l'implantation aurait lieu, stimule la voie Wnt canonique même avec l'absence d'un blastocyste dans l'utérus des souris en état de pseudo-gestation. Cette hausse de signalisation Wnt/β-caténine stimule l'expression protéique de Ptgis et Cyp26b1 suggérant qu'en effet, ces deux molécules fonts partie de la signalisation canonique induite par les Wnts. L'expression protéique de Ptgis et de Cyp26b1 a été démontré d'être restreinte aux cellules de l'épithélium luminal utérin durant le processus implantatoire. L'implantation de l'embryon dans l'utérus murin a été empêchée par l'injection d'un inhibiteur de Ptgis dans la cavité utérine 3.0 jours après la fertilisation. Ces résultats suggèrent que Ptgis et Cyp26b1, à travers la signalisation Wnt /β-caténine, jouent un rôle qui est essentiel au dialogue moléculaire materno-fœtal. Les futures recherches vont devoir élucider le mécanisme précis par lequel ces deux protéines contribuent au succès du processus implantatoire et découvrir comment ces deux protéines et leurs gènes sont liés à la signalisation canonique induite par les Wnts.

No description available.