Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-16Bitstream added on 2014-06-13T20:01:16Z : No. of bitstreams: 1 abbade_lc_dr_rcla.pdf: 943072 bytes, checksum: 40b1e8782911f686c229344b103e283d (MD5) / Tabebuia roseoalba (Ridl.) Sandwith é uma espécie nativa de árvores brasileiras com ampla ocorrência, principalmente na floresta semidecídua. Sua floração exuberante favorece o uso em arborização urbana, paisagismo e para o reflorestamento de solos secos e rochosos. Suas sementes são pequenas, leves, aladas, e dispersadas pelo vento. A absorção de água é de suma importância para a germinação, pois permite a retomada das atividades metabólicas, as quais contribuem nos processos de mobilização e assimilação de reservas e alongamento celular. Já a tolerância da perda de água nas sementes implica na capacidade desta se manter viva, possibilitando a viabilidade após períodos de seca. O presente trabalho teve como objetivos: testar diferentes protocolos para a extração de proteínas totais de sementes de ipê-branco e avaliar os extratos obtidos por meio de análise eletroforética em gel de poliacrilamida; investigar as alterações bioquímicas das sementes durante a germinação e sua viabilidade durante o armazenamento, para isso, foram avaliadas a porcentagem de germinação, o índice de velocidade de germinação (IVG) e o conteúdo de lipídios, proteínas, compostos fenólicos e a atividade das enzimas: peroxidase, polifenol oxidase e catalase e adequação do teste de tetrazólio em sementes submetidas ao armazenamento durante o armazenamento por 24 meses. O tampão mais eficiente para a extração de proteínas totais foi o Trisma base (50mM, NaCl 500mM, EDTA 50mM, MgCl2 5mM, (pH 7,5), a extração a quente promoveu maior rendimento e o tampão Trisma base foi o único que permitiu o aparecimento de bandas no gel de eletroforese. Durante a germinação, houve um rápido consumo de amido, carboidratos, lipídios e uma rápida mobilização de proteínas, porém não houve diferença entre as bandas da eletroforese... / Tabebuia roseoalba (Ridl.) Sandwith is a native Brazilian tree with wide occurrence, especially in semi-deciduous forest. Its exuberant blooming favors the use for urban forestry, landscaping and reforestation of dry and rocky soils. Its seeds are small, light, winged and dispersed by the wind. The water absorption is very important for germination, as it allows the resumption of metabolic activities, which contribute to the processes of assimilation and mobilization of reserves and cell elongation. The water loss rate is lower than the absorption which implies the ability to stay alive, enabling the viability after periods of drought. For the protein analysis by electrophoretic techniques, it is necessary to fix the appropriate methodology for different species. This study aimed to: test different protocols for extraction of total protein and evaluate by polyacrylamide gel electrophoretic analysis; investigate the biochemical changes during seed germination and viability during storage, for this, the total germination, the germination speed index (GSI) and the content of lipids, proteins, phenolic compounds and the activity of enzyme, peroxidase, polyphenol oxidase and catalase, were evaluated during storage for 24 months. The methodology for conducting the tetrazolium test in seeds subjected to storage was also established. The buffer for more efficient extraction of total proteins was Trisma base (50mM Trizma base, 500mM NaCl, 50mM EDTA, 5mM MgCl 2 (pH 7.5), the hot extraction provided higher yields and was the only Trisma base that the allowed appearance of protein bands on gel electrophoresis. During germination, there was a rapid consumption of starch, carbohydrates, lipids and proteins with a rapid mobilization of proteins during germination but no difference between the bands of electrophoresis... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Massanori Takaki / Banca: Fabio Socolowshi / Banca: Victor Jose Mendes Cardoso / Banca: Breno Régis Santos / Banca: Carlos Vinicio Vieira / Resumo: Tabebuia roseoalba (Ridl.) Sandwith é uma espécie nativa de árvores brasileiras com ampla ocorrência, principalmente na floresta semidecídua. Sua floração exuberante favorece o uso em arborização urbana, paisagismo e para o reflorestamento de solos secos e rochosos. Suas sementes são pequenas, leves, aladas, e dispersadas pelo vento. A absorção de água é de suma importância para a germinação, pois permite a retomada das atividades metabólicas, as quais contribuem nos processos de mobilização e assimilação de reservas e alongamento celular. Já a tolerância da perda de água nas sementes implica na capacidade desta se manter viva, possibilitando a viabilidade após períodos de seca. O presente trabalho teve como objetivos: testar diferentes protocolos para a extração de proteínas totais de sementes de ipê-branco e avaliar os extratos obtidos por meio de análise eletroforética em gel de poliacrilamida; investigar as alterações bioquímicas das sementes durante a germinação e sua viabilidade durante o armazenamento, para isso, foram avaliadas a porcentagem de germinação, o índice de velocidade de germinação (IVG) e o conteúdo de lipídios, proteínas, compostos fenólicos e a atividade das enzimas: peroxidase, polifenol oxidase e catalase e adequação do teste de tetrazólio em sementes submetidas ao armazenamento durante o armazenamento por 24 meses. O tampão mais eficiente para a extração de proteínas totais foi o Trisma base (50mM, NaCl 500mM, EDTA 50mM, MgCl2 5mM, (pH 7,5), a extração a quente promoveu maior rendimento e o tampão Trisma base foi o único que permitiu o aparecimento de bandas no gel de eletroforese. Durante a germinação, houve um rápido consumo de amido, carboidratos, lipídios e uma rápida mobilização de proteínas, porém não houve diferença entre as bandas da eletroforese... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Tabebuia roseoalba (Ridl.) Sandwith is a native Brazilian tree with wide occurrence, especially in semi-deciduous forest. Its exuberant blooming favors the use for urban forestry, landscaping and reforestation of dry and rocky soils. Its seeds are small, light, winged and dispersed by the wind. The water absorption is very important for germination, as it allows the resumption of metabolic activities, which contribute to the processes of assimilation and mobilization of reserves and cell elongation. The water loss rate is lower than the absorption which implies the ability to stay alive, enabling the viability after periods of drought. For the protein analysis by electrophoretic techniques, it is necessary to fix the appropriate methodology for different species. This study aimed to: test different protocols for extraction of total protein and evaluate by polyacrylamide gel electrophoretic analysis; investigate the biochemical changes during seed germination and viability during storage, for this, the total germination, the germination speed index (GSI) and the content of lipids, proteins, phenolic compounds and the activity of enzyme, peroxidase, polyphenol oxidase and catalase, were evaluated during storage for 24 months. The methodology for conducting the tetrazolium test in seeds subjected to storage was also established. The buffer for more efficient extraction of total proteins was Trisma base (50mM Trizma base, 500mM NaCl, 50mM EDTA, 5mM MgCl 2 (pH 7.5), the hot extraction provided higher yields and was the only Trisma base that the allowed appearance of protein bands on gel electrophoresis. During germination, there was a rapid consumption of starch, carbohydrates, lipids and proteins with a rapid mobilization of proteins during germination but no difference between the bands of electrophoresis... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Hamilton Cabral / Banca: Eleni Gomes / Banca: Luis Henrique Souza Guimarães / Banca: Fernanda Canduri / Banca: Wagner Alves de Souza Júdice / Resumo: Aspártico (E.C. 3.4.23), cisteíno (E.C. 3.4.22) e serino peptidases (E.C. 3.4.21) são endopeptidases, cujos modos de ação são dependentes de resíduos de ácido aspártico, cisteína e serina presentes no sítio catalítico, respectivamente. Atualmente, vários estudos são realizados na busca por novas enzimas com relevantes propriedades bioquímicas para aplicação industrial. Neste contexto, nós propomos a produção de enzimas em bioprocesso submerso, purificação, estudo das propriedades bioquímicas e determinação da especificidade catalítica das peptidases secretadas pelos fungos filamentosos Rhizomucor miehei, Phanerochaete chrysosporium e Leptosphaeria sp. Inicialmente, após produção por bioprocesso submerso, estas enzimas foram purificadas utilizando cromatografias de exclusão molecular e troca iônica. Em ensaios de inibidores na atividade enzimática, notamos inibição das peptidases por pepstatina A (R. miehei), ácido iodoacético/N-Etilmaleimida (P. chrysosporium) e fluoreto de fenil metil sulfonila (Leptosphaeria sp), sendo então definidas como aspártico, cisteíno e serino peptidases, respectivamente. Por SDS-PAGE (12%), as massas moleculares foram estimadas em 37 kDa (aspártico), 23 kDa (cisteíno) e 35 kDa (serino). O máximo de atividade proteolítica foi alcançado em pH 5,5 e 55 ºC para peptidase aspártica secretada por R. miehei; pH 7 e faixa de temperatura 45-55 ºC para cisteíno peptidase secretada por P. chrysosporium, e pH 7 e 45 ºC para serino peptidase secretada por Leptosphaeria sp. Sob efeito de incubação a diferentes pH, a peptidase aspártica mostrou-se estável em condições ácidas (pH 3-5); cisteíno peptidase foi estável em ampla faixa de pH (pH 4-9), e serino peptidase mostrou-se mais estável em condições com tendências alcalinas e pH ligeiramente ácido (pH 5-9). Em todas estas faixas de pH citadas, as peptidases apresentaram atividade proteolítica acima de 80% por 1 hora... / Abstract: Aspartic (EC 3.4.23), cysteine (EC 3.4.22) and serine peptidases (EC 3.4.21) are endopeptidases whose modes of action are dependent on aspartic acid, cysteine and serine residues present in the catalytic site, respectively. Currently, several studies are conducted in the search for new enzymes with relevant biochemical properties for industrial application. In this context, we propose the production of enzymes in submerged bioprocess, purification, the study of biochemical properties and determining the catalytic specificity peptidases secreted by the filamentous fungus Rhizomucor miehei, Phanerochaete chrysosporium and Leptosphaeria sp. Initially, after production submerged bioprocess, these enzymes have been purified using size-exclusion and ion exchange chromatographies. In the effect of inhibitors on enzyme activity, we note peptidase inhibition by pepstatin A (R. miehei), iodoacetic acid/ N-Ethylmaleimide (P. chrysosporium) and phenyl methyl sulfonyl fluoride (Leptosphaeria sp), suggesting that these enzymes are aspartic, cysteine and serine peptidases, respectively. For SDS-PAGE (12%), molecular weights were estimated at 37 kDa (aspartic), 23 kDa (cysteine) and 35 kDa (serine). Maximum proteolytic activity was achieved at pH 5.5 and 55 °C for aspartic peptidase secreted by R. miehei; pH 7 and temperature range 45-55 °C for cysteine peptidase secreted by P. chrysosporium and pH 7 and 45 °C for serine peptidase secreted by Leptosphaeria sp. Under incubation at different pH effect, aspartic peptidase was stable under acidic conditions (pH 3-5); cysteine peptidase was stable in wide pH range (pH 4-9), and serine peptidase was more stable under alkaline conditions and pH slightly acidic (pH 5-9). In all these pH ranges mentioned, peptidases showed proteolytic activity above 80% by 1 hour incubation. As regards the thermal stability, cysteine peptidase was more thermostable enzyme and serine peptidase described the lowest temperature ... / Doutor