O processo de desmineralização óssea tem sido mostrado vantajoso em procedimentos de enxertia óssea empregando blocos osseos, porem a sua utilização na periodontia em enxertos osseos autógenos particulados não esta ainda descrita na literatura. De acordo com a literatura é possível observar que existem diferentes agentes demineralizantes na pratica clinica os quais podem ser empregados no processo de desmineralização óssea, razão pela qual este estudo teve como objetivo comparar dois diferentes agentes desmineralizantes de enxertos ósseos autógenos particulados (ácido cítrico pH1 a 50% e tetraciclina hidroclorada a 50mg/ml) em diferentes tempos de aplicação, quanto ao efeito produzido no reparo de defeitos críticos em calvária de ratos. Foram utilizados 120 ratos adultos machos com aproximadamente 4 meses de vida. Neste estudo foi utilizado o modelo de defeito crítico de 8 mm, esses animais foram divididos em 8 grupos de estudo formados por 15 animais (5 em cada período experimental): CN (controle negativo): os defeitos permaneceram sem enxerto; CP (controle positivo): os defeitos foram preenchidos por osso particulado não desmineralizado; AC 15: os defeitos foram preenchidos com osso particulado desmineralizado por ácido cítrico durante 15 segundos; AC 30: os defeitos foram preenchidos com osso particulado desmineralizado por ácido cítrico durante 30 segundos; AC 60: os defeitos foram preenchidos com osso particulado desmineralizado por ácido cítrico durante 60 segundos; TCN 15: os defeitos foram preenchidos com osso particulado desmineralizado por tetraciclina durante 15 segundos; TCN 30: os defeitos foram preenchidos com osso particulado desmineralizado por tetraciclina durante 30 segundos; TCN 60: os defeitos foram preenchidos com osso particulado desmineralizado por tetraciclina durante 60 segundos. Foi realizada aeutanasia dos animais aos 7, 30 e 60 dias para realização de microtomografia computadorizada e analise histomorfometrica, para avaliar a área, volume e densidade óssea nos defeitos após os tempos experimentais definidos. Aos 7 dias, não era esperada formação de tecido ósseo significante, mas surpreendentemente, os espécimes desmineralizados com ácido cítrico demonstraram precocidade na produção de eventos regenerativos já nesse período. Durante os períodos experimentais foi possível observar como os espécimes tratados com acido cítrico apresentavam maior formação óssea nos defeito quando comparados com os controles e com os grupos onde empregados tetraciclina. Efeito provavelmente relacionado com a eliminação da parte mineral do osso e liberação de Proteinas morfogeneticas ósseas e fatores de crescimentos, liberados a partir da matriz ossea Concluiu-se que a desmineralização com ácido cítrico do osso autógeno particulado enxertado em defeitos críticos promoveu maior área, volume e densidade de formação óssea do que a desmineralização com tetraciclina e do que a não desmineralização. Observando-se melhores resultados aos 15 e 30 segundos de desmineralização. / Bone demineralization process has been shown useful in bone grafting procedures using onlay bone grafting, however its use in periodontics in bony autogenous particulate graft is not yet described in the literature. According to the literature you can see that there are different demineralizantes agents in clinical practice which can be used in bone demineralization process, which is why this study was to compare two different demineralization agents of bone autogenous particulate graft (citric acid pH1 the 50% tetracycline Hydrochloride and 50mg / ml) in different application time, the effect produced in the repair of critical defects in rat calvarium. 120 adult male rats with approximately 4 months of age were used. In this study we used the 8mm critical defect model, the animals were divided into 8 study groups consisting of 15 animals (5 in each experimental period): CN (negative control): the defect remained free graft; CP (positive control): the defects were filled by nondemineralized bone particles; AC 15: The defects were filled with demineralized bone particles of citric acid for 15 seconds; AC 30: defects were filled with demineralized bone particles of citric acid for 30 seconds; AC 60: The defects were filled with demineralized bone particles of citric acid for 60 seconds; TCN 15: defects were filled with demineralized bone particles tetracycline for 15 seconds; TCN 30: defects were filled with demineralized bone particles tetracycline for 30 seconds; TCN 60: defects were filled with demineralized bone particles tetracycline for 60 seconds. aeutanasia animals was performed at 7, 30 and 60 days for performing computed microtomography and histomorphometric analysis to assess the area, bone volume and density of the defects after the defined experimental times. At 7 days, it was not expected significant formation of bone tissue, but surprisingly, samples demineralized with citric acid demonstrated earliness in the production of regenerative events already during this period. During the experimental periods was possible to observe how the specimens treated with citric acid showed increased bone formation in defects when compared to controls and to groups where employees tetracycline. Effect probably related to the disposal of the mineral part of bone and release of bone morphogenetic proteins and factors of growth, released from the bone matrix concluded that the demineralisation by citric acid particulate autogenous bone graft in critical defects caused greater area, volume formation and bone density than tetracycline demineralization and demineralization that do not. Observing better results at 15 and 30 seconds demineralization.

O processo de desmineralização óssea tem sido mostrado vantajoso em procedimentos de enxertia óssea empregando blocos osseos, porem a sua utilização na periodontia em enxertos osseos autógenos particulados não esta ainda descrita na literatura. De acordo com a literatura é possível observar que existem diferentes agentes demineralizantes na pratica clinica os quais podem ser empregados no processo de desmineralização óssea, razão pela qual este estudo teve como objetivo comparar dois diferentes agentes desmineralizantes de enxertos ósseos autógenos particulados (ácido cítrico pH1 a 50% e tetraciclina hidroclorada a 50mg/ml) em diferentes tempos de aplicação, quanto ao efeito produzido no reparo de defeitos críticos em calvária de ratos. Foram utilizados 120 ratos adultos machos com aproximadamente 4 meses de vida. Neste estudo foi utilizado o modelo de defeito crítico de 8 mm, esses animais foram divididos em 8 grupos de estudo formados por 15 animais (5 em cada período experimental): CN (controle negativo): os defeitos permaneceram sem enxerto; CP (controle positivo): os defeitos foram preenchidos por osso particulado não desmineralizado; AC 15: os defeitos foram preenchidos com osso particulado desmineralizado por ácido cítrico durante 15 segundos; AC 30: os defeitos foram preenchidos com osso particulado desmineralizado por ácido cítrico durante 30 segundos; AC 60: os defeitos foram preenchidos com osso particulado desmineralizado por ácido cítrico durante 60 segundos; TCN 15: os defeitos foram preenchidos com osso particulado desmineralizado por tetraciclina durante 15 segundos; TCN 30: os defeitos foram preenchidos com osso particulado desmineralizado por tetraciclina durante 30 segundos; TCN 60: os defeitos foram preenchidos com osso particulado desmineralizado por tetraciclina durante 60 segundos. Foi realizada aeutanasia dos animais aos 7, 30 e 60 dias para realização de microtomografia computadorizada e analise histomorfometrica, para avaliar a área, volume e densidade óssea nos defeitos após os tempos experimentais definidos. Aos 7 dias, não era esperada formação de tecido ósseo significante, mas surpreendentemente, os espécimes desmineralizados com ácido cítrico demonstraram precocidade na produção de eventos regenerativos já nesse período. Durante os períodos experimentais foi possível observar como os espécimes tratados com acido cítrico apresentavam maior formação óssea nos defeito quando comparados com os controles e com os grupos onde empregados tetraciclina. Efeito provavelmente relacionado com a eliminação da parte mineral do osso e liberação de Proteinas morfogeneticas ósseas e fatores de crescimentos, liberados a partir da matriz ossea Concluiu-se que a desmineralização com ácido cítrico do osso autógeno particulado enxertado em defeitos críticos promoveu maior área, volume e densidade de formação óssea do que a desmineralização com tetraciclina e do que a não desmineralização. Observando-se melhores resultados aos 15 e 30 segundos de desmineralização. / Bone demineralization process has been shown useful in bone grafting procedures using onlay bone grafting, however its use in periodontics in bony autogenous particulate graft is not yet described in the literature. According to the literature you can see that there are different demineralizantes agents in clinical practice which can be used in bone demineralization process, which is why this study was to compare two different demineralization agents of bone autogenous particulate graft (citric acid pH1 the 50% tetracycline Hydrochloride and 50mg / ml) in different application time, the effect produced in the repair of critical defects in rat calvarium. 120 adult male rats with approximately 4 months of age were used. In this study we used the 8mm critical defect model, the animals were divided into 8 study groups consisting of 15 animals (5 in each experimental period): CN (negative control): the defect remained free graft; CP (positive control): the defects were filled by nondemineralized bone particles; AC 15: The defects were filled with demineralized bone particles of citric acid for 15 seconds; AC 30: defects were filled with demineralized bone particles of citric acid for 30 seconds; AC 60: The defects were filled with demineralized bone particles of citric acid for 60 seconds; TCN 15: defects were filled with demineralized bone particles tetracycline for 15 seconds; TCN 30: defects were filled with demineralized bone particles tetracycline for 30 seconds; TCN 60: defects were filled with demineralized bone particles tetracycline for 60 seconds. aeutanasia animals was performed at 7, 30 and 60 days for performing computed microtomography and histomorphometric analysis to assess the area, bone volume and density of the defects after the defined experimental times. At 7 days, it was not expected significant formation of bone tissue, but surprisingly, samples demineralized with citric acid demonstrated earliness in the production of regenerative events already during this period. During the experimental periods was possible to observe how the specimens treated with citric acid showed increased bone formation in defects when compared to controls and to groups where employees tetracycline. Effect probably related to the disposal of the mineral part of bone and release of bone morphogenetic proteins and factors of growth, released from the bone matrix concluded that the demineralisation by citric acid particulate autogenous bone graft in critical defects caused greater area, volume formation and bone density than tetracycline demineralization and demineralization that do not. Observing better results at 15 and 30 seconds demineralization.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This research was aimed at evaluating the mononuclear stem cells (MSC) use in experimental bone defect healing, as an alternative to the conventional methods, analyzing the healing speed, and the presence of these cells in the new-born tissue. The bone marrow (BM) was collected from 18 dogs, counted and morphometrically analyzed, through manual count and myelogram. The dogs were separated in three groups (G1, G2, G3) of six animals. A surgical tibial bone defect was made then, in each dog and the wound was treated with gelatin sponge and physiologic solution (G1), gelatin sponge and processed bone marrow (G2) and gelatin sponge, processed BM and morphogenetic bone protein (G3). The healing was then evaluated through radiographic study and the presence of MSC was identified through Qtracker nanocrystal labeler and fluorescent light microscopy one week after the surgery. Cells from the bone lineage were found among the labeled cells. The radiographic evaluations demonstrate speeding in bone growth in the groups G2 and G3, and were significant statistically differences between the G1 and G3 in all studied periods and between G1 and G2 at the 30 and 45 days period. The supplemented or not-supplemented with rhBMP-2 adult mononuclear stem cells use are favorable alternatives to the speed the healing process of acute dog tibial experimental defects. / Nesta pesquisa foi abordada a utilização de células-tronco mononucleares (CTM) na cicatrização de defeito ósseo experimental, como alternativa aos métodos convencionais, analisando-se a velocidade da cicatrização, além da presença dessas células no tecido neoformado. Foram utilizados 18 cães, separados em três grupos de seis, e de cada animal foram colhidas células da medula óssea (MO), contadas e analisadas para morfometria, através da contagem manual e mielograma. Um defeito ósseo tibial foi então criado cirurgicamente, e a lesão tratada com esponja de gelatina embebida em solução fisiológica (G1), esponja de gelatina embebida com aspirado de medula óssea processado (G2) e esponja de gelatina embebida com aspirado de MO processado e proteína óssea morfogenética (G3). A cicatrização foi então avaliada por estudos radiográficos e a presença de CTM foi identificada através de marcadores nanocristais Qtracker em microscopia com luz fluorescente uma semana após a intervenção cirúrgica. Entre as células identificadas pelo marcador, foram encontradas células da linhagem óssea. As avaliações radiográficas demonstram crescimento ósseo acelerado nos grupos G2 e G3, e estatisticamente houve diferenças significativas entre o G1 e G3 em todos os tempos estudados e entre G1 e G2 nos tempos de 30 e 45 dias. A utilização de células-tronco mononucleares adultas suplementadas ou não com rhBMP-2 são alternativas favoráveis ao crescimento ósseo em defeitos experimentais agudos de tíbia de cães.

Submitted by Maria Anália Conceição (marianaliaconceicao@gmail.com) on 2016-06-23T11:30:40Z No. of bitstreams: 1 Publico-NOVO-03.pdf: 1761339 bytes, checksum: 1ec50dfc6d5850f1b16cf857655b8101 (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Anália Conceição (marianaliaconceicao@gmail.com) on 2016-06-23T11:32:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Publico-NOVO-03.pdf: 1761339 bytes, checksum: 1ec50dfc6d5850f1b16cf857655b8101 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-23T11:32:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Publico-NOVO-03.pdf: 1761339 bytes, checksum: 1ec50dfc6d5850f1b16cf857655b8101 (MD5) Previous issue date: 2014 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: A Engenharia Tecidual (ET) tem como objetivo a fabricação de órgãos e tecidos. Preconiza-se o uso de células autólogas para evitar a incompatibilidade imunológica, porém, pela escassez do número de células obtidas na fonte celular, muitas passagens se tornam necessárias para atingir um número adequado de células. As culturas primárias freqüentemente sofrem diferenciação indesejada, modificando o comportamento e o destino celular. O uso de enzimas proteolíticas durante as passagens celulares é potencialmente lesivo à fisiologia celular, todavia pouca relevância tem sido dada a este aspecto na ET. Essas enzimas, ao digerir a matriz extracelular (MEC), também alteram proteínas de superfície (PS), interferindo na interação célula-célula (ICC). Consequentemente podem alterar a sinalização celular, a expressão gênica, o comportamento e o destino. Objetivo: Avaliar a expressão gênica na via de sinalização TGFβ/BMP, em matriz extracelular e em moléculas de adesão, das células tronco mesenquimais de polpa dental humana (hDPSC) obtidas diretamente do tecido e sob cultura primária até a terceira passagem. Métodos: Foi analisada a expressão gênica por qRT-PCR array da via de sinalização TGFβ/BMP, matriz extracelular e moléculas de adesão após três passagens celulares na cultura primária de hDPSC. Resultados: Os genes COL16A1(p=0,045), TIMP1(p=0,003), THBS1(p=0,027), TGFBI(p=0,001), ITGA8(p=0,002), FN1(p=0,035), CD44(p=0,046),TSC22D1(p=0,026) e RPL13A(p=0,017) tiveram sua expressão aumentada e os genes NCAM1(p=0,047), BGLAP(p=0,037) e ID1(p=0,027) tiveram sua expressão diminuída em relação às células de tecido de origem. Conclusão: Houve alteração da expressão gênica na cultura celular de hDPSC após três passagens. Porém, um gene solitariamente pode não exercer função chave na diferenciação de células, influenciada pela relação com a MEC e com o ambiente extracelular. O controle por modulação da diferenciação celular representa um aspecto importante no desenvolvimento da ET. / Introduction: Tissue Engineering (TE) aims to manufacture organs and tissues and advocates the use of autologous cells to avoid immune incompatibility. However, a longer culture time is necessary to achieve that purpose. Primary cultures often suffer undesirable differentiation, modifying behavior and cell fate. The use of proteolytic enzymes during cell passages is potentially harmful to cell physiology, but little importance has been given to this aspect in ET. These enzymes which digest the extracellular matrix (ECM) also alter surface proteins (SP) and interfere with cell-cell interactions (ICC). Consequently, may alter cell signaling by modifying gene expression, behavior and cell fate. Objective: To assess gene expression in the signaling TGFβ / BMP pathway, in extracellular matrix and in adhesion molecules, of mesenchymal human dental pulp cells from tissue and cultured until third passage. Methods: We had evaluated gene expression by qRT-PCR array of signaling TGFβ / BMP pathway, in extracellular matrix and in adhesion molecules, of mesenchymal cells from primary and third passage cultured human dental pulp Results: COL16A1(p=0,045), TIMP1(p=0,003), THBS1(p=0,027), TGFBI(p=0,001), ITGA8(p=0,002), FN1(p=0,035), CD44(p=0,046),TSC22D1(p=0,026) and RPL13A(p=0,017) genes had their expression increased and NCAM1(p=0,047), BGLAP(p=0,037) and ID1(p=0,027) genes had reduced expression compared to primary cells. Conclusion: There were modifications in gene expression after three passages. However, a single gene could not be enough to exert a key role in cell differentiation that is broadly affected by its relationship with the ECM and extracellular environment. The control by modulation of cellular differentiation, is an important aspect in the development of ET. / FAPESP: 2013/00288-4