Neste trabalho foi feito um estudo sistemático para avaliar a influência dos principais parâmetros associados à análise direta de sólidos por espectrometria de absorção atômica com atomização eletrotérmica. Os parâmetros avaliados foram secagem, moagem, tamanho de partículas, massa de amostra e homogeneidade na determinação de Al, As, Cd, Cr, Cu, Pb, Ni e Zn em fígado e músculo bovino. Além desses estudos foram desenvolvidos métodos para a determinação de As, Cd, Cr e Pb em cabelo e de As, Cd, Cu, Cr, Ni, Pb e Zn em material particulado urbano. A adequada otimização dos programas de aquecimento e o uso de modificadores químicos permitiram que, na maioria dos casos, a calibração do espectrômetro fosse feita com soluções de referência. O fígado e o músculo bovino foram preparados seguindo diferentes procedimentos de secagem: (1) liofilização e (2) secagem em forno de microondas doméstico seguida pela estufa a 60 oC até atingir massa constante. O moinho de bolas e o moinho criogênico foram utilizados para a moagem. Todos os materiais apresentaram homogeneidade adequada para serem aplicados em análises de massas inferiores a 100 µg, exceto o Pb, cuja massa mínima foi de 600 µg. O fígado seco em forno de microondas seguida pela estufa e moído em moinho criogênico foi o que apresentou a melhor homogeneidade, podendo ser aplicado para análise de massas em torno de 30 µg, no caso da determinação de Cu. Devido à capacidade da SS-ETAAS analisar diminutas massas de amostras, foi possível avaliar a distribuição de Cd e Pb ao longo do fio de cabelo. Esse estudo mostrou que, por meio desse tipo de análise, é possível obter informações a respeito dos episódios do passado relevantes à saúde, mesmo que a ação já tenha cessado, podendo ser utilizado em investigações forenses. O trabalho envolvendo a análise de material particulado urbano faz parte do processo de certificação de um novo material de referência certificado para microanálise (SRM 1648a), em processo de produção no National Institute of Standard and Technology (NIST). Resultados da avaliação de homogeneidade indicaram que massas de amostra inferiores a 50 µg podem ser utilizadas. / In this work, a systematic study to evaluate the influence of the main parameters associated to solid sampling electrothermal atomic absorption spectrometry was done. The parameters evaluated were the sample drying and grinding, the particle size, the sample size and the homogeneity and their influence on Al, As, Cd, Cr, Cu, Pb, Ni and Zn determinations in bovine liver and muscle. Beyond these studies, methods for As, Cd, Cr and Pb determinations in hair and As, Cd, Cu, Cr, Ni, Pb and Zn determinations in urban particle matter were developed. The heating program optimization and the adoption of some strategies such as the use of chemical modifier allowed, in the most of cases, analyzing solid samples against aqueous calibration. Bovine liver and muscle were prepared following different drying procedures: (1) freeze-drying process and (2) drying in a domestic microwave oven followed by drying in a stove at 60oC until constant mass. Ball and cryogenic mills were used to grind the samples. All prepared materials presented good homogeneity to be applied in analysis of sample mass size lower than 100 µg, except to Pb. In this case, the minimal sample mass size was 600 µg. Bovine liver dried in a microwave oven followed by drying in a stove and ground in a cryogenic mill presented the best homogeneity. For Cu determination, 30 µg of this material could be used. Due to the capacity of SS-ETAAS in analyzing very low sample mass size, it was possible to evaluate the Cd and Pb distribution through the extent of the hair. This study showed that it is possible to retrieve information about past health issues, even if its cause has ceased. In this way, it can be applied in a forensic science. The urban particle matter analysis is related to certification process of the new certified reference material for microanalysis (SRM 1648a) in production process at National Institute of Standard and Technology (NIST). Results of homogeneity evaluation showed sample mass size lower than 50 µg can be used without affecting the precision and accuracy of the results.

Neste trabalho foi feito um estudo sistemático para avaliar a influência dos principais parâmetros associados à análise direta de sólidos por espectrometria de absorção atômica com atomização eletrotérmica. Os parâmetros avaliados foram secagem, moagem, tamanho de partículas, massa de amostra e homogeneidade na determinação de Al, As, Cd, Cr, Cu, Pb, Ni e Zn em fígado e músculo bovino. Além desses estudos foram desenvolvidos métodos para a determinação de As, Cd, Cr e Pb em cabelo e de As, Cd, Cu, Cr, Ni, Pb e Zn em material particulado urbano. A adequada otimização dos programas de aquecimento e o uso de modificadores químicos permitiram que, na maioria dos casos, a calibração do espectrômetro fosse feita com soluções de referência. O fígado e o músculo bovino foram preparados seguindo diferentes procedimentos de secagem: (1) liofilização e (2) secagem em forno de microondas doméstico seguida pela estufa a 60 oC até atingir massa constante. O moinho de bolas e o moinho criogênico foram utilizados para a moagem. Todos os materiais apresentaram homogeneidade adequada para serem aplicados em análises de massas inferiores a 100 µg, exceto o Pb, cuja massa mínima foi de 600 µg. O fígado seco em forno de microondas seguida pela estufa e moído em moinho criogênico foi o que apresentou a melhor homogeneidade, podendo ser aplicado para análise de massas em torno de 30 µg, no caso da determinação de Cu. Devido à capacidade da SS-ETAAS analisar diminutas massas de amostras, foi possível avaliar a distribuição de Cd e Pb ao longo do fio de cabelo. Esse estudo mostrou que, por meio desse tipo de análise, é possível obter informações a respeito dos episódios do passado relevantes à saúde, mesmo que a ação já tenha cessado, podendo ser utilizado em investigações forenses. O trabalho envolvendo a análise de material particulado urbano faz parte do processo de certificação de um novo material de referência certificado para microanálise (SRM 1648a), em processo de produção no National Institute of Standard and Technology (NIST). Resultados da avaliação de homogeneidade indicaram que massas de amostra inferiores a 50 µg podem ser utilizadas. / In this work, a systematic study to evaluate the influence of the main parameters associated to solid sampling electrothermal atomic absorption spectrometry was done. The parameters evaluated were the sample drying and grinding, the particle size, the sample size and the homogeneity and their influence on Al, As, Cd, Cr, Cu, Pb, Ni and Zn determinations in bovine liver and muscle. Beyond these studies, methods for As, Cd, Cr and Pb determinations in hair and As, Cd, Cu, Cr, Ni, Pb and Zn determinations in urban particle matter were developed. The heating program optimization and the adoption of some strategies such as the use of chemical modifier allowed, in the most of cases, analyzing solid samples against aqueous calibration. Bovine liver and muscle were prepared following different drying procedures: (1) freeze-drying process and (2) drying in a domestic microwave oven followed by drying in a stove at 60oC until constant mass. Ball and cryogenic mills were used to grind the samples. All prepared materials presented good homogeneity to be applied in analysis of sample mass size lower than 100 µg, except to Pb. In this case, the minimal sample mass size was 600 µg. Bovine liver dried in a microwave oven followed by drying in a stove and ground in a cryogenic mill presented the best homogeneity. For Cu determination, 30 µg of this material could be used. Due to the capacity of SS-ETAAS in analyzing very low sample mass size, it was possible to evaluate the Cd and Pb distribution through the extent of the hair. This study showed that it is possible to retrieve information about past health issues, even if its cause has ceased. In this way, it can be applied in a forensic science. The urban particle matter analysis is related to certification process of the new certified reference material for microanalysis (SRM 1648a) in production process at National Institute of Standard and Technology (NIST). Results of homogeneity evaluation showed sample mass size lower than 50 µg can be used without affecting the precision and accuracy of the results.

An affinity column for cathepsin D was prepared making use of the strong affinity of pepstatin for cathepsin D. Pepstatin is an N-acylated pentapeptide from Actinomycetes with the following structure: isovaleryl-L-valyl-L-valyl-4-amino-3-hydroxy-6-methylheptanoyl-L-alanyl-4-amino-3-hydroxy- 6-methyl heptanoic acid. A relatively rapid and efficient method for cathepsin D purification has been developed; Steps include homogenization, ammonium sulfate fractionation, and chromatography on pepstatin-Sepharose column. The final preparation has a specific activity of 38 units/mg. and shows a single protein band on polyacrylamide gel electrophoresis in sodium dodecyl sulfate corresponding to a subunit molecular weight of 42,000. Polyacrylamide gel electrophoresis studies did not reveal any impurities. The proteolytic activity of isolated cathepsin D on bovine myofibrils and myosin was examined at pH 3.80, 37 °C. The heavy chains of myosin, as well as other smaller regulatory proteins of the myofibrils were degraded. Actin was degraded less rapidly than myosin heavy chain. Degradation became more extensive when the substrate-enzyme incubation time was increased.