Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Los miofibroblastos cardíacos, son células diferenciadas desde fibroblastos por efecto del TGF-β1 durante 84 horas, y secretan una gran variedad de mediadores inflamatorios, citoquinas, y proteínas de la matriz extracelular (colágeno tipo I, fibronectina, etc.). Además, presentan una amplia variedad de receptores, entre ellos receptores de angiotensina y bradicinina. Se han descritos 2 subtipos de receptores de bradicininas, B2R, receptor clásico y constitutivo y B1R, receptor inducible en condiciones de exposición a citoquinas inflamatorias y daño tisular. En este trabajo se estudió la presencia de B1R en miofibroblastos, y tras su estimulación por agonistas específicos, su efecto sobre proteínas de la matriz extracelular.Nuestros resultados mostraron que el receptor B1 de bradicininas está presente en los miofibroblastos, mientras que está ausente en fibroblastos cardiacos. El receptor B1, presente en miofibroblastos, es funcional ya que DAKD y DABK agonistas selectivos B1R, activaron de forma temprana y transitoria la vía de señalización que aumenta los niveles intracelulares de Ca2+. En respuesta a la activación de B1R con DAKD se observó en forma tardía una disminución en el colágeno soluble secretado al medio de cultivo, siendo este evento independiente de la actividad de MMP-2 y de la viabilidad celular. Últimamente se ha planteado un nuevo mecanismo de acción de iECAs en la cual enalaprilato (molécula activa del enalapril) y captopril, pero no lisinopril, activan al B1R. Nuestros resultados indican que captopril activó B1R, produciendo un aumento temprano y transitorio de Ca2+ intracelular. Al igual que DAKD, captopril redujo la secreción de colágeno en miofibroblastos, independiente de la acción de MMP-2 y de la viabilidad celular. Captopril y lisinopril también redujeron el colágeno secretado en fibroblastos cardiacos, y debido a la ausencia de B1R en fibroblastos, nuestros resultados sugieren que ello se debería a la capacidad de los iECAs de bloquear la degradación de bradicininas secretadas en forma endógena, las que activarían B2R, induciendo una disminución en la secreción de colágeno soluble. Estos resultados agregan un nuevo mecanismo por el cual los fármacos iECA serían capaces de modular el remodelamiento cardiaco en pacientes hipertensos y/o con infarto cardiaco

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Los fibroblastos cardiacos son las principales células encargadas de la reparación y mantenimiento de la matriz extracelular del tejido cardiaco, aunque en los últimos años se ha determinado que pueden secretar y responder a citoquinas y quimioquinas pro inflamatorias. También se ha determinado que poseen el receptor TLR4, el cual es capaz de responder a PAMPS (como LPS), sugiriendo así que el fibroblasto cardiaco tiene un rol clave en el proceso inflamatorio cardiaco gatillado por un daño o patógeno. Las cininas son péptidos pro inflamatorios asociados principalmente a la vasodilatación y a la formación de edema cuando se unen a sus receptores en el sitio de injuria. Se ha demostrado que el fibroblasto cardiaco posee de forma constitutiva receptor B2 (cuyo ligando es BK), no así receptor B1 (cuyo ligando es DAKD), ya que este último es inducible en este fenotipo celular. Se ha descrito en células endoteliales que tanto LPS, así como también las cininas, son capaces de aumentar los niveles proteicos de moléculas de adhesión celular (ICAM-1 y VCAM-1), favoreciendo así la adhesión de células del sistema inmune al sitio de daño. Sin embargo, se desconoce si los fibroblastos cardiacos tratados de manera conjunta con cininas y LPS modulan la expresión de estas moléculas de adhesión. Mediante análisis de inmunowestern blot se demostró que LPS aumentó considerablemente los niveles proteicos de las moléculas de adhesión desde las 8 hasta las 48 h, mientras que no se observó efecto con BK o DAKD, sugiriendo así que el efecto pro inflamatorio de las cininas no favorecería de manera directa la adhesión de células del sistema inmune a los fibroblastos cardiacos. Por otro lado, se determinó que BK aumentó de forma significativa los niveles proteicos de TLR4 a las 72 h y a su vez que disminuyó los niveles basales de -SMA en fibroblasto cardiaco. También se determinó que el pre tratamiento por 48 h con BK moduló negativamente la acción de LPS sobre VCAM-1 a las 24 h. Estos resultados en conjunto indican que el pre tratamiento de fibroblastos cardiacos con BK es capaz de evitar la diferenciación de estos a miofibroblastos, favoreciendo así una respuesta pro inflamatoria y antifibrótica por parte de estos / Cardiac fibroblasts are the main cells responsible for the repair and maintenance of cardiac matrix. Although in the last years has been determined to be able of secreting and also respond to proinflammatory cytokines and chemokines (IL-1 and TNF-). Also it has been determined the presence of TLR4, which is able to respond to PAMPs (such as LPS), suggesting that cardiac fibroblast has a key role in cardiac inflammatory process triggered by damage or pathogen. Kinins are proinflammatory peptides mainly associated to vasodilation and edema formation when are bind to their receptors at the site of injury. It has been shown that cardiac fibroblast express constitutively B2 receptor (whose ligand is BK), not B1 receptor (whose ligand is DAKD), since the latter is inducible in this cell phenotype. It has been described that LPS and kinins are able to increase protein levels of celular adhesion molecules (ICAM-1 and VCAM-1) in endothelial cells, thus enhancing the adhesion of immune cells to the site of injury. However, it is unknown whether cardiac fibroblasts treated together with kinins and LPS modulate the expression of these adhesion molecules. Through analysis of immuno western blot it was determined that LPS is able to significantly increase the protein levels of adhesion molecules from 8 to 48 hours, not BK and DAKD, thus suggesting that the proinflammatory effect of kinins are not directly linked to the adhesion of immune system cells. Furthermore, it was determined that BK can significantly increase TLR4 protein levels at 72 hours and in turn is capable of decreasing basal levels of -SMA in cardiac fibroblast. It was also determined that pretreatment for 48 hours with BK is able to modulate negatively the action of LPS on VCAM-1 at 24 hours. These results together indicate that pretreatment of cardiac fibroblasts with BK is capable of preventing differentiation of these to myofibroblast, thus supporting a proinflammatory response from these